本發(fā)明屬于分子免疫學領域，涉及抗原表位肽，具體涉及hla-a0201限制性細胞毒性t淋巴細胞(ctl)識別的cdk5表位肽及其應用。
背景技術：
：膠質瘤是神經系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，復發(fā)率高，預后差。主要原因是腫瘤的殘留病變難以消除。免疫治療可以進一步清除手術、放化療后的微小殘留病灶，從而可以減少或避免膠質瘤的復發(fā)。但是尋找腫瘤相關抗原是腫瘤免疫治療的關鍵，研究者不斷篩選新的腫瘤相關抗原以最終達到針對每位患者個體化治療的目的。研究顯示，細胞周期蛋白依賴性激酶5(cdk5)在膠質瘤中高表達，并與pd-l1表達相關。下調或者抑制cdk5蛋白的表達會使膠質瘤細胞顯著凋亡。本研究將cdk5蛋白作為膠質瘤免疫治療的候選靶抗原，并以表位肽來替代蛋白質作為靶點。因此，本領域技術人員致力于開發(fā)一種hla-a0201限制性細胞毒性t淋巴細胞識別的cdk5表位肽。技術實現(xiàn)要素：有鑒于現(xiàn)有技術中腫瘤特異性抗原的免疫原性不夠強等問題，本發(fā)明提供了一種cdk5抗原表位肽及其應用。本發(fā)明的第一方面提供了一種cdk5抗原表位肽，其選自以下任一項：1)含有seqidno.2所示的氨基酸序列的氨基酸序列組成的肽；2)含有seqidno.3所示的氨基酸序列的氨基酸序列組成的肽；3)通過對seqidno.2或seqidno.3所示的氨基酸序列添加、缺失或替換一個或多個氨基酸形成的氨基酸序列組成的肽，該肽能與hla-a0201分子形成復合物而被hla-a0201限制性細胞毒性t淋巴細胞識別或誘導hla-a0201限制性細胞毒性t淋巴細胞。進一步地，上述抗原表位肽為seqidno.2或seqidno.3所示的氨基酸序列組成的肽。本發(fā)明的第二方面提供了一種核苷酸序列，該核苷酸序列編碼上述抗原表位肽的氨基酸序列。本發(fā)明的第三方面提供了一種抗原呈遞細胞，該抗原呈遞細胞脈沖以上述抗原表位肽。本發(fā)明的第四方面提供了一種主要組織相容性抗原復合物，其包括hla-a0201分子和上述抗原表位肽。本發(fā)明的第五方面提供了一種細胞毒性t淋巴細胞誘導劑，該細胞毒性t淋巴細胞誘導劑的活性成分包括：1)如上所述的抗原表位肽；2)如上所述的抗原呈遞細胞；或3)如上所述的主要組織相容性抗原復合物。本發(fā)明的第六方面提供了一種癌癥疫苗，該癌癥疫苗的活性成分包括：1)如上所述的抗原表位肽；2)如上所述的抗原呈遞細胞；或3)如上所述的主要組織相容性抗原復合物。進一步地，上述癌癥為膠質瘤。本發(fā)明還提供了上述抗原表位肽在制備治療癌癥的藥物中的應用。優(yōu)選地，癌癥為膠質瘤。本發(fā)明通過在線篩選、t2細胞親和性和穩(wěn)定性實驗，篩選獲得了兩條目的抗原表位肽aa106和aa164。他們在健康供者及患者外周血中均存在，這為后續(xù)的研究供了必要條件。通過上述抗原表位肽，在專制抗原提呈細胞(如dc)的輔助下，激活ctl并使之擴增。激活后的ctl作用于cdk5蛋白來阻斷免疫耐受及免疫忽視，提高其免疫原性，從而有效地殺傷膠質瘤細胞，但是其對正常造血細胞沒有殺傷作用。據(jù)推測，在cdk5-ctl細胞下調了腫瘤細胞cdk5表達后，將會極大的恢復正常的活化t淋巴細胞的清除腫瘤作用。附圖說明圖1是本發(fā)明一個實施例的t2細胞親和實驗結果圖。其中，陰性對照flu-matrix為流感基質蛋白，陽性對照為hivpol，aa106和aa164為兩條預測的肽段。圖2是本發(fā)明一個實施例的t2細胞結合穩(wěn)定性實驗結果圖。圖3是本發(fā)明的一個實施例的cdk5-ctl中cd8+的細胞的cd45ra表達情況結果圖。圖4是本發(fā)明的一個實施例的cdk5-ctl中cd8+的細胞的cd45ro表達情況結果圖。