本發(fā)明具體涉及臘梅屬植物及其提取物在制備針對偽狂犬病毒的藥物的應(yīng)用，所述的臘梅屬植物包括柳葉臘梅、浙江臘梅和山臘梅，屬于制藥
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：1.臘梅柳葉臘梅、山臘梅和浙江臘梅同屬蠟梅科臘梅屬植物，我國特產(chǎn)，主要分布于我國亞熱帶季風(fēng)濕潤氣候區(qū)域的鄂、湘、川、渝、貴、豫、浙、贛、皖等省。蠟梅屬柳葉蠟梅(chimonanthussalicifoliuss.y.hu)、浙江蠟梅(chimonanthuszhejiangensism.c.liu)或山臘梅(chimonanthusnitensoliv.)等為畬族民間習(xí)用藥,從北宋年間起其干燥葉就作為服用的食涼茶，近千年來用于治療和預(yù)防感冒?，F(xiàn)代研究又有進(jìn)展，其中，山臘梅提取物制備的顆粒制劑，有良好治療/預(yù)防感冒功效，已在市場銷售；柳葉蠟梅和浙江臘梅已載入2005和2015年的《浙江省中藥炮制規(guī)范》，主要成分為揮發(fā)油，含有1.8-桉葉素、β-蒎烯、α-萜品烯醇、芳樟烯、欖香醇等40多種成分。傳統(tǒng)用途：性味微苦，辛，涼，歸肺、脾、胃經(jīng)，用于治療感受風(fēng)寒而引起肚脹、肚痛腹瀉，因飲食不當(dāng)引起的消化不良、腹部脹痛和小兒疳積等癥狀。浙江臘梅為臘梅科臘梅屬常綠灌木，產(chǎn)于浙江。群體遺傳學(xué)研究發(fā)現(xiàn)浙江臘梅和山臘梅相對近緣，山臘梅在湖南、福建、廣西貴州等地均有分布，而浙江臘梅未見分布，浙江臘梅僅分布于浙江龍泉，因此，結(jié)合形態(tài)、分子及地理分布特征，我們認(rèn)為浙江蠟梅是山蠟梅分布區(qū)的最東邊界的一個(gè)群體，可能只是山蠟梅的一種生態(tài)型(ecotype)，而不是獨(dú)立的分類單位。山臘梅(chimonanthusnitens)為常綠灌木，又稱之為毛山茶、巖馬桑(《新華本草綱要》)、亮葉臘梅(《經(jīng)濟(jì)植物手冊》)、香風(fēng)茶(《安徽中草藥》)、野臘梅(《云南中藥資源名錄》)。產(chǎn)于安徽、浙江、江蘇、江西、福建、湖北、湖南、廣西、云南、貴州和陜西等省區(qū)。民間使用歷史悠久，具有防治感冒、痰喘、咳嗽、慢性支氣管炎、細(xì)菌感染、發(fā)熱疼痛、炎癥、蚊蟲叮咬及高血壓、高血脂等作用，亦有抗腫瘤、防治心腦血管疾病、改善微循環(huán)和抗衰老、抗氧化等作用，另外還具有調(diào)節(jié)人體機(jī)能、增強(qiáng)體質(zhì)、提高機(jī)體免疫力、減少體脂、減肥等保健功能。該植物主產(chǎn)于江西德興大茅山區(qū)、婺源懷玉山區(qū)、安徽徽州齊云山一帶，在浙江、福建、陜西等省亦有分布，資源較豐富。山臘梅揮發(fā)油中主要成分是烯烴、醇類和烷酸類物質(zhì)，分別為脫氫香橙烯、△-杜松烯、e-環(huán)氧金合歡烯、石竹烯、(-)-氧化石竹烯、α-杜松醇(7.08％)、(+)-匙葉桉油烯醇、杉木醇、十六烷酸。欖香烯等倍半萜類合物具有較好的抗腫瘤活性，黃酮類成分具有防治心腦血管疾病、改善微循環(huán)和抗衰老等多種功效。山臘梅藥片的溫?zé)嵴舭l(fā)物可抑制病毒，山臘梅揮發(fā)油可抑制和殺滅病毒。1982年，《江西省藥品標(biāo)準(zhǔn)》就記載了“山臘梅片”和“山臘梅沖劑”，作為防治感冒和流行性感冒制劑在臨床上應(yīng)用，市售良好。與山臘梅同屬的柳葉蠟梅和浙江臘梅雖在民間使用普遍，但在市場上還未有適合的制劑。藥理研究中柳葉蠟梅未見抗偽狂犬病毒的研究文獻(xiàn)報(bào)道。co2超臨界萃取技術(shù)具有低溫、快速、效率高、無污染、提取物純度高、易分離等優(yōu)點(diǎn)，適用于揮發(fā)油的提取。賀建云采用超臨界co2萃取小試設(shè)備，不加夾帶劑提取柳葉蠟梅中物質(zhì)，總收率為3.68％，但未見超臨界二氧化碳萃取柳葉蠟梅物質(zhì)的應(yīng)用報(bào)道。本發(fā)明在已有研究的基礎(chǔ)上，采用新的未見報(bào)道的提取方案，優(yōu)化已有制備柳葉臘梅提取物的工藝條件、參數(shù)以及研究柳葉臘梅新提取物的新用途；研究適合柳葉蠟梅提取物的軟膠囊、滴丸等制劑；為柳葉蠟梅提取物用于感染偽狂犬病毒的殺滅、治療和預(yù)防，提供有益支持。2.偽狂犬病偽狂犬病(porcinepseudorabies)是由偽狂犬病毒(pseudorabiesvirus，prv)引起的發(fā)生在多種家畜和野生動物體內(nèi)的一種急性傳染病。發(fā)熱、奇癢、腦脊髓炎是主要的發(fā)病癥狀。成年豬主要表現(xiàn)為隱形感染，妊娠母豬感染后主要表現(xiàn)為流產(chǎn)、死胎和呼吸系統(tǒng)疾病癥狀，無奇癢。新生豬仔感染后除了出現(xiàn)神經(jīng)癥狀外還可侵害消化系統(tǒng)。本病呈世界性分布。豬是該病毒的主要宿主、長期儲存者和排毒者，也是重要的病毒傳播者。豬偽狂犬病毒給豬養(yǎng)殖業(yè)造成的損害僅次于豬瘟，每年會有數(shù)十億美元的經(jīng)濟(jì)損失。1960年以后該病已遍及全世界50多個(gè)國家。我國目前有20多個(gè)省市發(fā)現(xiàn)了該病，并且呈現(xiàn)不斷蔓延擴(kuò)大的趨勢。目前針對該病沒有特效藥，只能用疫苗進(jìn)行預(yù)防，一旦該病在集約化豬場開始流行將會對豬養(yǎng)殖業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損害。另外，偽狂犬病毒也會感染雞、貓、狗、牛等動物，而現(xiàn)有疫苗只對豬感染有預(yù)防作用，所以，開發(fā)針對該病的有效藥迫切而急需。本發(fā)明中的臘梅提取物，不僅可以直接體外殺滅偽狂犬病毒，也可阻斷該病毒侵染細(xì)胞和抑制病毒在細(xì)胞中復(fù)制擴(kuò)增，其中殺滅率可達(dá)99％以上，阻斷率和抑制率接近50％，具有潛在的開發(fā)為偽狂犬病毒消毒劑和體內(nèi)用藥制劑的價(jià)值。