本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中與不同復(fù)發(fā)可能性肝癌相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

目前原發(fā)性肝癌診斷存在如下問(wèn)題：

(1)臨床早期診斷率低

85％患者診斷時(shí)已到晚期：目前主要的臨床診斷手段包括影像檢查、血清甲胎蛋白(afp)檢測(cè)、血液酶學(xué)檢查和腫瘤組織活檢。影像檢查技術(shù)和手段中，超聲檢查可顯示直徑為2cm以上的腫瘤，但需重復(fù)、動(dòng)態(tài)檢查并結(jié)合其他指標(biāo)進(jìn)行診斷。計(jì)算機(jī)斷層掃描(ct)在原發(fā)性肝癌的診斷中最為普遍，可顯示2cm的腫瘤，陽(yáng)性率在90％以上。但是對(duì)占位性病變性質(zhì)難以確定，對(duì)于直徑小于1厘米的腫瘤難以發(fā)現(xiàn)，正電子發(fā)射體層顯像(pet)可顯示肝癌組織的代謝情況，但是診斷的敏感性僅有50％左右。磁共振成像(mri)具有很高的組織分辨率和多參數(shù)、多方位成像等特點(diǎn)，而且無(wú)輻射影響，但是其空間分辨率不及ct，且費(fèi)用昂貴，不能普遍應(yīng)用于普查。由此可見(jiàn)，影像學(xué)方法只能檢測(cè)前臨床診斷期和臨床癥狀期的癌腫，即當(dāng)癌腫小于0.5cm時(shí)因癌腫相關(guān)血管尚未形成無(wú)法在影像學(xué)上發(fā)現(xiàn)。血液酶學(xué)方面，afp是目前臨床上診斷hcc最常用的血清腫瘤標(biāo)記物，其診斷hcc的敏感性和特異性分別為41％～65％和80％～94％。但在部分良性肝病、生殖系統(tǒng)和胃腸道的一些惡性腫瘤中afp也有升高，且在一部分hcc中afp水平長(zhǎng)期保持低水平(<20ng/ml)，其較高的假陽(yáng)性及假陰性嚴(yán)重影響了afp診斷hcc的準(zhǔn)確性。因此，血清afp檢測(cè)因自身的局限性無(wú)法在原發(fā)性肝癌早期做出正確的診斷，仍需在影像學(xué)的配合下，在前臨床診斷期和臨床癥狀期協(xié)助診斷。綜上所述，目前臨床上原發(fā)性肝癌的主要診斷手段均為針對(duì)臨床癥狀期，尚無(wú)真正意義的早期診斷方法。

(2)慢性乙型肝炎患者在疾病進(jìn)展中,缺乏肝癌早期預(yù)警指標(biāo)

由于肝癌早期診斷率較低，臨床尚無(wú)針對(duì)腫瘤早期的診斷方法。在兒童時(shí)期感染乙型肝炎病毒的成人中，約25％會(huì)因慢性感染死于肝硬化或肝癌，因此在慢性乙型肝炎治療和隨訪中，引入肝癌預(yù)警體系對(duì)高危人群進(jìn)行重點(diǎn)監(jiān)測(cè)，擬補(bǔ)影像學(xué)和酶學(xué)診斷指標(biāo)不靈敏的不足，對(duì)于肝癌早期診斷非常的必要。

(3)肝癌治療后復(fù)發(fā)的預(yù)警

目前肝癌的治療方法包括手術(shù)和非手術(shù)治療。早期肝癌多采用手術(shù)切除，肝移植，無(wú)水酒精消融(percutaneousethanolinjection，pei)和射頻消融(radiofrequencyablation,rfa)等治療方法；中期肝癌多采用經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈內(nèi)化療栓塞術(shù)(transarterialchemoembolization，tace)，tace+fra，經(jīng)導(dǎo)管放射性栓塞(transarterialradioembolization，tare)；晚期肝癌采用常規(guī)全身系統(tǒng)性化療或分子靶向治療藥物索拉非尼治療。大量臨床資料顯示，直徑≤5cm的小hcc治療效果明顯優(yōu)于直徑>5cm的大hcc，而直徑≤2cm的微小hcc療效更佳。但是，因?yàn)橥ǔＧ闆r下，70％～80％的原發(fā)性肝癌病人發(fā)現(xiàn)時(shí)已到晚期，失去了根治性手術(shù)機(jī)會(huì)，而且即使手術(shù)切除肝癌，5年后腫瘤復(fù)發(fā)率仍超過(guò)70％?？梢?jiàn)，肝癌治療后易于復(fù)發(fā)，因此，原發(fā)性肝癌需要早期診斷，但也需要針對(duì)治療后復(fù)發(fā)的預(yù)警指標(biāo)。