圖5是本發(fā)明一個實施例的cdk5-ctl增殖實驗結果圖。圖6是本發(fā)明一個實施例的cdk5-ctl細胞殺傷實驗結果圖。圖7是本發(fā)明一個實施例的cdk5-ctl細胞功能實驗結果圖。具體實施方式以下將結合實施例對本發(fā)明作進一步地說明，應理解這些實施例僅作為例證的目的，不用于限制本發(fā)明的保護范圍。以下具體實施方式中使用的試劑，如無特殊說明，均可直接購買獲得。流式細胞儀購自beckmancoulter，型號為navios。t2細胞購自adcc。fitc標記的hla-a0201單克隆抗體bb7.2購自ebioscience。fitc標記的cd8+單克隆抗體購自ebioscience。多肽的合成可以通過現(xiàn)有技術中的任何方法進行，如固相肽合成法等。氨基酸的替換：通過氨基酸替換可以獲得類似或等同活性的突變體肽，該替換可以用具有與替換前的氨基酸的電荷、可溶性、親水性/疏水性、極性類似的氨基酸進行。t2細胞親和性和穩(wěn)定性分析的原理：t2細胞缺乏內源性抗原肽提呈中必須的抗原加工相關轉運蛋白，其本身表面只有少量空載的hla-a0201分子表達且極不穩(wěn)定。但當其表面mhci類分子與hla-a0201結合力強的肽段結合后，hla-a0201的表達情況會增強并穩(wěn)定。并且，hla-a0201分子和肽段的結合力越強，t2細胞表面的hla-a0201分子降解就越少，表現(xiàn)為hla-a0201分子的表達量越高。因此，可以直接用t2細胞表面hla-a0201分子表達的強弱來反應所預測表位肽與hla-a0201的結合能力。同型對照：使用與熒光標記抗體相同來源、相同標記、相同劑量和亞型的免疫球蛋白，用于消除由于抗體非特異性結合到細胞表面而產生的背景染色。實施例1：hla-a0201限制性cdk5蛋白ctl表位肽預測及合成(1)cdk5蛋白氨基酸序列的確定：通過在genbank數(shù)據(jù)庫中查找cdk5蛋白序列，獲得genbank登錄號為：cag33322.1的一種cdk5蛋白序列，其由292個氨基酸殘基組成，具體如seqidno.1所示。(2)cdk5蛋白表位肽的在線預測：利用表位肽預測數(shù)據(jù)庫a：https://www-bimas.cit.nih.gov/cgi-bin/molbio/ken_parker_comboform及b：http://www.syfpeithi.de/bin/mhcserver.dll/epitopeprediction.htm)提供的服務對hla-a0201限制性cdk5蛋白表位肽進行初步預測，選擇其中得分最高的數(shù)條表位肽，之后用超基序及量化基序方案對初步預測出的ctl表位肽進行修飾，以進一步提高積分。修飾后得分最高的兩條表位肽如表1所示：表1cdk5蛋白表位肽與人hla-a0201親和力預測積分(得分ia和得分iib分別代表使用上方a網(wǎng)站和b網(wǎng)站各自預測的分數(shù)。(3)多肽的合成、純化與鑒定：通過生物合成手段，合成、純化及鑒定了表1中的兩個肽段aa106和aa164(上海波泰生物科技公司)。(4)對照肽：選取文獻報道中的hlaa0201陽性肽和陰性肽作為對照。這兩條肽分別為：陽性肽hivpol：ilkepvhgv(seqidno.4)；陰性肽：流感病毒基質蛋白肽段(flu-matrix肽段)：gilgfvftl(seqidno.5)。實施例2：t2細胞表位肽結合親和及穩(wěn)定性實驗借助t2細胞的特性進行hla-a0201與肽段的親和能力及穩(wěn)定性測定。