本發(fā)明屬于植物提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從紫荊葉中提取阿福豆苷的方法。

背景技術(shù)：

紫荊（mitragynarotundifoliakuntze.）為豆科科（rubiaceae）紫荊屬（mitragynal.）植物。樹皮和木材可入藥，具有活血行氣，清熱解毒，消腫止痛等功效，紫荊花可用于治療風(fēng)濕骨痛、鼻中疳瘡；紫荊果可治療咳嗽。

本發(fā)明所涉及的天然化合物阿福豆苷系首次是從紫荊屬在植物紫荊中得到的，屬于黃酮醇類化合物的一種。阿福豆苷來(lái)源豐富，存在于多種植物中，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明其對(duì)卵清蛋白誘導(dǎo)的大鼠肺炎有抑制作用、具有抗氧化和保肝的作用。最近研究發(fā)現(xiàn)，阿福豆苷還具有較好的抗血栓活性，可以作為抗血栓候選藥物進(jìn)一步研究開發(fā)。由此可見，阿福豆苷具有廣闊前景，雖然阿福豆苷在紫荊葉中有較高含量，但目前尚未見從紫荊屬植物大量提取阿福豆苷的報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

基于現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種從紫荊葉中提取阿福豆苷的方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種從紫荊葉中提取阿福豆苷的方法，包括以下步驟：

（1）以干燥的紫荊葉為原料，粉碎后用65~75%乙醇于45~55℃提取2~4次，每次2.5~3.5h，合并提取液，減壓回收溶劑得到提取物浸膏；將提取物浸膏加水溶解，大孔樹脂柱上樣后，依次用20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇和90%乙醇梯度洗脫，得到相應(yīng)洗脫部分；

（2）將步驟（1）所得40%乙醇洗脫部分用60~100目硅膠按照重量比1：29~31拌樣后裝柱，二氯甲烷與甲醇按照體積比9~10：1洗脫，薄層檢測(cè)，合并相同點(diǎn)進(jìn)行減壓回收溶劑，得阿福豆苷粗品。

進(jìn)一步，將步驟（2）所得阿福豆苷粗品甲醇溶解，過(guò)sephadexlh-20凝膠色譜柱，甲醇洗脫，得阿福豆苷純品。

本發(fā)明所述阿福豆苷分子式：c21h20o10,，分子量：432，其結(jié)構(gòu)式如下：

本發(fā)明的有益效果：

（1）到目前為止，尚未見從紫荊中提取阿福豆苷的報(bào)道，本發(fā)明提供了一種紫荊葉中提取分離阿福豆苷的方法，有利于更好地開發(fā)利用紫荊這一藥用植物。

（2）從紫荊葉中大量提取阿福豆苷更有利于植物的可持續(xù)利用。

（3）本發(fā)明提取得到的化合物阿福豆苷有廣泛的生物活性，且有豐富的原料來(lái)源；本發(fā)明提供了一種提取方法，便于對(duì)其進(jìn)行深入的研究。

（3）本發(fā)明提取工藝簡(jiǎn)單，易得到阿福豆苷單體，溶劑可回收利用，提取量大，可工業(yè)化生產(chǎn)。

具體實(shí)施方式

為了使本發(fā)明的技術(shù)目的、技術(shù)方案和有益效果更加清楚，下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作出進(jìn)一步的說(shuō)明，但所述實(shí)施例旨在解釋本發(fā)明，而不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制，實(shí)施例中未注明具體技術(shù)或條件者，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻(xiàn)所描述的技術(shù)或條件或者按照產(chǎn)品說(shuō)明書進(jìn)行。

下述實(shí)施例中，作為原料的紫荊葉采集于河南省潢川縣紫荊種植基地；所述乙醇、甲醇濃度均為體積濃度。

實(shí)施例1

一種從紫荊葉中提取阿福豆苷的方法，包括以下步驟：

（1）將4.5kg干燥的紫荊葉為原料，粉碎后用70%乙醇（70%乙醇的用量25l）、50℃提取3次，每次3h，合并提取液，減壓回收溶劑得到提取物浸膏；將提取物浸膏加水溶解，d-101大孔樹脂柱上樣后，依次用20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇和90%乙醇梯度洗脫，得到相應(yīng)洗脫部分；

（2）將步驟（1）所得40%乙醇洗脫部分用60目硅膠按照重量比1：30拌樣后裝柱，二氯甲烷與甲醇按照體積比10：1洗脫，薄層檢測(cè)，合并相同點(diǎn)進(jìn)行減壓回收溶劑，得阿福豆苷粗品；