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：發(fā)明概述本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種新的抗偽狂犬病毒的藥物，具體而言，本發(fā)明提供了一種臘梅屬植物、臘梅屬植物提取物在制備抗偽狂犬病毒的藥物中的應(yīng)用。所述的臘梅科臘梅屬植物包括：柳葉蠟梅或浙江臘梅或山臘梅。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述的提取物為以下一種或多種：(1)水提物；(2)醇水混合提取物；(3)水蒸氣蒸餾揮發(fā)油；(4)超臨界二氧化碳萃取。本發(fā)明第二方面提供了上述臘梅屬植物提取物的制備方法。本發(fā)明第三方面公開含有臘梅屬植物提取物的制劑，所述的藥物與藥學(xué)上接受的輔料制成藥劑學(xué)上接受的口服制劑。本發(fā)明第四方面公開了浙江臘梅提取物用于(1)治療家畜、家禽和伴侶動物、野生動物、鳥類的細(xì)菌與病毒等微生物感染的疾?。?2)畜牧飼料與添加劑；(3)消殺劑。發(fā)明詳述本發(fā)明第一方面提供了一種臘梅屬植物、臘梅屬植物提取物在制備抗偽狂犬病毒的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明中所述的藥材或原藥材是指臘梅屬植物，具體包括柳葉臘梅、浙江臘梅、山臘梅。本發(fā)明中所述的生藥也是指臘梅屬植物，具體包括柳葉臘梅、浙江臘梅、山臘梅。本發(fā)明的臘梅屬植物包括臘梅屬植物的鮮品或干品；臘梅屬植物的藥用部位選自臘梅屬植物的全株、地上部分、地下部分、莖、莖皮、花、葉、種子或任意組合；優(yōu)選的藥用部位選自臘梅屬植物的地上部分、莖、莖皮、葉或任意組合；更優(yōu)選的藥用部位選自臘梅屬植物的莖或葉；最優(yōu)選的藥用部位選自臘梅屬植物的葉。本發(fā)明的第二方面提供了臘梅屬植物提取物的制備方法。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述的臘梅屬植物提取物為以下用水提、醇提、水蒸氣蒸餾及超臨界二氧化碳提取一種或多種：(1)水提物；(2)醇提物；(3)水蒸氣蒸餾揮發(fā)油；(4)超臨界二氧化碳提取物。為了加快提取速度，提高提取收率，可以對臘梅屬原藥材進(jìn)行粉碎，粉碎后的平均粒徑優(yōu)選10-80目，更優(yōu)先是20-65目，最優(yōu)選是30-50目。本發(fā)明提供的提取物的第一種制備方法：所述提取物是按照包括如下步驟制備：原藥材臘梅屬植物加入溶劑提取，過濾并濃縮濾液，干燥獲得。所述的溶劑：本領(lǐng)域常用的溶劑均可以用于本發(fā)明。優(yōu)選溶劑水和c1-c5的醇類。c1-c5的醇類選自甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇或其混合物。選自水、無水乙醇、乙醇水溶液；更優(yōu)選溶劑選自乙醇水溶液。乙醇或乙醇水溶液和其他溶劑相比，具有低毒，防腐，污染小，價(jià)格低等優(yōu)點(diǎn)，更適合于本發(fā)明應(yīng)用于醫(yī)藥產(chǎn)品工業(yè)化大生產(chǎn)。乙醇水溶液的濃度(乙醇水溶液中含有的乙醇的體積百分比)：優(yōu)選30％-100％的乙醇水溶液，更優(yōu)選50％-95％的乙醇水溶液，進(jìn)一步優(yōu)選優(yōu)選60％-80％的乙醇水溶液，最優(yōu)選75％的乙醇水溶液。溶劑的量是指提取每公斤原藥材所用的溶劑量，即提取每公斤藥材計(jì)使用溶劑的重量(單位kg)或體積(單位l)。溶劑用量是原藥材用量的2-30倍；更優(yōu)選5-16倍；進(jìn)一步優(yōu)選6-15倍；最優(yōu)選8-10倍。提取的溫度：優(yōu)選是室溫到溶劑回流的溫度；更優(yōu)選是40℃-溶劑回流的溫度；進(jìn)一步優(yōu)選是50℃-溶劑回流的溫度；最優(yōu)選是溶劑回流的溫度。提取的次數(shù)：可以是1～5次；優(yōu)選是2～3次。提取的時(shí)間：每次0.5～5小時(shí)；優(yōu)選每次0.5～3小時(shí)；更優(yōu)選每次1～3小時(shí)。濃縮的溫度：可以是55～90℃；優(yōu)選62～80℃；更優(yōu)選65～75℃。濃縮后稠膏的相對密度為1.1～1.5，優(yōu)選1.2～1.4。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述的提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)水提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)3-30倍的水提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)5-16倍的水提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)8-16倍的水提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)乙醇提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)3-30倍的30％-100％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)3-30倍的50％-95％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)3-30倍的65％-80％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)5-15倍的30％-100％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