(1)t2細胞親和實驗收集t2細胞，用4℃的無菌pbs離心洗滌三次，加入無血清1640培養(yǎng)基，2×105/孔細胞接種于24孔細胞培養(yǎng)板中，設立實驗組及對照組，每組重復三個副孔，將未加肽刺激的t2細胞作為空白對照，每孔加入相應的實驗肽段(aa106和aa164)及對照肽段(陽性對照：hivpol肽段；陰性對照：流感病毒基質蛋白肽段flu-matrix)(終濃度50um)，同時加入β2微球蛋白(終濃度2.5ug/ml)。將細胞置于37℃，5％co2培養(yǎng)箱中孵育18h，再次收集細胞，4℃pbs洗滌三次，加入fitc標記的hla-a0201單克隆抗體bb7.2(2ul/孔)，4℃避光孵育15分鐘，4℃pbs洗滌3次，用流式細胞儀檢測平均熒光強度。用熒光系數(shù)(fi)作為衡量親和力指標，熒光系數(shù)>1的表位肽被認為與hla-a0201分子具有高親和力，熒光系數(shù)由以下公式計算得到：熒光系數(shù)(fi)＝(樣本平均熒光強度-空白對照平均熒光強度)/空白對照平均熒光強度。親和性實驗結果如圖1所示，aa106和aa164的用熒光系數(shù)(fi)均大于1，這表明aa106和aa164與hla-a0201分子具有高親和力。(2)t2細胞表位肽結合穩(wěn)定性實驗收集t2細胞，1×105/孔接種于96孔細胞培養(yǎng)板中，加入無血清1640培養(yǎng)基、β2微球蛋白以及相應的實驗肽段(aa106和aa164)，實驗組設置三個副孔。將細胞置于5％co2培養(yǎng)箱中孵育18h，再次收集細胞，洗滌后加入無血清1640培養(yǎng)基、胞外布雷菲德菌素共同孵育1h，收集細胞，洗滌后再次加入含有胞外布雷菲德菌素(0.5ug/ml)的無血清1640培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱中孵育，于不同的時間點(0、2、4、8、12、24h)收集細胞。加入fitc標記的hla-a0201單克隆抗體bb7.2(10ul/孔)，用流式細胞儀檢測平均熒光強度，計算出每個時間點的fi，用此衡量表位肽誘導的hla-a0201的表達情況。結合穩(wěn)定性實驗結果如圖2所示，在孵育24h時，肽段aa106和aa164仍然能和hla-a0201分子保持較好的親和性，這說明肽段aa106和aa164的結合穩(wěn)定性好。實施例3：肽段aa106相應五聚體陽性細胞毒性t細胞檢測肽段aa106相應五聚體是根據(jù)t細胞活化的雙識別原理，用生物工程技術將mhcⅰ類分子重鏈α與β2微球蛋白在體外組裝，并結合抗原表位肽形成一個能夠與相應tcr特異性結合的單體，再將5個單體組裝在一起形成五聚體。選取兩名健康供者及六名膠質瘤確診未緩解患者，檢測其外周血中cdk5表位肽五聚體陽性的cd8+細胞數(shù)目。收集健康供者及膠質瘤確診未緩解患者外周血5ml，用淋巴細胞分離液分離方法提取外周血單個核細胞，將細胞計數(shù)后取1×106個細胞，溶于100ulpbs中，加入2ul肽段aa106對應的pe標記的五聚體及同型對照，常溫避光孵育40分鐘后，冰面放置1分鐘，加入fitc標記的cd8+單克隆抗體，4℃避光15分鐘，取出后以4℃pbs洗3次，用500ulpbs重懸后用流式細胞儀進行檢測。流式結果判讀如表2所示，表明肽段aa106是cdk5蛋白在患者體內或者胞內裂解后的天然產物，為生理狀態(tài)下產生的表位肽片段，并且健康供者體內cdk5-ctl水平明顯低于膠質瘤患者。表2aa106的五聚體陽性的cd8+細胞數(shù)目檢測結果健康1健康2患者1患者2患者3患者4患者5患者6aa1060.15％0.23％0.99％1.25％2.11％0.81％1.78％1.45％實施例4：體外驗證cdk5蛋白特異性細胞毒性t細胞對膠質瘤細胞細胞溶解作用并研究其特性一、誘導生成細胞毒性t細胞：通過具有穩(wěn)定的hla-a0201+的健康供者的外周血，分離外周血單個核細胞(pbmc)，誘導培養(yǎng)dc細胞及細胞毒性t細胞(ctl)。