干擾素誘導(dǎo)的跨膜蛋白3(ifitm3，也被稱(chēng)為1-8u)的基因最初確定于1984年，系從inf治療神經(jīng)母細(xì)胞瘤篩選cdna過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，其克隆來(lái)源于人淋巴細(xì)胞的cdna文庫(kù)。ifitm3可在大多數(shù)組織中翻譯表達(dá)，并高度誘導(dǎo)干擾素表達(dá)。以往的研究表明ifitm3屬于鼠基因家族，其較短，含有2個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域的蛋白(5-18kda)，具有較高的核心序列相似性，但n和c-末端存在進(jìn)化差異。人類(lèi)的同源基因(ifitm1，ifitm2，和ifitm3)均聚集在11號(hào)染色體上一個(gè)18-kb的基因組序列內(nèi)，并介導(dǎo)細(xì)胞的發(fā)育過(guò)程，包括細(xì)胞粘附，免疫細(xì)胞調(diào)節(jié)，生殖細(xì)胞歸巢和成熟。

干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白3(ifitm3)是一種具有廣譜抗囊膜病毒活性的蛋白，ifitm3是由i型或ii型干擾素(ifn)誘導(dǎo)產(chǎn)生的，它可以通過(guò)抑制流感病毒和其他包膜病毒進(jìn)入細(xì)胞而限制病毒復(fù)制，缺失ifitm3基因后，ifn的抗病毒作用會(huì)明顯變?nèi)?。rs12252位于干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白3基因中。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是如何篩查不同復(fù)發(fā)可能性肝癌患者。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明首先提供了下述1-6中任一用途：

1、檢測(cè)人基因組中rs12252的多態(tài)性或基因型的物質(zhì)在制備篩查或輔助篩查不同復(fù)發(fā)可能性肝癌患者產(chǎn)品中的應(yīng)用；

2、檢測(cè)人基因組中rs12252的多態(tài)性或基因型的物質(zhì)在制備檢測(cè)或輔助檢測(cè)不同復(fù)發(fā)可能性肝癌易感性產(chǎn)品中的應(yīng)用；

3、檢測(cè)人基因組中rs12252的多態(tài)性或基因型的物質(zhì)在制備檢測(cè)或輔助檢測(cè)與不同復(fù)發(fā)可能性肝癌相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性的產(chǎn)品中的應(yīng)用；

4、檢測(cè)人基因組中rs12252的多態(tài)性或基因型的物質(zhì)在制備鑒定或輔助鑒定與不同復(fù)發(fā)可能性肝癌相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性的產(chǎn)品中的應(yīng)用；

5、人基因組中rs12252的多態(tài)性或基因型在制備篩查或輔助篩查不同復(fù)發(fā)可能性肝癌患者產(chǎn)品中的應(yīng)用；

6、人基因組中rs12252的多態(tài)性或基因型在制備檢測(cè)或輔助檢測(cè)不同復(fù)發(fā)可能性肝癌易感性產(chǎn)品中的應(yīng)用。

rs12252是人染色體11p5.5上的一個(gè)二等位多態(tài)性的snp位點(diǎn)，該變異是轉(zhuǎn)換(t/c，在其互補(bǔ)鏈上則為a/g)。rs12252基因型是cc、ct或tt。其中，cc是rs12252位點(diǎn)為c的純合型，tt是rs12252位點(diǎn)為t的純合型，ct是rs12252位點(diǎn)為t和c的雜合型。所述檢測(cè)人基因組中rs12252的多態(tài)性或基因型具體可通過(guò)檢測(cè)rs12252的核苷酸種類(lèi)確定。

上述用途中，所述人可為肝癌患者。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明還提供了含有檢測(cè)或輔助檢測(cè)人基因組中rs12252的多態(tài)性或基因型的物質(zhì)的產(chǎn)品。

