本發(fā)明涉及橡膠籽油技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種堿溶酸沉法制備橡膠籽蛋白的方法。

背景技術(shù)：

橡膠籽(rubberseed)，大戟科喬木巴西三葉橡膠蒴果的卵圓形種子，呈卵圓形，褐色并帶有銀灰色斑紋，由種殼和種仁組成，種仁在種殼內(nèi)部，外表包有柔軟的薄膜層，是一種熱帶木本植物油料。橡膠籽去殼榨油后的部分為橡膠籽粕，橡膠籽粕中約含有60%的碳水化合物，25%的粗蛋白，28%的氨基酸。橡膠籽蛋白是全價蛋白質(zhì)，含有18種氨基酸，其中8中必需氨基酸齊全，精氨酸、谷氨酸和天冬門氨酸的含量高，橡膠籽蛋白大多數(shù)是疏水性氨基酸和酸性氨基酸，具有很高的食用價值和保健功能。因此，有必要研究一種制備橡膠籽蛋白的方法。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

針對上述技術(shù)中存在的不足之處，本發(fā)明提供了一種工藝安全、制備便捷、橡膠籽蛋白提取率高的堿溶酸沉法制備橡膠籽蛋白的方法。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：一種堿溶酸沉法制備橡膠籽蛋白的方法，包括如下步驟：步驟一、橡膠籽粉原料的制備；步驟二、一次堿溶：將橡膠籽粉原料和水按一定比例混勻制得一次漿液，調(diào)節(jié)一次漿液ph并對其進(jìn)行超聲波處理，得到一次堿溶液，將一次堿溶液離心分離，得到一次堿溶沉淀和一次橡膠籽蛋白溶液；步驟三、二次堿溶：將一次堿溶沉淀和水按一定比例混勻制得二次漿液，調(diào)節(jié)二次漿液ph并對其進(jìn)行超聲波處理，得到二次堿溶液，將二次堿溶液離心分離，得到二次堿溶沉淀和二次橡膠籽蛋白溶液；步驟四、三次堿溶：將二次堿溶沉淀和水按一定比例混勻制得三次漿液，調(diào)節(jié)三次漿液ph并對其進(jìn)行超聲波處理，得到三次堿溶液，將三次堿溶液離心分離，得到三次橡膠籽蛋白溶液；步驟五、酸沉：將一次橡膠籽蛋白溶液、二次橡膠籽蛋白溶液和三次橡膠籽蛋白溶液混勻，調(diào)節(jié)其ph并進(jìn)行酸沉處理，經(jīng)離心分離得到橡膠籽蛋白粉；步驟六、純化：將橡膠籽蛋白粉和水按一定比例混勻制得橡膠籽蛋白漿液，調(diào)節(jié)橡膠籽蛋白漿液ph并加入復(fù)合酶進(jìn)行超聲輔助酶解，待酶解后，將酶解液進(jìn)行滅酶處理，經(jīng)離心分離得到蛋白沉淀，水洗蛋白沉淀ph至中性，即得到純化橡膠籽蛋白粉；步驟七、冷凍干燥：將純化橡膠籽蛋白粉進(jìn)行冷凍干燥處理，即得橡膠籽蛋白。

優(yōu)選的，所述步驟一中橡膠籽粉的制備過程為：將橡膠籽去殼后采用六號溶劑浸泡，脫溶后得到脫脂的橡膠籽粕，其殘油量為0.8～1.2%，并將脫脂的橡膠籽粕粉碎過篩得到顆粒大小為80～100目篩的橡膠籽粉原料。

優(yōu)選的，所述步驟二中一次堿溶的過程如下：將橡膠籽粉原料和水按料液比1g:20～25ml混勻制得一次漿液，向一次漿液中加入氫氧化鈉溶液，將一次漿液ph調(diào)至10～11，并對其進(jìn)行超聲波處理，超聲功率為20～40khz，超聲時間為80～100分鐘，超聲溫度為54～56℃，得到一次堿溶液，將一次堿溶液離心分離，得到一次堿溶沉淀和一次橡膠籽蛋白溶液。

優(yōu)選的，所述步驟三中二次堿溶的過程如下：將一次堿溶沉淀和水按料液比1g:15～20ml混勻制得二次漿液，向二次漿液中加入氫氧化鈉溶液，將二次漿液ph調(diào)至11～12，并對其進(jìn)行超聲波處理，超聲功率為20～40khz，超聲時間為60～80分鐘，超聲溫度為48～52℃，得到二次堿溶液，將二次堿溶液離心分離，得到二次堿溶沉淀和二次橡膠籽蛋白溶液。