1.1)獲取hla-a0201+健康供者外周血單個核細胞(1).抽取hla-a0201+健康供者外周血約20ml，肝素鈉抗凝。(2).將外周血加入50ml無菌離心管中，并加入等體積無菌pbs。(3).分2個50ml離心管，將約40ml稀釋的外周血緩慢加入40ml淋巴細胞分離液上，使兩者分兩層(分兩管操作)。(4).離心400g18min(相當于1500rpm/min)，離心機選擇慢加速及慢減速程序。(5).吸出在液相交界處的霧狀細胞層(即單個核細胞層)，裝入另一10ml離心管中。(6).將單個核細胞用無菌pbs重懸，300g10min(每次用10ml左右的沖洗液量)。(7).離心結束后棄上清，用保存于冰面的紅細胞裂解液4ml重懸并混合吹打，4℃冰箱放置10分鐘，再以300g10分鐘離心，棄上清。(8).將單個核細胞用無菌pbs洗兩遍，300g10min(每次用10ml左右的沖洗液量)。(9).用8ml含有10％fbs的1640培養(yǎng)基重懸單個核細胞。1.2)誘導生成dc細胞(1).將提取的單個核細胞按照每孔1×106個加入24孔板中，37℃，5％二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置2h，使單核細胞貼壁。(2).吸盡24孔板中的細胞懸液，并用含有10％fbs的1640培養(yǎng)基0.5ml輕輕沖刷每孔，重復三次，按需要決定是否收集吸出的細胞懸液(其中含有單個核細胞)。(3).每孔加入1ml含有10％fbs的1640培養(yǎng)基，并加入gm-csf10ng/ml及il-410ng/ml。(4).每3日半量換液一次，換液時同樣加入gm-csf10ng/ml及il-410ng/ml，第5日半量換液，加入gm-csf10ng/ml、il-410ng/ml及tnf-α10ng/ml，48h后dc細胞成熟。(5).加入aa106肽段，濃度為50ng/ml，37℃，5％二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置2-4h。(6).30gy伽馬射線照射成熟的dc細胞。(7).吸除所有上清，準備加入淋巴細胞或者誘導的ctl細胞。1.3).pbmc來源ctls的產生(1).第一次淋巴細胞與dc細胞共培養(yǎng)時，將1.2步驟中的細胞懸液收集并以1000轉10分鐘離心，后用含有il-250iu/ml、il-72.5ng/ml及il-155ng/ml的10％fbs的1640培養(yǎng)基重懸，將淋巴細胞計數(shù)后與成熟dc細胞按照10：1比例混合。(2).每2-3日半量換液一次，同時加入il-250iu/ml、il-72.5ng/ml及il-155ng/ml。(3).第7日新的dc成熟后，將淋巴細胞吹打后吸出，移入新生成dc孔中并與之共培養(yǎng)。(4).每次與新的dc細胞共培養(yǎng)前，需取樣檢測特異性，一般與dc共培養(yǎng)4次。1.4)ctl細胞cd8及五聚體雙陽性率的檢測(1)取5×105個培養(yǎng)的ctl細胞(每次與dc共培養(yǎng)后第7天)，加入無菌pbs5ml，以1000轉10分鐘離心，棄上清，以100ul無菌pbs重懸.(2)在細胞懸液中加入5μl帶有熒光標記的mhc/肽多聚體(epimer)，室溫避光反應15分鐘。置細胞于冰上，孵育1分鐘。加入抗-cd8-fitc。在冰上繼續(xù)避光反應20分鐘。(3)pbs洗滌液洗細胞3次，400xg5分鐘，細胞沉淀重懸于適量pbs洗滌液中。(4)細胞流式儀分析。利用流式細胞儀技術的檢測，得到cd8+陽性及五聚體陽性細胞比例超過10％以上的cdk5-ctl，用以完成后續(xù)實驗。ctl細胞的產生結果表3所示。