本發(fā)明所提供的含有檢測(cè)或輔助檢測(cè)人基因組中rs12252的多態(tài)性或基因型的物質(zhì)的產(chǎn)品，為a)-d)中的任一種產(chǎn)品：

a)檢測(cè)或輔助檢測(cè)與不同復(fù)發(fā)可能性肝癌相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性或基因型的產(chǎn)品；

b)鑒定或輔助鑒定與不同復(fù)發(fā)可能性肝癌相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性或基因型的產(chǎn)品；

c)篩查或輔助篩查不同復(fù)發(fā)可能性肝癌患者產(chǎn)品；

d)檢測(cè)或輔助檢測(cè)不同復(fù)發(fā)可能性肝癌易感性產(chǎn)品。

上述產(chǎn)品中，所述人可為肝癌患者。

本發(fā)明中，所述檢測(cè)人基因組中rs12252的多態(tài)性或基因型的物質(zhì)可包括擴(kuò)增包括rs12252在內(nèi)的基因組dna片段的pcr引物對(duì)，還可包括限制性內(nèi)切酶msci。所述檢測(cè)人基因組中rs12252的多態(tài)性或基因型的物質(zhì)也可僅為擴(kuò)增包括rs12252在內(nèi)的基因組dna片段的pcr引物對(duì)，也可為所述引物對(duì)與限制性內(nèi)切酶msci。

本發(fā)明中，所述pcr引物對(duì)可為序列表中seqidno.1所示的單鏈dna和序列表中seqidno.2所示的單鏈dna。

所述治療可為肝癌切除、介入消融和肝臟移植中的任一種。

實(shí)驗(yàn)證明，rs12252的c等位在肝癌復(fù)發(fā)性高的肝癌患者群體中的比例高于該等位在肝癌復(fù)發(fā)性低的肝癌患者群體中的比例，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說(shuō)明rs12252的c等位為肝癌復(fù)發(fā)性高的肝癌的風(fēng)險(xiǎn)等位。rs12252的三個(gè)基因型中，cc基因型的個(gè)體在肝癌復(fù)發(fā)性高的肝癌患者群體中的比例高于對(duì)應(yīng)的基因型在肝癌復(fù)發(fā)性低的肝癌患者群體中的比例；tt和ct基因型的個(gè)體在肝癌復(fù)發(fā)性高的肝癌患者群體中的比例分別低于對(duì)應(yīng)的基因型在肝癌復(fù)發(fā)性低的肝癌患者群體中的比例。與攜帶tt和ct基因型的個(gè)體相比，攜帶cc基因型的肝癌患者的肝癌復(fù)發(fā)性高的腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)增加，or值為4.067[95％置信區(qū)間(95％ci)＝1.833-9.025；p<0.001]。說(shuō)明rs12252多態(tài)性位點(diǎn)與肝癌復(fù)發(fā)性顯著關(guān)聯(lián)。

在實(shí)際應(yīng)用中，可將檢測(cè)rs12252的多態(tài)性或基因型的物質(zhì)與其它物質(zhì)(如檢測(cè)其它的與不同復(fù)發(fā)可能性肝癌相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性或基因型的物質(zhì))聯(lián)合在一起制備篩查或輔助篩查不同復(fù)發(fā)可能性肝癌患者的產(chǎn)品。

其中，檢測(cè)人基因組中rs12252的多態(tài)性或基因型的物質(zhì)可為通過(guò)下述至少一種方法確定rs12252的多態(tài)性或基因型所需的試劑和/或儀器：dna測(cè)序、限制性酶切片段長(zhǎng)度多態(tài)性、單鏈構(gòu)象多態(tài)性、變性高效液相色譜、snp芯片、taqman探針技術(shù)和sequenommassarray技術(shù)。其中，利用sequenommassarray技術(shù)確定rs12252的多態(tài)性或基因型所需的試劑和/或儀器包括pcr引物對(duì)、基于單堿基延伸反應(yīng)的延伸引物、磷酸酶(如蝦堿性磷酸酶(shrimpalkalinephosphatase，sap))、樹(shù)脂、芯片、maldi-tof(matrix-assistedlaserdesorption/ionization–timeoffligh，基質(zhì)輔助激光解吸附電離飛行時(shí)間質(zhì)譜)以及sequenommassarray技術(shù)所需要的其他試劑和儀器；利用限制性酶切片段長(zhǎng)度多態(tài)性確定rs12252的多態(tài)性或基因型所需的試劑和/或儀器包括pcr引物對(duì)和限制性內(nèi)切酶；snp芯片包括基于核酸雜交反應(yīng)的芯片、基于單堿基延伸反應(yīng)的芯片、基于等位基因特異性引物延伸反應(yīng)的芯片、基于“一步法”反應(yīng)的芯片、基于引物連接反應(yīng)的芯片、基于限制性內(nèi)切酶反應(yīng)的芯片、基于蛋白dna結(jié)合反應(yīng)的芯片，及基于熒光分子dna結(jié)合反應(yīng)的芯片。