)5-15倍的50％-95％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)5-15倍的60％-80％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)8-10倍的30％-100％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)8-10倍的50％-95％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)8-10倍的60％-80％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是按照包括如下步驟制備：原藥材加入5～30倍(包括5～15倍，包括6～16倍)的水、無水乙醇、乙醇水溶液煎煮和/或回流提取1～5次(包括2～3次)，每次0.5～5小時(shí)(包括0.5～3小時(shí)，包括1～3小時(shí))，過濾并濃縮濾液，干燥獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是按照包括如下步驟制備：原藥材加入5～30倍(包括5～15倍，包括6～16倍)的水、無水乙醇、乙醇水溶液煎煮和/或回流提取1～5次(包括2～3次)，每次0.5～5小時(shí)(包括0.5～3小時(shí)，包括1～3小時(shí))，過濾并合并提取液，經(jīng)濃縮至相對密度為1.1～1.5(包括1.2～1.4)的稠膏，減壓干燥，即得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是按照包括如下步驟制備：原藥材加5～30倍(包括5～15倍，包括6～16倍)的30～99％的乙醇水溶液回流提取1～5次(包括2～3次)，每次0.5～5小時(shí)(包括0.5～3小時(shí)，包括1～3小時(shí))，過濾并合并提取液，60～90℃(包括65～75℃)濃縮至相對密度為1.1～1.5(包括1.2～1.4)的稠膏，減壓干燥，即得。本發(fā)明提供的提取物的第二種制備方法：所述提取物是原藥材臘梅屬植物經(jīng)水蒸氣蒸餾并獲得的水蒸氣蒸餾揮發(fā)油。本發(fā)明提供的提取物的第三種制備方法：所述提取物是原藥材經(jīng)超臨界二氧化碳提取并獲得。本發(fā)明的超臨界提取物，其特征在于，所述提取物是原藥材臘梅屬植物經(jīng)二氧化碳超臨界提取，在分離釜中獲得提取物，提取的條件可以是一種或多種，例如：(1)不加夾帶劑的提取物；(2)加夾帶劑的提取物；(3)不加夾帶劑提取后再加夾帶劑的提取物。超臨界二氧化碳提取的條件如下：萃取釜:萃取溫度為30-70℃；優(yōu)選為35-60℃；更優(yōu)選為40-50℃；最優(yōu)選43-47℃。萃取溫度可以選自40℃，42℃，45℃，47℃，50℃。萃取壓力為10-40mpa；優(yōu)選為13-35mpa；優(yōu)選為16-24mpa；更優(yōu)選為18-22mpa。萃取壓力可以選自15mpa，20mpa，20.6mpa，29.6mpa，30mpa。萃取釜可以是1個(gè)或多個(gè)分離釜，例如1個(gè)，2個(gè)，3個(gè)，4個(gè)，5個(gè)或更多。如果是多個(gè)萃取釜的，可以是并聯(lián)或串聯(lián)。為了盡量節(jié)約原藥材的加料和卸料時(shí)間，提高生產(chǎn)效率，優(yōu)選是多個(gè)萃取釜并聯(lián)。在一部分萃取釜加料或卸料的時(shí)候，另外的萃取釜同事進(jìn)行萃取。萃取劑流速：萃取劑二氧化碳的流速會對本發(fā)明的生產(chǎn)效率產(chǎn)生重大的影響。如果二氧化碳的流速過快，二氧化碳和萃取溶質(zhì)不能充分接觸，會降低每體積二氧化碳的萃取效率；如果二氧化碳的流速過慢，會降低單位時(shí)間的生產(chǎn)效率。因此，萃取劑二氧化碳的流速需要一個(gè)合適的流速。萃取劑二氧化碳的流速為每公斤藥材每小時(shí)20-150升(以每公斤藥材每小時(shí)計(jì)，單位為l/h·kg生藥)，即20-150l/h·kg；優(yōu)選的萃取劑二氧化碳的流速為23-125l/h·kg；更優(yōu)選為33-80l/h·kg；進(jìn)一步優(yōu)選為50-70l/h·kg；最優(yōu)選為55-65l/h·kg。萃取劑二氧化碳的流速可以選自23.1l/h·kg；23.8l/h·kg；28.5l/h·kg；32.3l/h·kg；32.8l/h·kg；36.2l/h·kg；38.3l/h·kg；35.3l/h·kg；44.8l/h·kg；50.7l/h·kg；55.4l/h·kg；75.6l/h·kg；82.2l/h·kg。萃取時(shí)間分鐘(min)：30-400min，優(yōu)選120-160min，更優(yōu)選120-160min，最優(yōu)選120-160min。萃取時(shí)間可以是60-70min，70-80min，80-100min，110-120min，120-130min，140-150min，155-165min。例如萃取時(shí)間可以是62min，70min，83min，100min，120min，132min，145min，160min。夾帶劑:本發(fā)明的超臨界提取方案中，可以選擇性的使用夾帶劑或不使用夾帶劑；優(yōu)先是使用夾帶劑。本領(lǐng)域常用的溶劑均可以作為本發(fā)明的夾帶劑。例如本發(fā)明的夾帶劑可以選自：0％-100％v/v的乙醇水溶液、甲醇，乙酸乙酯、丙酮等中至少一種，即作為帶劑的溶劑可以是單一溶劑，或其中任何一種溶劑與另一種、及多種溶劑間的彼此混合溶劑等。本文中100％v/v的乙醇水溶液表示無水乙醇；本文中0％v/v的乙醇水溶液表示沒有醇的水。例如本發(fā)明的夾帶劑可以選自：水、無水乙醇、30％-100％v/v的乙醇水溶液、乙酸乙酯、丙酮。優(yōu)選的夾帶劑選自水、無水乙醇、30％-99％v/v的乙醇水溶液。