表3四輪沖擊后cdk5-ctl細胞的比例第一輪第二輪第三輪第四輪比例2.2％5.5％8.9％13.5％二、細胞表型測定：抗原特異性ctls細胞表型應與初始(naive)t細胞有所區(qū)別，借助cd45ro及cd45ra檢測誘導生產的ctl細胞與同一來源健康供者外周血表型區(qū)別，一般認為，特異性ctl細胞中cd8+的細胞高表達cd45ro，低表達cd45ra；相應的未經過與dc細胞共培養(yǎng)的健康供者外周血pbmc中，cd8+的細胞高表達cd45ra，低表達cd45ro。1.取3×106個培養(yǎng)的ctl細胞(第四次與dc共培養(yǎng)后5天)，加入無菌pbs5ml，以1000轉10分鐘離心，棄上清，以100ul無菌pbs重懸。同時取未經過與dc共培養(yǎng)的外周血pbmc作為對照組。2.在細胞懸液中加入5μl帶有熒光標記的mhc/肽多聚體(epimer)，室溫避光反應15分鐘。置細胞于冰上，孵育1分鐘。加入抗-cd8-fitc及抗-cd45ra-apc或抗cd45ro-apc。在冰上繼續(xù)避光反應20分鐘。3.pbs洗滌液洗細胞3次，400xg5分鐘，細胞沉淀重懸于適量pbs洗滌液中。4.細胞流式儀分析。流式分析結果如圖3和圖4所示，表明特異性ctl細胞中cd8+的細胞高表達cd45ro，低表達cd45ra。三、ctl細胞增殖實驗：取經過與dc細胞共培養(yǎng)四周的ctl細胞進行實驗，即使用上方一中誘導產生的ctl進行實驗。在流式細胞學檢測方法中，用cfse標記ctl細胞，并將其與照射過的hla-a0201+的膠質瘤細胞株共培養(yǎng)，以檢測cdk5-ctl是否會表現(xiàn)出特定的細胞增殖。一般認為只有在與hla-a0201+的膠質瘤細胞株共培養(yǎng)時，cdk5-ctl細胞才表現(xiàn)出明顯的增殖，在沒有任何抗原刺激的情況下，cdk5-ctl細胞不增殖，在mhc不匹配的情況下，cdk5-ctl細胞也不增殖。通過這個實驗，將論證cdk5-ctl細胞對膠質瘤細胞的作用是否受限于抗原特異性及mhci類分子限制性。取經過與dc細胞共培養(yǎng)四周的ctls細胞進行實驗。cck-8試劑盒法，取經過與dc細胞共培養(yǎng)四周的ctls細胞進行實驗：(1).獲取dc細胞，方法如本實施例的誘導生成細胞毒性t細胞部分的1.2)，dc細胞在24孔板中誘導成熟。(2).dc細胞成熟后分為實驗組及對照組：實驗組的dc細胞加入篩選出的肽段aa·06沖擊(50ng/ml)，對照組的dc不加入肽段。(3).放入37℃5％二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-4小時后，將實驗組及對照組dc細胞從培養(yǎng)箱取出，棄上清，以少量培養(yǎng)基重懸dc細胞并計數(shù)。(4).取出共培養(yǎng)四周的ctls細胞，吹打重懸后計數(shù)。(5).將實驗組及對照組的dc細胞分別與ctls細胞按照梯度混合共培養(yǎng)，設置三個梯度：dc細胞與ctls細胞的比例分別為：4:1、20:1及100：1。(6).混合的幾組細胞重新計數(shù)，取96孔板，每孔接種1×105個細胞，培養(yǎng)基為含有10％fbs的1640培養(yǎng)基，不加任何細胞因子，放入37℃5％二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)12小時。每組設4個復孔，每孔均加入10ulcck-8試劑。(7).12小時后取出96孔板，震蕩10分鐘，采用雙波長酶標儀讀取450nm波長吸光度(od)值，均應減除空白對照組od值。(8).根據(jù)第12小時時間點測得od值繪制改點各組細胞增殖情況。結果如圖5所示，負載肽段的dc細胞才可以刺激ctl細胞增殖，形成特異性的cdk5-ctl細胞。加入肽段aa106沖擊后，t細胞出現(xiàn)了明顯的增殖。