本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，采用限制性酶切片段長(zhǎng)度多態(tài)性確定rs12252的多態(tài)性和基因型。所述pcr引物對(duì)在序列上沒(méi)有特殊要求，只要能擴(kuò)增出包括rs12252在內(nèi)的基因組dna片段即可，具體可為序列表中seqidno.1和seqidno.2所示的單鏈dna。所述限制性內(nèi)切酶具體可為msci。

本發(fā)明在不同復(fù)發(fā)可能性肝癌患者群體中發(fā)現(xiàn)rs12252是與不同復(fù)發(fā)可能性肝癌相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性。可將檢測(cè)rs12252的多態(tài)性或基因型的物質(zhì)與其它物質(zhì)(如檢測(cè)其它的與不同復(fù)發(fā)可能性肝癌相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性或基因型的物質(zhì))聯(lián)合在一起制備篩查不同復(fù)發(fā)可能性肝癌患者的產(chǎn)品。

附圖說(shuō)明

圖1為使用msci限制性內(nèi)切酶對(duì)pcr擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行酶切的電泳圖譜；其中，m:為dna分子量標(biāo)準(zhǔn)(50bpladder)；樣品1-1、1-2和1-3為ct基因型酶切產(chǎn)物；樣品2-1、2-2和2-3為cc基因型酶切產(chǎn)物；樣品3-1、3-2和3-3為tt基因型酶切產(chǎn)物。

圖2為不同惡性程度肝癌患者群體中cc、ct和tt基因型個(gè)體的比例。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述，給出的實(shí)施例僅為了闡明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。

下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。

下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。

實(shí)施例1、ifitm3rs12252是與肝癌惡性程度、復(fù)發(fā)可能性以及肝癌腫瘤生長(zhǎng)速度相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)

rs12252是人染色體11p5.5上的一個(gè)二等位多態(tài)性的snp位點(diǎn)，該變異是轉(zhuǎn)換(t/c，在其互補(bǔ)鏈上則為a/g)，該位點(diǎn)位于ifitm3基因中。rs12252基因型是cc、ct或tt。其中，cc是rs12252位點(diǎn)為c的純合型，tt是rs12252位點(diǎn)為t的純合型，ct是rs12252位點(diǎn)為t和c的雜合型。

一、肝癌患者的入選標(biāo)準(zhǔn)

156例肝癌患者，其中男性患者為137例，女性患者為19例，所有患者的平均年齡為50.89±9.13，所有患者均來(lái)自中國(guó)大陸，且無(wú)血緣關(guān)系。所有患者均符合衛(wèi)生部組織專(zhuān)家指定的《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范(2011年版)》標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)影像學(xué)b超、ct、mri、肝穿及手術(shù)病理檢查證實(shí)確診為肝癌患者。

二、rs12252位點(diǎn)的基因分型

(1)擴(kuò)增含snp位點(diǎn)的核苷酸片段

根據(jù)rs12252的側(cè)翼序列設(shè)計(jì)引物，正向引物f：5’-gaaaaggaaactgttgagaaccgaa-3’(seqidno.1)，反向引物r：5’-gagcctcctcctaaacctgcac-3’(seqidno.2)，擴(kuò)增出待測(cè)snp所在的核苷酸片段，pcr產(chǎn)物為序列表中seqidno.3。rs12252位點(diǎn)位于seqidno.3的140bp處，該處核苷酸為c或t，當(dāng)該處核苷酸為t時(shí)，可被msci內(nèi)切酶(識(shí)別序列為tgg^cca)識(shí)別。