更優(yōu)選的夾帶劑選自75％-95％v/v的乙醇水溶液。最優(yōu)選的夾帶劑選自95％v/v的乙醇水溶液。夾帶劑的量(以每公斤藥材計(jì)為l/kg，kg/kg；或以每克藥材計(jì)為ml/g，g/g)：夾帶劑的量為0.10-2.5l/kg；；優(yōu)選0.20-1.5l/kg；，更優(yōu)選0.30-0.80l/kg；最優(yōu)選0.40-0.60l/kg；分離釜：分離釜的溫度為25-70℃，優(yōu)選為30-60℃；更優(yōu)選為35-55℃，最優(yōu)選為40-50℃，。分離釜的溫度可以選自35℃，36℃，37℃，38℃，39℃，40℃，41℃，42℃，43℃，44℃，45℃，46℃，47℃，48℃，49℃，50℃，51℃，52℃，53℃，54℃，55℃，56℃，57℃。分離釜的壓力為2-17mpa；優(yōu)選為3-15mpa；更優(yōu)選為4-12mpa；最優(yōu)選為4.5-10mpa。分離釜的壓力可以選自4.65mpa，4.9mpa，5.1mpa，5.2mpa，5.3mpa，5.4mpa，5.5mpa，5.6mpa，5.7mpa，5.8mpa，6mpa，7mpa，8mpa，8.5mpa，9mpa，9.5mpa，10mpa。分離釜可以是1個(gè)或多個(gè)分離釜，例如1個(gè)，2個(gè)，3個(gè)，4個(gè)，5個(gè)或更多。如果是多個(gè)分離釜的，可以是并聯(lián)或串聯(lián)，為了盡量提高提取物的回收率，優(yōu)選是多個(gè)分離釜串聯(lián)。分離釜i壓力和溫度：分離釜i的溫度為30-70℃，優(yōu)選為50-60℃；更優(yōu)選為53-57℃；最優(yōu)選為55℃。分離釜i的溫度可以選自53℃，54℃，55℃，56℃，57℃。分離釜i的壓力為4-17mpa；優(yōu)選為5-15mpa；更優(yōu)選為6-12mpa；最優(yōu)選為8-10mpa。分離釜i的壓力可以選自8mpa，8.5mpa，9mpa，9.5mpa，10mpa。分離釜ii壓力和溫度：分離釜ii的溫度為25-50℃，優(yōu)選為30-45℃；更優(yōu)選為32-42℃；最優(yōu)選為35-40℃。分離釜ii的溫度可以選自35℃，36℃，37℃，38℃，39℃，40℃。分離釜ii的壓力為2-8mpa；優(yōu)選為3-7mpa；更優(yōu)選為4-6mpa；最優(yōu)選為4.5-5.5mpa。分離釜ii的壓力可以選自4.65mpa，4.9mpa，5.1mpa，5.2mpa，5.3mpa，5.4mpa，5.5mpa。分離釜iii壓力和溫度：分離釜iii的溫度為25-50℃，優(yōu)選為30-45℃；更優(yōu)選為32-42℃；最優(yōu)選為35-40℃。分離釜iii的溫度可以選自35℃，36℃，37℃，38℃，39℃，40℃。分離釜iii的壓力為2-8mpa；優(yōu)選為3-7mpa；更優(yōu)選為4-6mpa；最優(yōu)選為4.5-5.5mpa。分離釜iii的壓力可以選自4.65mpa，4.9mpa，5.1mpa，5.2mpa，5.3mpa，5.4mpa，5.5mpa。分離釜中的得到的提取物，就是本發(fā)明的臘梅屬植物提取物。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，是對原藥材不加夾帶劑的進(jìn)行超臨界提取，原藥材加入萃取釜，萃取釜溫度為40℃-50℃，壓力為15mpa-40mpa，二氧化碳?xì)怏w通過萃取釜的流量為100-250kg/小時(shí)，萃取時(shí)間為90-300分鐘，分離釜i的溫度為50℃-60℃，壓力為7.5mpa-9mpa，分離釜ii的溫度為35℃-45℃，壓力為4.8mpa-6mpa，分離釜中的得到的提取物即為本發(fā)明的提取物。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，是對原藥材加夾帶劑進(jìn)行超臨界提取，原藥材加入萃取釜，萃取釜溫度為40℃-50℃，壓力為15mpa-40mpa,加入夾帶劑，二氧化碳?xì)怏w通過萃取釜的流量為23-125l/h·kg生藥，萃取時(shí)間為90-300分鐘，分離釜i的溫度為50℃-60℃，壓力為7.5mpa-9mpa，分離釜ii的溫度為35℃-45℃，壓力為4.8mpa-6mpa；分離釜中的得到的提取物即為本發(fā)明的提取物。所述的夾帶劑選自水、無水乙醇、30％-99％的乙醇水溶液、乙酸乙酯、丙酮等中至少一種，即作為帶劑的溶劑可以是單一溶劑，或其中任何一種溶劑與另一種、及多種溶劑間的彼此混合溶劑等。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，是對原藥材先不加夾帶劑進(jìn)行超臨界提取后再加夾帶劑的進(jìn)行提取，原藥材加入萃取釜，萃取釜溫度為40℃-50℃，壓力為15mpa-40mpa，分離釜i的溫度為50℃-60℃，壓力為7.5mpa-9mpa，分離釜ii的溫度為35℃-45℃，壓力為4.8mpa-6mpa；二氧化碳?xì)怏w通過萃取釜的流量為23-125l/h·kg生藥，萃取時(shí)間為90-300分鐘；放出分離釜中的提取物；再加入夾帶劑，二氧化碳?xì)怏w通過萃取釜的保持流量為23-125l/h·kg生藥，再萃取90-300分鐘；分離釜中再次得到的提取物即為本發(fā)明的提取物。所述的夾帶劑選自水、無水乙醇、30％-99％的乙醇水溶液、乙酸乙酯、丙酮等中至少一種，即作為帶劑的溶劑可以是單一溶劑，或其中任何一種溶劑與另一種、及多種溶劑間的彼此混合溶劑等。本領(lǐng)域常用的干燥均可以用于本發(fā)明，例如：減壓干燥、噴霧干燥、冷凍干燥、熱風(fēng)干燥、遠(yuǎn)紅外線干燥或微波干燥。或聯(lián)合使用上述一種或多種干燥方式。本發(fā)明提供的提取物的第四種制備方法：所述提取物是原藥材經(jīng)二氧化碳超臨界提取后，其剩余的藥材再加入溶劑提取，過濾并濃縮濾液，干燥獲得。具體的提取方法可以第一種方式相同。