優(yōu)選的，所述步驟四中三次堿溶的過程如下：將二次堿溶沉淀和水按料液比1g:10～15ml混勻制得三次漿液，向三次漿液中加入氫氧化鈉溶液，將二次漿液ph調(diào)至12～13，并對其進(jìn)行超聲波處理，超聲功率為20～40khz，超聲時間為40～60分鐘，超聲溫度為44～46℃，得到三次堿溶液，將三次堿溶液離心分離，得到三次橡膠籽蛋白溶液。

優(yōu)選的，所述步驟五中酸沉的過程如下：將一次橡膠籽蛋白溶液、二次橡膠籽蛋白溶液和三次橡膠籽蛋白溶液混勻，加入鹽酸或檸檬酸調(diào)節(jié)ph至4.5進(jìn)行酸沉處理，酸沉溫度為40～50℃，待出現(xiàn)絮狀物后經(jīng)離心分離得到橡膠籽蛋白粉。

優(yōu)選的，所述步驟六中純化的過程如下：將橡膠籽蛋白粉和水按料液比1g:8～10ml混勻制得橡膠籽蛋白漿液，調(diào)節(jié)橡膠籽蛋白漿液ph至4～5，并加入復(fù)合酶進(jìn)行超聲輔助酶解，超聲功率為20～40khz，超聲時間為60～80min，超聲溫度為40～50℃，待酶解后，將酶解液加熱至85～95℃滅酶處理10～15分鐘，經(jīng)離心分離得到蛋白沉淀，采用35～45℃的蒸餾水水洗蛋白沉淀ph至7，得到純化橡膠籽蛋白粉。

優(yōu)選的，所述復(fù)合酶采用纖維素酶+淀粉酶+糖化酶+果膠甲酯水解酶，所述纖維素酶：淀粉酶：糖化酶：果膠甲酯水解酶的用量為1：3～6：4～8：2～4，且復(fù)合酶的加酶量為橡膠籽蛋白漿液用量的1.5～2.5ug/g。

優(yōu)選的，所述纖維素酶：淀粉酶：糖化酶：果膠甲酯水解酶的用量為1：4.5：6：3，且復(fù)合酶的加酶量為橡膠籽蛋白漿液用量的2ug/g。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其有益效果是：本發(fā)明提供的堿溶酸沉法制備橡膠籽蛋白的方法，通過依次調(diào)節(jié)一次堿溶、二次堿溶、三次堿溶方法中的ph值，可充分溶解橡膠籽粉原料中的蛋白成分，從而有效提高橡膠籽蛋白的提取率；通過在純化時采用一定比例的纖維素酶+淀粉酶+糖化酶+果膠甲酯水解酶組成的復(fù)合酶進(jìn)行酶解，可有效去除一些糖類等假蛋白，以增加橡膠籽蛋白的純度；通過在滅酶處理后采用35～45℃的蒸餾水水洗蛋白沉淀ph至7，可減少對橡膠籽蛋白的損傷及再溶解；該堿溶酸沉法制備橡膠籽蛋白的方法，工藝安全、制備便捷、橡膠籽蛋白提取率可達(dá)75.0%以上、提取的橡膠籽蛋白純度高達(dá)90.0%以上。

附圖說明

圖1是本發(fā)明所述堿溶酸沉法制備橡膠籽蛋白的方法流程圖。

具體實施方式

下面結(jié)合附圖對本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，以令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說明書文字能夠據(jù)以實施。

如圖1所示，本發(fā)明提供了一種堿溶酸沉法制備橡膠籽蛋白的方法，包括如下步驟：

步驟一、橡膠籽粉原料的制備：將橡膠籽去殼后采用六號溶劑浸泡，脫溶后得到脫脂的橡膠籽粕，其殘油量為0.8～1.2%，并將脫脂的橡膠籽粕粉碎過篩得到顆粒大小為80～100目篩的橡膠籽粉原料；

步驟二、將橡膠籽粉原料和水按料液比1g:20～25ml混勻制得一次漿液，向一次漿液中加入氫氧化鈉溶液，將一次漿液ph調(diào)至10～11，并對其進(jìn)行超聲波處理，超聲功率為20～40khz，超聲時間為80～100分鐘，超聲溫度為54～56℃，得到一次堿溶液，將一次堿溶液離心分離，得到一次堿溶沉淀和一次橡膠籽蛋白溶液；

步驟三、將一次堿溶沉淀和水按料液比1g:15～20ml混勻制得二次漿液，向二次漿液中加入氫氧化鈉溶液，將二次漿液ph調(diào)至11～12，并對其進(jìn)行超聲波處理，超聲功率為20～40khz，超聲時間為60～80分鐘，超聲溫度為48～52℃，得到二次堿溶液，將二次堿溶液離心分離，得到二次堿溶沉淀和二次橡膠籽蛋白溶液；