其中，pcr反應(yīng)體系以50μl計(jì)為：150-200ng/μl人基因組dna1μl，10μm引物f和r各2μl，premixtaqhs25μl，余量為ddh2o；其中，premixtaqhs為takara公司(貨號(hào)：dr028a)產(chǎn)品。使用premixtaqhotstartversion(takara公司)。

pcr反應(yīng)條件為：95℃10分鐘；95℃60秒，55℃30秒，72℃30秒，35個(gè)循環(huán)；72℃5分鐘。

(2)針對(duì)第142位核苷酸的不同選擇適當(dāng)?shù)膬?nèi)切酶進(jìn)行pcr-rflp

該pcr產(chǎn)物用msci內(nèi)切酶酶切，反應(yīng)體系以20μl計(jì)為：pcr擴(kuò)增產(chǎn)物10μl，快速消化msci酶(fastdigestmsci，fermentas公司)1μl，10×fastdigestgreen緩沖液2μl，無(wú)核酸酶的ddh2o17μl。反應(yīng)條件為：37℃水浴，酶切30min。

然后，將得到的酶切產(chǎn)物在2％瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳，溴化乙錠染色，凝膠成像系統(tǒng)中觀察。

制膠：用蒸餾水將與膠接觸的器皿洗干凈，室溫自然晾干，將含有g(shù)oldenview的2％瓊脂糖凝膠倒入模板中，插入13個(gè)孔的梳子，待膠自然聚合后，拔出梳子，則制得含有13個(gè)孔的2％的瓊脂糖凝膠。

電泳：向15μl酶切產(chǎn)物中加入6×上樣緩沖液3μl，上樣檢測(cè)，100v恒壓，電泳2小時(shí)。

根據(jù)pcr-rflp的結(jié)果確定該位點(diǎn)在檢測(cè)群體中的基因型。當(dāng)pcr產(chǎn)物的140bp處核苷酸均為c時(shí)，msci內(nèi)切酶不可識(shí)別該位點(diǎn)，即pcr產(chǎn)物不能被切開(kāi)，凝膠中只有一條帶，長(zhǎng)度為562bp，該基因型記為cc型；當(dāng)140bp處的核苷酸均為t時(shí)，即可將pcr擴(kuò)增片段切成兩個(gè)片段，一個(gè)為420bp，另一個(gè)片段為142bp，該基因型記為tt型；當(dāng)140bp處既含有c又含有t時(shí)，即凝膠電泳中含有三條帶，長(zhǎng)度分別約為562bp、420bp和142bp，該基因型記為雜合型ct型。(圖1)

這156例肝癌患者中，cc基因型的患者為44例，ct基因型的患者為84例，tt基因型的患者為28例。

三、rs12252位點(diǎn)的基因型與肝癌惡性程度的關(guān)系

對(duì)這156例肝癌患者按照肝癌的不同惡性程度進(jìn)行分組，分為高分化肝細(xì)胞性肝癌組、中分化肝細(xì)胞性肝癌組和低分化肝細(xì)胞性肝癌組。肝癌患者歸為高分化肝細(xì)胞性肝癌組的標(biāo)準(zhǔn)為腫瘤直徑<2cm，與正常細(xì)胞相比核漿比例增大，但異型性不明顯。肝癌患者歸為中分化肝細(xì)胞性肝癌組的標(biāo)準(zhǔn)為腫瘤直徑大于3cm，癌細(xì)胞胞漿豐富、嗜酸性、核圓形，核仁清楚。肝癌患者歸為低分化肝細(xì)胞性肝癌組的標(biāo)準(zhǔn)為與正常肝組織相比血竇樣腔隙減少，癌細(xì)胞核漿比例明顯增大，異型性明顯。其中，異型性是指腫瘤組織在細(xì)胞形態(tài)和組織結(jié)構(gòu)上，與其發(fā)源的正常組織的不同程度的差異。各組中各基因型的患者數(shù)及百分比如表1與圖2所示。