在本發(fā)明中，術(shù)語“提取”可以是常溫下的浸漬，或者超臨界狀態(tài)下的提取，或者在升高的溫度下的提取(例如煎煮和/或回流)，或者這些操作方式的結(jié)合。還可以進(jìn)一步包括對提取物進(jìn)行進(jìn)一步處理，例如進(jìn)一步純化，例如除溶劑、沉淀除雜質(zhì)、溶劑萃取、樹脂吸附分離等。如本文所述的，術(shù)語“提取物”將包括可用于實(shí)現(xiàn)本發(fā)明任何目的的任何純度的提取物，提取物的提取純度可以在較大的范圍內(nèi)變化。本發(fā)明第三方面公開含有臘梅屬植物提取物的制劑，所述的藥物與藥學(xué)上接受的輔料制成藥劑學(xué)上接受的口服制劑。本發(fā)明第三方面的制劑，其特征在于，所述的制劑為柳葉蠟梅或浙江臘梅或山臘梅的提取物制劑。本發(fā)明第三方面的制劑，其特征在于，所述的制劑的組合物還包含一種或多種無毒生理學(xué)可接受的載體。所述的可接受的載體包括本領(lǐng)域公知的任何輔料及起控釋作用的輔料。常用的輔料包括稀釋劑、黏合劑、潤濕劑、崩解劑、潤滑劑、助流劑、致孔劑、增塑劑、填充劑、增溶劑和乳化劑。稀釋劑可以是但不限于淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纖維素、硫酸鈣、磷酸氫鈣、碳酸鈣等；濕潤劑可以是但不限于水、乙醇、異丙醇等；粘合劑可以是淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纖維素、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、丙烯酸樹脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解劑可以是但不限于干淀粉、微晶纖維素、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉等；潤滑劑和助流劑可以是但不限于滑石粉、二氧化硅、硬脂酸鹽、酒石酸、液體石蠟、聚乙二醇；增溶劑和乳化劑可以是但不限于乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、芐醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油類(特別是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氫呋喃醇、聚乙二醇和脫水山梨糖醇的脂肪酸酯及它們的混合物。起緩控釋作用的輔料可以選自親水性凝膠材料、蠟脂類材料和不溶性材料的一種或多種。所述的親水性凝膠材料可以選自羥丙基甲基纖維素、卡波普、羧甲基纖維素鈉和海藻酸鹽，所述的蠟脂類材料可以選自十六醇、十八醇、蜂蠟、山崳酸甘油酯、硬脂酸和巴西棕櫚蠟，所述的不溶性材料可以選自乙基纖維素、丙烯酸樹脂、聚氧乙烯和聚乙烯。此外，如需要，可向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑或其它添加劑。本發(fā)明第三方面的制劑，其特征在于，所述制劑包含柳葉蠟梅或浙江臘梅或山臘梅的提取物和藥學(xué)上可接受的載體制成的制劑?？赏ㄟ^將組合物與一種或多種藥學(xué)上可接受的固體或液體賦形劑和/或輔劑結(jié)合，制成適于人或動物使用的任何劑型。該制劑可根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法制備。本發(fā)明第三方面的制劑，其特征在于，所述制劑優(yōu)選噴霧劑、口服制劑、畜牧用藥。本發(fā)明第四方面公開了浙江臘梅提取物用于(1)治療家畜、家禽和伴侶動物、野生動物、鳥類的細(xì)菌與病毒等微生物感染的疾??；(2)畜牧飼料與添加劑；(3)消殺劑。有益技術(shù)效果目前，偽狂犬病遍及全世界50多個(gè)國家，在我國有20多個(gè)省市發(fā)現(xiàn)該病，且仍在不斷蔓延擴(kuò)大，更為嚴(yán)重的是偽狂犬病尚無有效藥。本發(fā)明提供了制備直接殺滅偽狂犬病毒的藥物和制備預(yù)防和/或治療偽狂犬病毒感染的藥物的提取物，為偽狂犬病毒的殺滅和偽狂犬病的預(yù)防和治療藥物的開發(fā)提供了潛在的可能性。在本發(fā)明的研究過程中發(fā)現(xiàn)三個(gè)品種臘梅柳葉臘梅、浙江臘梅、山臘梅的水提、醇提、揮發(fā)油和超臨界樣品對偽狂犬病毒均有不同程度的殺滅、阻斷和抑制作用。其中，對病毒的直接殺滅作用尤為顯著，殺滅率均大于50％，對病毒的抑制效果也較佳，抑制率接近50％，對病毒亦有明顯阻斷作用。具體實(shí)施方式提取物制備實(shí)施例實(shí)施例1-4取粉碎后藥材，裝入圓底燒瓶中，分兩次加水回流提取。第一次加10-16倍水，提取1小時(shí)后過濾，第二次加水8-12倍，提取1小時(shí)，合并兩次濾液。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮或水浴鍋上濃縮，水浴75℃、轉(zhuǎn)速80rpm,濃縮至比重為1.18－1.22時(shí)，傾倒入不銹鋼盤中置減壓干燥烘箱65℃，真空烘干后粉碎。柳葉蠟梅的水提物編號lys，浙江臘梅的水提物編號zys，山臘梅的水提物編號sys。序號方法品名藥材重(g)一次二次浸膏(g)收率(％)樣品編號實(shí)施例1水提柳葉蠟梅60013倍水10倍水14023lys(140601)實(shí)施例2水提柳葉蠟梅100016倍水16倍水20620lys(140607)實(shí)施例3水提山臘梅33010倍水8倍水89.627.15sys(161217)實(shí)施例4水提浙江臘梅37010倍水8倍水11731.6zys(161218)實(shí)施例5-7醇提：取柳葉臘梅干燥老葉粉碎后藥材，裝入圓底燒瓶中，分兩次加乙醇回流提取。第一次加10倍乙醇，提取1小時(shí)后過濾，第二次加乙醇8倍，提取1小時(shí)，合并兩次濾液。