四、ctl細胞殺傷實驗：用流式細胞學靶細胞pi及cd138+雙標染色方法檢測cdk5-ctls細胞對hla-a0201±的原代膠質瘤細胞及膠質瘤細胞株的特異性溶解作用。取經過與dc細胞共培養(yǎng)四周的ctl細胞進行實驗，即使用上方一中誘導產生的ctl進行實驗。(1).取10×106個培養(yǎng)的ctl細胞，加入無菌pbs5ml，以1000轉10分鐘離心，棄上清，以10ml無菌pbs重懸，使其達到每1ml有1×106個細胞。(2).加入cfse使其終濃度為3μm，放入37℃二氧化碳培養(yǎng)箱孵育15分鐘，每5分鐘搖勻細胞。(3).取出細胞后加入等量胎牛血清放入4℃冰箱終止10分鐘。(4).用無菌pbs洗滌三次，每次為1000轉10分鐘。(5).用含有10％fbs的1640重懸，使細胞濃度達到1×106/ml。(6).將細胞分組移入24孔培養(yǎng)板中，每孔ctl細胞為1×106個。各實驗組為ctl細胞分別按10：1、5:1、1:1比例加入hla-a0201+膠質瘤細胞株或原代細胞、hla-a0201-膠質瘤細胞株或原代細胞、4個患者細胞，每組設3個復孔。(7).效靶細胞混合培養(yǎng)4小時后，取出并收集各組細胞，用pbs重懸后1000轉離心10分鐘，棄上清；(8).以100ulpbs重懸，避光加入pi，4℃避光15分鐘后上流式細胞儀進行檢測。實驗結果如圖6所示，其中a2+代表hla-a0201+細胞株，a2-是指非hlaa2細胞株，p1代表hla-a0201+患者1，p2代表hla-a0201+患者2，p3代表非hla-a0201患者3，p4代表非hla-a0201患者4。結果表明，獲得的cdk5-ctl細胞對hla-a0201+性細胞有良好的細胞殺傷作用，而對非hla-a0201性細胞基本沒有細胞殺傷作用。并且，當效應細胞與靶細胞的體積比為10:1時，細胞殺傷作用能達到50％以上。所以，來自于健康供者的cdk5蛋白特異性細胞毒性t細胞能有效地殺傷膠質瘤細胞，并且對正常造血細胞沒有殺傷作用。特別地，在cdk5-ctl細胞下調了腫瘤細胞cdk5表達后，將會極大的恢復正常的活化t淋巴細胞的清除腫瘤作用。六、cdk5-ctl細胞功能測定：為了衡量cdk5-ctl細胞殺傷膠質瘤細胞株的效能，借助測量cd107a在cdk5-ctl細胞表面的表達，評估其細胞殺傷膠質瘤細胞時的脫顆粒作用。其中，脫粒作用即cd107a在ctl細胞釋放細胞毒顆粒時會短暫的在ctls細胞膜表面表達。(1).取1×106個培養(yǎng)的ctls細胞，以1000轉10分鐘離心，棄上清，用含有10％fbs的1640重懸，使體積為333ul。(2).兩組分別取2×106個培養(yǎng)的膠質瘤細胞株(hla-a0201-及hla-a0201+各一組)，以1000轉10分鐘離心，棄上清，用含有10％fbs的1640重懸，使體積為667ul。(3).將ctl細胞333ul與靶細胞(hla-a0201-及hla-a0201+各一組)667ul混合，共1ml。(4).將效靶細胞混合液放入v型底96孔培養(yǎng)板中，每孔100ul，共10孔。(5).將放有細胞的96孔板放入37℃5％二氧化碳培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)4小時(對96孔板進行離心1000轉5分鐘)。(6).培養(yǎng)4h后取出培養(yǎng)板，吹勻并吸出每孔細胞懸液，將10孔細胞混合。(7).向效靶細胞混合液中加入5ml無菌pbs，混勻后以1000轉10分鐘離心，棄上清。以100ul無菌pbs重懸效靶細胞混合液，加入2ul抗-cd8-fitc及10ul抗-cd107a-pc5在冰上避光反應20分鐘。(8).用無菌pbs洗滌液洗細胞3次，400xg5分鐘，細胞沉淀重懸于500ulpbs中。