表1、各組中各基因型的患者數(shù)及百分比

結(jié)果顯示，高分化肝細(xì)胞性肝癌組中c等位的頻率為41.03％，t等位的頻率為58.97％；中分化肝細(xì)胞性肝癌組中c等位的頻率為56.62％，t等位的頻率為43.38％；低分化肝細(xì)胞性肝癌組中c等位的頻率為64.29％，t等位的頻率為35.71％。c等位在中分化肝細(xì)胞性肝癌組中的頻率比在高分化肝細(xì)胞性肝癌組中的頻率高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＝0.028)，c等位在低分化肝細(xì)胞性肝癌組中的頻率比在高分化肝細(xì)胞性肝癌組中的頻率高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＝0.002)，c等位在低分化肝細(xì)胞性肝癌組中的頻率比在中分化肝細(xì)胞性肝癌組中的頻率高(p＝0.238)，表明rs12252位點(diǎn)的c等位為惡性程度高的肝癌的風(fēng)險(xiǎn)等位。

rs12252位點(diǎn)的三個(gè)基因型中，不同的組別中cc基因型的肝癌患者具有以下規(guī)律：在中分化肝細(xì)胞性肝癌組中的百分比高于在高分化肝細(xì)胞性肝癌組中的百分比，在低分化肝細(xì)胞性肝癌組中的百分比高于在高分化肝細(xì)胞性肝癌組中的百分比，在低分化肝細(xì)胞性肝癌組中的百分比高于在中分化肝細(xì)胞性肝癌組中的百分比。

不同的組別中ct基因型的肝癌患者具有以下規(guī)律：在中分化肝細(xì)胞性肝癌組中的百分比低于在高分化肝細(xì)胞性肝癌組中的百分比，在低分化肝細(xì)胞性肝癌組中的百分比低于在高分化肝細(xì)胞性肝癌組中的百分比。

不同的組別中tt基因型的肝癌患者具有以下規(guī)律：在低分化肝細(xì)胞性肝癌組中的百分比低于在高分化肝細(xì)胞性肝癌組中的百分比，在低分化肝細(xì)胞性肝癌組中的百分比低于在中分化肝細(xì)胞性肝癌組中的百分比，在中分化肝細(xì)胞性肝癌組中的百分比低于在高分化肝細(xì)胞性肝癌組中的百分比。

與攜帶tt和ct基因型的肝癌患者相比，攜帶cc基因型的肝癌患者肝癌為中分化肝細(xì)胞性肝癌的風(fēng)險(xiǎn)增加，or值為3.910(95％ci＝1.231-12.413；p＝0.011)。與攜帶tt和ct基因型的肝癌患者相比，攜帶cc基因型的肝癌患者肝癌為低分化肝細(xì)胞性肝癌的風(fēng)險(xiǎn)增加，or值為5.542,[(95％ci＝1.697-18.095；p＝0.002]。

結(jié)果表明，rs12252多態(tài)性位點(diǎn)與肝癌的惡性程度顯著關(guān)聯(lián)，可以利用rs12252位點(diǎn)篩查惡性程度高的肝癌患者。

四、rs12252位點(diǎn)的基因型與肝癌腫瘤生長(zhǎng)速度的關(guān)系

對(duì)這156例肝癌患者按照肝癌腫瘤生長(zhǎng)速度進(jìn)行分組，分為高生長(zhǎng)速度肝癌組和低生長(zhǎng)速度肝癌組，肝癌患者歸為高生長(zhǎng)速度肝癌組的標(biāo)準(zhǔn)為慢性乙型肝炎不經(jīng)過(guò)肝硬化直接發(fā)展為肝癌，在b超和ct確診為肝癌時(shí)腫瘤體積大于10cm³，伴有癌栓，肝癌患者歸為低生長(zhǎng)速度肝癌組的標(biāo)準(zhǔn)為慢性乙型肝炎經(jīng)過(guò)肝硬化發(fā)展為肝癌，在b超和ct確診為肝癌時(shí)腫瘤體積小于10cm³，不伴有癌栓。各組中各基因型的患者數(shù)及百分比如表2所示。