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮，水浴65℃、轉(zhuǎn)速80rpm，濃縮至比重為1.18－1.22時(shí)，傾倒入不銹鋼盤中置減壓干燥烘箱65℃，真空烘干后粉碎。序號方法品名藥材重(g)一次二次浸膏(g)收率(％)樣品編號實(shí)施例5醇提柳葉蠟梅60013倍70％醇提10倍70％醇提14825lyc(140602)實(shí)施例6醇提山臘梅25010倍70％乙醇8倍70％乙醇71.828.7syc(161225)實(shí)施例7醇提浙江臘梅30010倍70％乙醇8倍70％乙醇9230.6zyc(16112)實(shí)施例8-11稱取適量已粉碎的藥材，裝入5-20倍水提時(shí)，裝好揮發(fā)油提取器，待油產(chǎn)生后收集。序號方法品名藥材重/g加水量揮發(fā)油收率/％樣品編號實(shí)施例8水蒸餾柳葉蠟梅60010倍水40ml3.6lyy實(shí)施例9水蒸餾柳葉蠟梅10008倍水26.8g2.68lyy實(shí)施例10水蒸餾浙江臘梅11308倍水26.6g2.33zyy(161030)實(shí)施例11水蒸餾山臘梅10008倍水13g1.3syy(161030)實(shí)施例12開啟電熱控制系統(tǒng)和制冷系統(tǒng)。稱取6.4kg柳葉蠟梅葉子，置于24l萃取釜中。稱取3.2kg95％乙醇，放置于副泵的儲箱中，開啟副泵(r＝9.1r/min),60min內(nèi)加夾帶劑結(jié)束。萃取釜ii、分離釜i、分離釜ii、分離釜iii的壓力分別為20.7mpa、8.5mpa、5mpa、5mpa，溫度分別為45℃、55℃、40℃、40℃，主泵的轉(zhuǎn)速r＝30.5r/min，二氧化碳流速為220-240l/h。從分離釜i和分離釜ii出料口收集產(chǎn)物，基本無產(chǎn)物時(shí)停止實(shí)驗(yàn)，用時(shí)135min。后處理：分離i得到固體1.3g，編號lylj-1(2-6)；抽濾分離ii收集產(chǎn)品，抽濾得膏狀物13g，編號lylj-2-b(2-6)；濾液70℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得187.4g黑色油狀物，編號lylj-2-y(2-6)，總收率3.15％。附圖說明圖1prv對vero細(xì)胞的毒力測定形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果a：正常細(xì)胞；b：prv感染細(xì)胞圖1顯示正常vero細(xì)胞呈梭形和扁平不規(guī)則形狀，細(xì)胞間緊密相連，層次感強(qiáng)。不同稀釋度的prv病毒液液接種于vero細(xì)胞后，低稀釋度的病毒孔細(xì)胞第二天出現(xiàn)病變，之后逐漸明顯，表現(xiàn)為細(xì)胞變圓突起、膨脹、體積變大、折光性增強(qiáng)、開始皺縮并逐漸脫落。圖28種中藥提取物對vero細(xì)胞增殖的影響圖2顯示，lyc、lys、zys、zyy、sys、syy、lyy、lylj-2-y(2-6)對vero細(xì)胞的最大無毒濃度分別是0.625ug/ml、1.25ug/ml、25ug/ml、100ug/ml、1.25ug/ml、2.5ug/ml、200ug/ml、5ug/ml。(ap<0.01,bp<0.01andcp<0.01vs0μg/ml)圖3lyy和lylj對prv吸附細(xì)胞阻斷作用的形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果圖3顯示，顯微鏡形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，與正常細(xì)胞對照組相比，lyy濃度12.5－200μg/ml和lylj濃度0.3125－5μg/ml范圍內(nèi)，細(xì)胞有病變，且部分已脫落，但病變程度較病毒對照組輕，且隨著藥物濃度的提高病變程度逐漸減輕。圖4lyy和lylj對prv增殖抑制作用的形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果圖4顯示lyy和lylj對prv在vero細(xì)胞上增殖的抑制作用。光學(xué)顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，與正常對照組比較，lyy濃度12.5－200μg/ml以及l(fā)ylj濃度1.25－5μg/ml時(shí)，細(xì)胞有病變，且部分已脫落，但病變程度較病毒對照組輕，且隨著藥物濃度的提高病變程度逐漸減輕。圖5lyy和lylj對prv直接殺滅作用的形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果圖5顯示lyy和lylj對prv的殺滅作用。顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，與病毒對照組相比，lyy高濃度尤其100和200μg/ml病變細(xì)胞甚少。lyy濃度12.5、25和50μg/ml以及l(fā)ylj濃度在1.25－5μg/ml時(shí)，細(xì)胞有病變，但病變程度相對較輕，且隨著藥物濃度的增加病變程度逐漸減輕。藥理實(shí)驗(yàn)實(shí)施例1：臘梅樣品抗豬偽狂犬病毒活性檢測實(shí)驗(yàn)1.材料1.1實(shí)驗(yàn)病毒株：豬偽狂犬病病毒(prv，barthak61株)：碩騰公司美國查理斯堡公司。細(xì)胞：非洲綠猴腎細(xì)胞(vero)，浙江大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院天然藥物實(shí)驗(yàn)室傳代保存。1.2樣品：實(shí)施例1、3、4、5、8、10、11、12所得產(chǎn)物。