本發(fā)明屬害蟲生物防治
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及一株球孢白僵菌（Beauveriabassiana）菌株及其在防治刺吸式害蟲粉虱、蚜蟲上的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：隨著生活水平的不斷提高，人們對(duì)食品質(zhì)量的要求也越來(lái)越高，對(duì)食品安全和環(huán)境污染問(wèn)題也越來(lái)越關(guān)注，無(wú)公害食品和綠色食品生產(chǎn)應(yīng)運(yùn)而生。農(nóng)產(chǎn)品安全問(wèn)題往往是國(guó)際貿(mào)易壁壘中的籌碼，綠色植保也倍受關(guān)注。保護(hù)地刺吸式害蟲粉虱、蚜蟲繁殖力強(qiáng)，易對(duì)化學(xué)藥劑產(chǎn)生抗藥性，迫切需要發(fā)展綠色防控措施來(lái)替代或減少化學(xué)農(nóng)藥的使用。球孢白僵菌是一種昆蟲病原真菌，分布廣泛，可以用于防治蠐螬、小地老虎、粉虱、蚜蟲、薊馬、葉甲、棉鈴蟲、玉米螟、天牛等害蟲，其中著名的應(yīng)用是防治蠐螬、玉米螟、松毛蟲、茶小綠葉蟬，具有很好的應(yīng)用效果。球孢白僵菌作為一種活體生物農(nóng)藥，具有不同于化學(xué)殺蟲劑的全新的作用機(jī)理、對(duì)環(huán)境友好的特征，可以作為防治某些對(duì)化學(xué)殺蟲劑產(chǎn)生抗藥性的害蟲的替代防治藥物，開發(fā)利用球孢白僵菌具有重要的經(jīng)濟(jì)意義?？茖W(xué)研究表明，不同地理種群或不同株系的球孢白僵菌對(duì)害蟲的毒力存在較大的差異，即使同一株系的球孢白僵菌對(duì)不同種類害蟲的毒力也不相同，因此在應(yīng)用真菌進(jìn)行生物防治的過(guò)程中針對(duì)不同種類的害蟲經(jīng)常要篩選高毒力菌株。本發(fā)明針對(duì)這一農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的重要需求而研發(fā)，發(fā)現(xiàn)一株與以往菌株不同的高效生防菌株，測(cè)定了了該菌株的特征和生物學(xué)特性，建立了該菌株的防治應(yīng)用技術(shù)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一株對(duì)環(huán)境友好、對(duì)刺吸式害蟲粉虱、蚜蟲高效寄生的球孢白僵菌菌株。本發(fā)明的再一個(gè)目的在于提供球孢白僵菌在作物病蟲防治上的應(yīng)用。本發(fā)明上述目的通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：本發(fā)明首先提供了一株球孢白僵菌。所述的球孢白僵菌菌株RBBA1209，白僵菌屬，分離于河北廊坊地區(qū)被侵染的煙粉虱蟲體上，菌株保藏號(hào)為CCMCCNo.8461，2013年11月11日在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏。所述的球孢白僵菌菌株形態(tài)特征：菌落背面無(wú)色至淡黃色，分生孢子梗多著生在營(yíng)養(yǎng)菌絲上，粗1.2～2.1μm，產(chǎn)孢細(xì)胞濃密簇生于菌絲、分生孢子梗或膨大的泡囊上，球形至瓶形，頸部明顯延長(zhǎng)成粗1.1μm、長(zhǎng)達(dá)2.2μm的產(chǎn)孢軸，軸上有小齒突，呈膝狀彎曲。產(chǎn)孢細(xì)胞和泡囊在分生孢子?；蚓z上聚成球形至卵形的孢子頭，分生孢子球形或近球形，透明，光滑，2.1～3.1×2～2.6μm。所述的球孢白僵菌菌株的培養(yǎng)特性：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基（氯化鉀0.50g，七水硫酸亞鐵0.01g，磷酸氫二鉀1.0g，七水硫酸鎂0.50g，硝酸鈉2g，蔗糖30g，瓊脂15g，水1000ml，pH自然）的基礎(chǔ)上，用等當(dāng)量的不同的碳源取代基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的碳源。不同碳源上的菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢量的結(jié)果顯示，球孢白僵菌菌株RBBA1209菌絲生長(zhǎng)偏好蔗糖，第14天時(shí)在蔗糖培養(yǎng)基上菌落直徑為5.69cm（見表1）；產(chǎn)孢也偏好蔗糖，第14天時(shí)在蔗糖上產(chǎn)孢量為13.96×109個(gè)孢子/ml（見表2）。