步驟四、將二次堿溶沉淀和水按料液比1g:10～15ml混勻制得三次漿液，向三次漿液中加入氫氧化鈉溶液，將二次漿液ph調(diào)至12～13，并對其進(jìn)行超聲波處理，超聲功率為20～40khz，超聲時間為40～60分鐘，超聲溫度為44～46℃，得到三次堿溶液，將三次堿溶液離心分離，得到三次橡膠籽蛋白溶液；

步驟五、將一次橡膠籽蛋白溶液、二次橡膠籽蛋白溶液和三次橡膠籽蛋白溶液混勻，加入鹽酸或檸檬酸調(diào)節(jié)ph至4.5進(jìn)行酸沉處理，酸沉溫度為40～50℃，待出現(xiàn)絮狀物后經(jīng)離心分離得到橡膠籽蛋白粉；

步驟六、將橡膠籽蛋白粉和水按料液比1g:8～10ml混勻制得橡膠籽蛋白漿液，調(diào)節(jié)橡膠籽蛋白漿液ph至4～5，并加入復(fù)合酶進(jìn)行超聲輔助酶解，所述復(fù)合酶采用纖維素酶+淀粉酶+糖化酶+果膠甲酯水解酶，所述纖維素酶：淀粉酶：糖化酶：果膠甲酯水解酶的用量為1：3～6：4～8：2～4，且復(fù)合酶的加酶量為橡膠籽蛋白漿液用量的1.5～2.5ug/g，超聲功率為20～40khz，超聲時間為60～80min，超聲溫度為40～50℃，待酶解后，將酶解液加熱至85～95℃滅酶處理10～15分鐘，經(jīng)離心分離得到蛋白沉淀，采用35～45℃的蒸餾水水洗蛋白沉淀ph至7，得到純化橡膠籽蛋白粉；優(yōu)選的，所述纖維素酶：淀粉酶：糖化酶：果膠甲酯水解酶的用量為1：4.5：6：3，且復(fù)合酶的加酶量為橡膠籽蛋白漿液用量的2ug/g；

步驟七、將純化橡膠籽蛋白粉進(jìn)行冷凍干燥處理，即得橡膠籽蛋白。

實施例1

將橡膠籽粉原料和水按料液比1g:20ml混勻制得一次漿液，將一次漿液ph調(diào)至10，并對其進(jìn)行超聲波處理，得到一次堿溶液，將一次堿溶液離心分離，得到一次堿溶沉淀和一次橡膠籽蛋白溶液；將一次堿溶沉淀和水按料液比1g:15ml混勻制得二次漿液，將二次漿液ph調(diào)至11，并對其進(jìn)行超聲波處理，得到二次堿溶液，將二次堿溶液離心分離，得到二次堿溶沉淀和二次橡膠籽蛋白溶液；將二次堿溶沉淀和水按料液比1g:10ml混勻制得三次漿液，將二次漿液ph調(diào)至12，并對其進(jìn)行超聲波處理，得到三次堿溶液，將三次堿溶液離心分離，得到三次橡膠籽蛋白溶液；將一次橡膠籽蛋白溶液、二次橡膠籽蛋白溶液和三次橡膠籽蛋白溶液混勻，調(diào)節(jié)ph至4.5進(jìn)行酸沉處理，酸沉溫度為40℃，待出現(xiàn)絮狀物后經(jīng)離心分離得到橡膠籽蛋白粉；將橡膠籽蛋白粉和水按料液比1g:8ml混勻制得橡膠籽蛋白漿液，調(diào)節(jié)橡膠籽蛋白漿液ph至4，并加入復(fù)合酶進(jìn)行超聲輔助酶解，所述復(fù)合酶采用纖維素酶+淀粉酶+糖化酶+果膠甲酯水解酶，所述纖維素酶：淀粉酶：糖化酶：果膠甲酯水解酶的用量為1：3：4：2，且復(fù)合酶的加酶量為橡膠籽蛋白漿液用量的1.5ug/g，待酶解后，將酶解液加熱至85℃滅酶處理10分鐘，經(jīng)離心分離得到蛋白沉淀，采用35℃的蒸餾水水洗蛋白沉淀ph至7，得到純化橡膠籽蛋白粉；將純化橡膠籽蛋白粉進(jìn)行冷凍干燥處理，即得橡膠籽蛋白，其中，橡膠籽蛋白提取率為75.2%，純度為93.6%。