用流式細胞儀進行檢測。檢測結果如圖7所示，圖中，a2+是指hla-a0201+細胞株；a2-是指非hla-a0201細胞株。cdk5-ctl細胞與hla-a0201+膠質瘤細胞株共培養(yǎng)后，cd8+細胞中cd107a的表達明顯上升，表明ctl殺傷hla-a0201+膠質瘤細胞株時的脫顆粒作用明顯。序列表<110>上海交通大學醫(yī)學院附屬新華醫(yī)院<120>cdk5抗原表位肽及其應用<160>5<170>patentinversion3.3<210>1<211>292<212>prt<213>homosapiens（智人）<400>1metglnlystyrglulysleuglulysileglygluglythrtyrgly151015thrvalphelysalalysasnarggluthrhisgluilevalalaleu202530lysargvalargleuaspaspaspaspgluglyvalproserserala354045leuarggluilecysleuleulysgluleulyshislysasnileval505560argleuhisaspvalleuhisserasplyslysleuthrleuvalphe65707580gluphecysaspglnaspleulyslystyrpheaspsercysasngly859095aspleuaspprogluilevallysserpheleupheglnleuleulys100105110glyleuglyphecyshisserargasnvalleuhisargaspleulys115120125proglnasnproleuileasnargasnglygluleulysleualaasp130135140pheglyleualaargalapheglyileprovalargcystyrserala145150155160gluvalvalthrleutrptyrargproproaspvalleupheglyala165170175lysleutyrserthrserileaspmettrpseralaglycysilephe180185190alagluleualaasnalaglyargproleupheproglyasnaspval195200205aspaspglnleulysargilepheargleuleuglythrprothrglu210215220gluglntrpprosermetthrlysleuproasptyrlysprotyrpro225230235240mettyrproalathrthrserleuvalasnvalvalprolysleuasn245250255alathrglyargaspleuleuglnasnleuleulyscysasnproval260265270glnargileseralagluglualaleuglnhisprotyrpheserasp275280285phecyspropro290<210>2<211>9<212>prt<213>人工序列<220><223>aa106<400>2pheleupheglnleuleulysglyleu15<210>3<211>9<212>prt<213>人工序列<220><223>aa164<400>3thrleutrptyrargproproaspval15<210>4<211>9<212>prt<213>人工序列<220><223>hivpol<400>4ileleulysgluprovalhisglyval15<210>5<211>9<212>prt<213>人工序列<220><223>flu-matrix肽段<400>5glyileleuglyphevalphethrleu15當前第1頁12