表1不同碳源上球孢白僵菌菌株RBBA1209的菌落生長(zhǎng)特征碳源第6天第8天第10天第12天第14天葡萄糖1.21±0.051.84±0.042.62±0.043.01±0.023.37±0.15麥芽糖1.22±0.062.14±0.063.17±0.014.08±0.045.03±0.09蔗糖1.62±0.012.79±0.03.63±0.034.39±0.055.69±0.09可溶性淀粉1.32±0.011.98±0.052.74±0.083.53±0.084.21±0.12乳糖1.24±0.051.94±0.052.86±0.043.72±0.024.62±0.03甘油1.21±0.021.93±0.022.82±0.043.56±0.044.32±0.03注：表中數(shù)據(jù)為3次重復(fù)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（S.E）表2不同碳源上球孢白僵菌菌株RBBA1209的產(chǎn)孢特征碳源種類第14天的產(chǎn)孢量（109個(gè)孢子/ml）葡萄糖5.26±0.29麥芽糖4.88±0.75蔗糖13.96±0.25可溶性淀粉2.08±0.34乳糖3.98±0.82甘油2.64±0.26注：表中數(shù)據(jù)為3次重復(fù)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（S.E）用麥芽糖替代基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的蔗糖，以等當(dāng)量的5種氮源[蛋白胨、硝酸鉀、硫酸銨、脲（尿素）和酵母浸粉]分別替代基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的硝酸鈉（以硝酸鈉作對(duì)照）。不同氮源上的菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢量的結(jié)果顯示，球孢白僵菌菌株RBBA1209菌絲生長(zhǎng)偏好酵母浸粉，第14天時(shí)在酵母浸粉培養(yǎng)基上的菌落直徑為5.29cm（見表3）；產(chǎn)孢偏好蛋白胨，第14天時(shí)在蛋白胨培養(yǎng)基上產(chǎn)孢量為51.20×108個(gè)孢子/ml（見表4）。表3不同氮源上球孢白僵菌菌株RBBA1209的菌落生長(zhǎng)特征氮源第6天第8天第10天第12天第14天硝酸鉀1.32±0.032.07±0.052.84±0.063.67±0.054.33±0.10硫酸銨1.42±0.071.91±0.062.15±0.082.35±0.102.50±0.13蛋白胨1.64±0.022.43±0.053.36±0.014.24±0.034.98±0.05酵母浸粉1.95±0.042.82±0.073.79±0.104.61±0.155.29±0.19脲1.51±0.052.21±0.043.05±0.053.82±0.064.51±0.07硝酸鈉1.36±0.061.71±0.062.08±0.072.90±0.083.66±0.04注：表中數(shù)據(jù)為3次重復(fù)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（S.E）表4不同氮源上球孢白僵菌菌株RBBA1209的產(chǎn)孢特征碳源種類第14天時(shí)的產(chǎn)孢量（108個(gè)孢子/ml）硝酸鉀15.72±2.25硫酸銨7.28±0.83蛋白胨51.20±3.35酵母浸粉11.04±1.73脲19.68±1.27硝酸鈉10.08±0.83注：表中數(shù)據(jù)為3次重復(fù)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（S.E）在改良的PDA培養(yǎng)基(馬鈴薯200g/L，葡萄糖20g/L，蛋白胨10g/L，瓊脂20g/L，加蒸餾水定容1000ml)上，不同溫度下的菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢量的結(jié)果顯示，球孢白僵菌菌株RBBA1209菌落生長(zhǎng)最適溫度為27℃，在此溫度下第14天時(shí)的菌落生長(zhǎng)直徑為5.21cm（見表5）；產(chǎn)孢最適溫度也是27℃，在此溫度下第14天時(shí)的產(chǎn)孢量為115.46×106個(gè)孢子/ml（見表6）。