（3）將步驟（2）所得阿福豆苷粗品用甲醇溶解，過(guò)sephadexlh-20凝膠色譜柱，100%甲醇洗脫，得阿福豆苷純品。

上述制得的阿福豆苷純品性狀呈黃色顆粒狀結(jié)晶，收率為0.022%。

對(duì)上述制得的阿福豆苷純品運(yùn)用多種譜學(xué)技術(shù)鑒定結(jié)構(gòu)，具體如下：

儀器材料：紫外在uv-210a紫外光譜測(cè)定儀上測(cè)定；1h，13cnmr圖譜由brukeram-400mhz核磁共振儀測(cè)定。tms為內(nèi)標(biāo)；二維核磁共振圖譜由drx-500mhz核磁共振儀測(cè)定；質(zhì)譜由vg.autospec-3000型質(zhì)譜儀測(cè)定。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：ei-msm/z:432[m]+1h-nmr(dmso-d6,400mhz)δ:12.62(1h,s),10.27(1h,s),7.75(2h,d,h-2',h-6'),6.91(2h,d,h-3',h-5'),6.41(1h,d,h-8),6.21(1h,d,h-6),5.29(1h,s,h-1''),0.79(3h,s,h-6'').13c-nmr(dmso-d6,100mhz)δ:177.76(c-4),164.30(c-7),161.33(c-5),160.04(c-4'),157.30(c-9),156.55(c-2),134.84(c-3),130.66(c-2',c-6'),120.56(c-1'),115.44(c-3',c-5'),104.17(c-10),101.81(c-1''),98.78(c-6),93.81(c-8),71.15(c-4''),70.68(c-3''),70.35(c-5''),70.12(c-2''),17.51(c-6'')。

檢查：利用tlc，在uv254nm呈強(qiáng)熒光；硫酸顯色劑顯色，110℃下5分鐘，呈現(xiàn)黃色。

含量測(cè)定：利用hplc，色譜條件：agilentsb-c18色譜柱；流動(dòng)相為甲醇：水（30：70~90：10），流速：0.8ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)254nm，保留時(shí)間值32.4min。經(jīng)檢測(cè)，純度≥99%。

實(shí)施例2

一種從紫荊葉中提取阿福豆苷的方法，包括以下步驟：

（1）以干燥的紫荊葉為原料，粉碎后用65%乙醇55℃提取2次，每次3.5h，合并提取液，減壓回收溶劑得到提取物浸膏；將提取物浸膏加水溶解，d-101大孔樹脂柱上樣后，依次用20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇和90%乙醇梯度洗脫，得到相應(yīng)洗脫部分；

（2）將步驟（1）所得40%乙醇洗脫部分用80目硅膠按照重量比1：29拌樣后裝柱，二氯甲烷與甲醇按照體積比9：1洗脫，薄層檢測(cè)，合并相同點(diǎn)進(jìn)行減壓回收溶劑，得阿福豆苷粗品；

（3）將步驟（2）所得阿福豆苷粗品用甲醇溶解，過(guò)sephadexlh-20凝膠色譜柱，100%甲醇洗脫，得阿福豆苷純品。

上述制得的阿福豆苷純品性狀呈黃色顆粒狀結(jié)晶，收率為0.020%，純度≥99%。

實(shí)施例3

一種從紫荊葉中提取阿福豆苷的方法，包括以下步驟：

（1）以干燥的紫荊葉為原料，粉碎后用75%乙醇45℃提取4次，每次2.5h，合并提取液，減壓回收溶劑得到提取物浸膏；將提取物浸膏加水溶解，d-101大孔樹脂柱上樣后，依次用20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇和90%乙醇梯度洗脫，得到相應(yīng)洗脫部分；

（2）將步驟（1）所得40%乙醇洗脫部分用100目硅膠按照重量比1：31拌樣后裝柱，二氯甲烷與甲醇按照體積比10：1洗脫，薄層檢測(cè)，合并相同點(diǎn)進(jìn)行減壓回收溶劑，得阿福豆苷粗品；

（3）將步驟（2）所得阿福豆苷粗品用甲醇溶解，過(guò)sephadexlh-20凝膠色譜柱，100%甲醇洗脫，得阿福豆苷純品。

上述制得的阿福豆苷純品性狀呈黃色顆粒狀結(jié)晶，收率為0.021%，純度≥99%。