實施例2

將橡膠籽粉原料和水按料液比1g:25ml混勻制得一次漿液，將一次漿液ph調(diào)至11，并對其進(jìn)行超聲波處理，得到一次堿溶液，將一次堿溶液離心分離，得到一次堿溶沉淀和一次橡膠籽蛋白溶液；將一次堿溶沉淀和水按料液比1g:20ml混勻制得二次漿液，將二次漿液ph調(diào)至12，并對其進(jìn)行超聲波處理，得到二次堿溶液，將二次堿溶液離心分離，得到二次堿溶沉淀和二次橡膠籽蛋白溶液；將二次堿溶沉淀和水按料液比1g:15ml混勻制得三次漿液，將二次漿液ph調(diào)至13，并對其進(jìn)行超聲波處理，得到三次堿溶液，將三次堿溶液離心分離，得到三次橡膠籽蛋白溶液；將一次橡膠籽蛋白溶液、二次橡膠籽蛋白溶液和三次橡膠籽蛋白溶液混勻，調(diào)節(jié)ph至4.5進(jìn)行酸沉處理，酸沉溫度為50℃，待出現(xiàn)絮狀物后經(jīng)離心分離得到橡膠籽蛋白粉；將橡膠籽蛋白粉和水按料液比1g:10ml混勻制得橡膠籽蛋白漿液，調(diào)節(jié)橡膠籽蛋白漿液ph至5，并加入復(fù)合酶進(jìn)行超聲輔助酶解，所述復(fù)合酶采用纖維素酶+淀粉酶+糖化酶+果膠甲酯水解酶，所述纖維素酶：淀粉酶：糖化酶：果膠甲酯水解酶的用量為1：6：8：4，且復(fù)合酶的加酶量為橡膠籽蛋白漿液用量的2.5ug/g，待酶解后，將酶解液加熱至95℃滅酶處理15分鐘，經(jīng)離心分離得到蛋白沉淀，采用45℃的蒸餾水水洗蛋白沉淀ph至7，得到純化橡膠籽蛋白粉；將純化橡膠籽蛋白粉進(jìn)行冷凍干燥處理，即得橡膠籽蛋白，其中，橡膠籽蛋白提取率為76.8%，純度為92.1%。

實施例3

將橡膠籽粉原料和水按料液比1g:22.5ml混勻制得一次漿液，將一次漿液ph調(diào)至10.5，并對其進(jìn)行超聲波處理，得到一次堿溶液，將一次堿溶液離心分離，得到一次堿溶沉淀和一次橡膠籽蛋白溶液；將一次堿溶沉淀和水按料液比1g:17.5ml混勻制得二次漿液，將二次漿液ph調(diào)至11.5，并對其進(jìn)行超聲波處理，得到二次堿溶液，將二次堿溶液離心分離，得到二次堿溶沉淀和二次橡膠籽蛋白溶液；將二次堿溶沉淀和水按料液比1g:12.5ml混勻制得三次漿液，將二次漿液ph調(diào)至12.5，并對其進(jìn)行超聲波處理，得到三次堿溶液，將三次堿溶液離心分離，得到三次橡膠籽蛋白溶液；將一次橡膠籽蛋白溶液、二次橡膠籽蛋白溶液和三次橡膠籽蛋白溶液混勻，調(diào)節(jié)ph至4.5進(jìn)行酸沉處理，酸沉溫度為45℃，待出現(xiàn)絮狀物后經(jīng)離心分離得到橡膠籽蛋白粉；將橡膠籽蛋白粉和水按料液比1g:9ml混勻制得橡膠籽蛋白漿液，調(diào)節(jié)橡膠籽蛋白漿液ph至4.5，并加入復(fù)合酶進(jìn)行超聲輔助酶解，所述復(fù)合酶采用纖維素酶+淀粉酶+糖化酶+果膠甲酯水解酶，所述纖維素酶：淀粉酶：糖化酶：果膠甲酯水解酶的用量為1：4.5：6：3，且復(fù)合酶的加酶量為橡膠籽蛋白漿液用量的2ug/g，待酶解后，將酶解液加熱至90℃滅酶處理12.5分鐘，經(jīng)離心分離得到蛋白沉淀，采用40℃的蒸餾水水洗蛋白沉淀ph至7，得到純化橡膠籽蛋白粉；將純化橡膠籽蛋白粉進(jìn)行冷凍干燥處理，即得橡膠籽蛋白，其中，橡膠籽蛋白提取率為77.2%，純度為94.5%。

盡管本發(fā)明的實施方案已公開如上，但其并不僅限于說明書和實施方式中所列運(yùn)用，它完全可以被適用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域，對于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地實現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限于特定的細(xì)節(jié)和這里示出與描述的圖例。