1.3主要儀器：co2細(xì)胞培養(yǎng)箱：mco-15ac型，日本三洋(sanyo)公司；電子天平：sartorius1700型，德國w-germany；超凈工作臺：sw-cj-1f型，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；離心機(jī)：ld5-2a型，北京醫(yī)用離心機(jī)廠；酸度計(jì)：orionstara211，thermo公司；酶標(biāo)儀：bio-rad680型，美國伯樂bio-rad公司；生物倒置顯微鏡：xds-1b型，重慶光學(xué)儀器廠；電熱恒溫水浴鍋：dk-s26型，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；微量振蕩儀：mh-1型，江蘇海門其林貝爾儀器制造有限公司；漩渦混合器：wh-861型，江蘇太倉華利達(dá)實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。1.4試劑：3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽(mtt)、dmem培養(yǎng)基購自sigma公司；二甲基亞砜(dmso)購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；0.25％胰酶購自吉諾生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司；胎牛血清購自gibco公司；完全培養(yǎng)液(含10％胎牛血清以及雙抗的dmem培養(yǎng)液)；細(xì)胞維持液(含2％胎牛血清的dmem培養(yǎng)液)；磷酸緩沖液(pbs，ph7.4)，本實(shí)驗(yàn)室自制。1.5主要試劑的配制3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽(mtt)溶液：稱取mtt粉末，加入pbs，溶解，制成2mg/ml的mtt溶液。2.實(shí)驗(yàn)方法2.1vero細(xì)胞復(fù)蘇和培養(yǎng)從液氮灌中取出凍存的vero細(xì)胞，于37℃水浴快速融化，用75％乙醇擦拭凍存管口，將凍存管中液體轉(zhuǎn)移至預(yù)先加有預(yù)冷pbs的離心管中，1200r/min離心5min，棄上清。細(xì)胞沉淀以含10％胎牛血清的dmem完全培養(yǎng)液重懸，轉(zhuǎn)移至細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，置37℃、5％co2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況。2.2prv的tcid50測定vero細(xì)胞以0.75×105/ml濃度接種96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，貼壁培養(yǎng)24h。將prv液按10倍作倍比稀釋，加入到鋪滿vero細(xì)胞的96孔培養(yǎng)板中，每個(gè)稀釋度重復(fù)8孔，置于37℃、5％co2細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育，期間每隔30分鐘搖晃一次。2h后棄去上清，加入維持液繼續(xù)培養(yǎng)。分別于接毒后12、24、48、72h置倒置顯微鏡下觀察。比較不同稀釋度的細(xì)胞病變情況(cpe)，有細(xì)胞病變的判為陽性，無細(xì)胞病變的為陰性，采用reed-muench法計(jì)算prv在vero細(xì)胞中的tcid50。2.3試驗(yàn)藥物對vero細(xì)胞的最大安全濃度的測定vero細(xì)胞以0.75×105/ml的濃度接種96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，貼壁培養(yǎng)24h。lyy初始濃度(400μg/ml)采用dmem培養(yǎng)液作2倍倍比稀釋至25μg/ml，lylj初始濃度(40μg/ml)向下2倍倍比稀釋至0.625μg/ml，依次加到長成單層vero細(xì)胞的96孔細(xì)胞板上，100μl/well，每個(gè)稀釋度重復(fù)8孔，另設(shè)細(xì)胞對照孔，置于37℃、5％co2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)。孵育2h后，棄培養(yǎng)上清，加入維持液繼續(xù)培養(yǎng)，每天觀察細(xì)胞狀態(tài)，以48h時(shí)，8孔均未出現(xiàn)細(xì)胞病變的濃度作為最大安全濃度。同時(shí)，另一批細(xì)胞于藥物作用44h后，每孔加入mtt溶液(2mg/ml)50μl，繼續(xù)孵育4h，2000r/min離心5min，甩去上清，每孔加入150μl酸性dmso溶液(192μldmso加8μl1nhcl)，振蕩儀振蕩，俟結(jié)晶完全溶解，采用酶標(biāo)儀于波長492nm處測定od值(od492)。2.4對prv吸附細(xì)胞的阻斷作用以最大安全濃度作為初始濃度，用dmem培養(yǎng)液作2倍倍比稀釋后，分別加入到長成單層vero細(xì)胞的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，每個(gè)濃度8個(gè)復(fù)孔，100μl/well，于37℃、5％co2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)。孵育2h后棄去上清，每孔加入100tcid50的prv病毒液100μl，于37℃、5％co2細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育2h，每隔30分鐘搖晃一次。另設(shè)細(xì)胞對照和病毒對照。2h后棄去病毒液后，每孔加入100μl維持液，繼續(xù)培養(yǎng)，每天于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞病變情況。