表2、各組中各基因型的患者數(shù)及百分比

結(jié)果顯示，高生長(zhǎng)速度肝癌組中c等位的頻率為63.53％，t等位的頻率為36.47％；低生長(zhǎng)速度肝癌組中c等位的頻率為45.07％，t等位的頻率為54.93％。c等位在高生長(zhǎng)速度肝癌組中的頻率比在低生長(zhǎng)速度肝癌組中的頻率高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.001)，表明rs12252位點(diǎn)的c等位為高肝癌腫瘤生長(zhǎng)速度的風(fēng)險(xiǎn)等位。

rs12252位點(diǎn)的三個(gè)基因型中，cc基因型的個(gè)體在高生長(zhǎng)速度肝癌組中的比例高于對(duì)應(yīng)基因型在低生長(zhǎng)速度肝癌組中的比例，tt和ct基因型的個(gè)體在高生長(zhǎng)速度肝癌組中的比例分別低于對(duì)應(yīng)基因型在低生長(zhǎng)速度肝癌組中的比例。與攜帶tt和ct基因型的個(gè)體相比，攜帶cc基因型的肝癌患者的腫瘤是高生長(zhǎng)速度腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)增加，or值為4.067[95％置信區(qū)間(95％ci)＝1.833-9.025；p<0.001]。

結(jié)果表明，rs12252多態(tài)性位點(diǎn)與肝癌腫瘤的生長(zhǎng)速度顯著關(guān)聯(lián)，可以利用rs12252位點(diǎn)篩查腫瘤的生長(zhǎng)速度快的肝癌患者。

五、rs12252位點(diǎn)的基因型與肝癌復(fù)發(fā)可能性的關(guān)系

在這156例肝癌患者中選出同處于病理低分化期(腫瘤直徑<2cm，核漿比例增大，但異型性不大)的肝癌患者，共54例，對(duì)選出的這54例肝癌患者均按照如下任一方法進(jìn)行治療：介入術(shù)、肝癌切除術(shù)和肝移植術(shù)。按照rs12252位點(diǎn)的基因型這54例肝癌患者進(jìn)行分組，分為高肝癌復(fù)發(fā)可能性組和低肝癌復(fù)發(fā)可能性組，肝癌患者歸為高肝癌復(fù)發(fā)可能性組的標(biāo)準(zhǔn)為治療12個(gè)月以內(nèi)復(fù)發(fā)，肝癌患者歸為低肝癌復(fù)發(fā)可能性組的標(biāo)準(zhǔn)為治療12個(gè)月以內(nèi)無(wú)復(fù)發(fā)。在以上肝癌患者進(jìn)行治療后，跟蹤其復(fù)發(fā)情況，復(fù)發(fā)的判斷標(biāo)準(zhǔn)為：ct能觀察到新的病灶。各組中各基因型的患者數(shù)及百分比如表3所示。

表3、各組中各基因型的患者數(shù)及百分比

結(jié)果顯示，高肝癌復(fù)發(fā)可能性組中c等位的頻率為62.5％，t等位的頻率為37.5％；低肝癌復(fù)發(fā)可能性組中c等位的頻率為58.33％，t等位的頻率為41.67％。c等位在高肝癌復(fù)發(fā)可能性組中的頻率比在低肝癌復(fù)發(fā)可能性組中的頻率高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.001)，表明rs12252位點(diǎn)的c等位為高肝癌復(fù)發(fā)可能性的風(fēng)險(xiǎn)等位。

rs12252的三個(gè)基因型中，cc基因型的個(gè)體在肝癌復(fù)發(fā)性高的肝癌患者群體中的比例高于對(duì)應(yīng)的基因型在肝癌復(fù)發(fā)性低的肝癌患者群體中的比例；tt和ct基因型的個(gè)體在肝癌復(fù)發(fā)性高的肝癌患者群體中的比例分別低于對(duì)應(yīng)的基因型在肝癌復(fù)發(fā)性低的肝癌患者群體中的比例。

與攜帶tt和ct基因型的個(gè)體相比，攜帶cc基因型的肝癌患者的腫瘤使高肝癌復(fù)發(fā)可能性的風(fēng)險(xiǎn)增加，or值為4.067[95％置信區(qū)間(95％ci)＝1.833-9.025；p<0.001]。

結(jié)果表明，rs12252多態(tài)性位點(diǎn)與肝癌復(fù)發(fā)可能性顯著關(guān)聯(lián)，可以利用rs12252位點(diǎn)篩查肝癌復(fù)發(fā)可能性高的肝癌患者。

<110>首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院

<120>與不同復(fù)發(fā)可能性肝癌相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)及其應(yīng)用

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