于藥物作用44h后，每孔加入mtt溶液(2mg/ml)50μl，繼續(xù)孵育4h，2000r/min離心5min，甩去上清，每孔加入150μl酸性dmso溶液(192μldmso加8μl1nhcl)，振蕩儀振蕩，俟結(jié)晶完全溶解后采用酶標(biāo)儀于波長492nm處測定od值(od492)，作為細(xì)胞存活量的指標(biāo)，按下列公式計(jì)算阻斷率。阻斷率(％)＝[(給藥組平均值－病毒對照平均值)/(正常細(xì)胞對照組平均值－病毒對照平均值)]×100％。2.5對prv增殖的抑制作用在長滿單層的vero細(xì)胞孔中按100μl/well加入100tcid50的prv病毒液，于37℃、5％co2細(xì)胞培養(yǎng)箱吸附2h，每隔30分鐘搖晃一次。棄去病毒液，按100μl/well加入不同稀釋度的藥物稀釋液，每個(gè)稀釋度重復(fù)8孔，于37℃、5％co2細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育。。2h后棄去藥液，每孔加入100μl維持液，繼續(xù)培養(yǎng)，同時(shí)設(shè)細(xì)胞對照和病毒對照，每天于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞病變情況。同時(shí)，于藥物作用44h后，每孔加入mtt溶液(2mg/ml)50μl，繼續(xù)孵育4h，2000r/min離心5min，甩去上清，每孔加入150μl酸性dmso溶液(192μldmso加8μl1nhcl)，振蕩儀振蕩，俟結(jié)晶完全溶解，采用酶標(biāo)儀于波長492nm處測定od值，作為細(xì)胞存活量的指標(biāo)，按下列公式計(jì)算抑制率。抑制率(％)＝[(給藥組平均值－病毒對照平均值)/(正常細(xì)胞對照組平均值－病毒對照平均值)]×100％。2.6對prv的殺滅作用將不同稀釋度的藥物稀釋液分別與等體積的200tcid50病毒液混合，于37℃、5％co2細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育2h，每隔30分鐘搖晃一次。然后將混合液按100μl/well加入長成單層的vero細(xì)胞中，于37℃、5％co2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)，間隔30分鐘搖晃一次。2h后棄去上清，每孔加入100μl維持液，繼續(xù)培養(yǎng)，同時(shí)設(shè)細(xì)胞對照和病毒對照。每天于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞病變。于藥物作用44h后，每孔加入mtt溶液(2mg/ml)50μl，繼續(xù)孵育4h，2000r/min離心5min，甩去上清，每孔加入150μl酸性dmso溶液(192μldmso加8μl1nhcl)，振蕩儀振蕩，俟結(jié)晶完全溶解，采用酶標(biāo)儀于波長492nm處測定od值(od492)，作為細(xì)胞存活量的指標(biāo)，按下列公式計(jì)算殺滅率。殺滅率(％)＝[(給藥組平均值－病毒對照平均值)/(正常細(xì)胞對照組平均值－病毒對照平均值)]×100％。3試驗(yàn)結(jié)果3.1試驗(yàn)藥物對vero細(xì)胞的最大安全濃度的測定表18種中藥提取物對vero細(xì)胞無毒性的最大濃度3.2樣品對prv的阻斷作用表2.lyc和lys對prv吸附細(xì)胞的阻斷作用mtt法檢測結(jié)果注：與正常細(xì)胞對照組比較，cp<0.001；與病毒對照組比較，ep<0.01和fp<0.001fp<0.001。表3.zys和zyy對prv吸附細(xì)胞的阻斷作用mtt法檢測結(jié)果注：與正常細(xì)胞對照組比較，cp<0.001；與病毒對照組比較，fp<0.001。表4.sys和syy對prv吸附細(xì)胞的阻斷作用mtt法檢測結(jié)果注：與正常細(xì)胞對照組比較，cp<0.001；與病毒對照組比較，ep<0.01和fp<0.001。表5.lyy(2015)和lylj-2-y(2-6)對prv吸附細(xì)胞阻斷作用的mtt法檢測結(jié)果注：與病毒對照組比較，cp<0.001；與細(xì)胞對照組比較，ep<0.01,fp<0.001。3.3樣品對prv的增殖抑制作用表6.lyc和lys對prv增殖的抑制作用mtt法檢測結(jié)果注：與正常細(xì)胞對照組比較，cp<0.001；與病毒對照組比較，ep<0.01和fp<0.001。表7.zys和zyy對prv增殖的抑制作用mtt法檢測結(jié)果注：與正常細(xì)胞對照組比較，cp<0.001；與病毒對照組比較，fp<0.001。表8.sys和syy對prv增殖的抑制作用mtt法檢測結(jié)果注：與正常細(xì)胞對照組比較，cp<0.001；與病毒對照組比較，ep<0.01和fp<0.001。表9.lyy(2015)和lylj-2-y(2-6)對prv增殖抑制作用的mtt法檢測結(jié)果注：與病毒對照組比較，cp<0.001；與細(xì)胞對照組比較ep<0.01,fp<0.001。此處補(bǔ)表3.4樣品對prv直接殺滅作用表10.lyc和lys對prv殺滅作用mtt法檢測結(jié)果注：與正常細(xì)胞對照組比較，bp<0.01和cp<0.001；與病毒對照組比較，fp<0.001。表11.zys和zyy對prv殺滅作用mtt法檢測結(jié)果注：與正常細(xì)胞對照組比較，cp<0.001；與病毒對照組比較，fp<0.001。表12.sys和syy對prv殺滅作用mtt法檢測結(jié)果注：與正常細(xì)胞對照組比較，cp<0.001；與病毒對照組比較，fp<0.001。表13.lyy(2015)和lylj-2-y(2-6)對prv殺滅作用mtt法檢測結(jié)果注：與病毒對照組比較，bp<0.01,cp<0.001；與細(xì)胞對照組比較，fp<0.001。當(dāng)前第1頁12