表5不同溫度下球孢白僵菌菌株RBBA1209的菌落生長(zhǎng)特征溫度（℃）第6天第8天第10天第12天第14天150.27±0.020.63±0.021.05±0.011.39±0.011.72±0.01190.56±0.051.07±0.041.62±0.022.07±0.022.55±0.04230.98±0.021.38±0.032.00±0.072.48±0.112.92±0.14271.79±0.082.45±0.123.00±0.233.99±0.405.21±0.61291.02±0.092.10±0.123.00±0.293.57±0.444.04±0.48311.10±0.011.93±0.012.80±0.033.81±0.023.81±0.02注：表中數(shù)據(jù)為3次重復(fù)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（S.E）表6不同溫度下球孢白僵菌菌株RBBA1209的產(chǎn)孢特征溫度（℃）第14天的產(chǎn)孢量（106個(gè)孢子/ml）1511.79±6.651918.73±1.912356.16±39.2927115.46±29.7229106.88±24.833197.46±21.00注：表中數(shù)據(jù)為3次重復(fù)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（S.E）所述球孢白僵菌菌株在防治刺吸式害蟲粉虱、蚜蟲上的應(yīng)用：球孢白僵菌菌株產(chǎn)生的分生孢子，對(duì)溫室害蟲粉虱、蚜蟲具有高侵染能力，孢子能附著在昆蟲的表皮，并萌發(fā)產(chǎn)生芽管，菌株借助芽管從昆蟲的節(jié)間膜侵入，繼而消化和破壞昆蟲的組織，殺死昆蟲。菌株孢子的應(yīng)用制劑，可配制成10%球孢白僵菌可濕性粉劑進(jìn)行植物葉面噴霧殺蟲，其配方組成含量比例（重量比）為：球孢白僵菌純孢粉（200億孢子/克）10%，葡萄糖（粉末）2%、木質(zhì)素磺酸鈉1%、淀粉3%，分散劑BD553%、洗衣粉3%、高嶺土補(bǔ)至100%。田間應(yīng)用時(shí)將該制劑加水稀釋2000倍，其懸浮液中蠟蚧輪枝菌孢子的濃度為106個(gè)/ml，使用大容量噴霧器均勻噴灑在有害蟲（粉虱、蚜蟲）的植物表面，在相對(duì)濕度85%的溫室環(huán)境中，對(duì)白粉虱（Trialeurodesvaporariorum）、棉蚜（Aphisgossypii）7天的累計(jì)防治效果分別達(dá)到98.7%和99.6%，可有效控制害蟲種群，可用于無(wú)公害蔬菜和綠色食品蔬菜的生產(chǎn)溫室。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(diǎn)和有益效果：本發(fā)明使用的菌株是從河北廊坊地區(qū)被侵染的煙粉虱蟲體上分離獲得，為中國(guó)本土的菌株，能很好地適應(yīng)本地的自然環(huán)境。本專利中的球孢白僵菌RBBA1209是從眾多同類菌株中篩選出來(lái)，專門用于防治粉虱等害蟲的球孢白僵菌優(yōu)勢(shì)菌株，具有毒力強(qiáng)、殺蟲速度快、對(duì)環(huán)境友好特點(diǎn)。本發(fā)明適應(yīng)了有機(jī)食品生產(chǎn)的需求，對(duì)粉虱、蚜蟲等害蟲有特殊的防治效果。具體實(shí)施方式發(fā)明人通過(guò)大量的室內(nèi)篩選和田間試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)球孢白僵菌對(duì)粉虱、蚜蟲等害蟲具有良好防控效果。為了更好的理解發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面結(jié)合實(shí)例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容作詳細(xì)的說(shuō)明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限如此，不能因此而理解為對(duì)本發(fā)明專利范圍的限制。實(shí)施例1：真菌孢子的大量培養(yǎng)將球孢白僵菌菌株的菌種在25℃的搖瓶中培養(yǎng)48h~72h，將其作為種子，按8%的體積量接到玉米粉與稻殼組成的固體培養(yǎng)上，25℃無(wú)菌袋內(nèi)培養(yǎng)7天，開袋培養(yǎng)2天。培養(yǎng)結(jié)束后，35℃的烘房中烘干2天，粉碎烘干的培養(yǎng)物，過(guò)篩（250目、320目、400目），即可得到純孢粉（含孢子95%）。這種純孢粉可用于配制田間應(yīng)用的制劑，用于防治溫室害蟲。實(shí)施例2：防治溫室蔬菜上的白粉虱將生產(chǎn)所得到的純孢粉，按：球孢白僵菌純孢粉（200億孢子/克）10%，葡萄糖（粉末）2%、木質(zhì)素磺酸鈉1%、淀粉3%，分散劑BD553%、洗衣粉3%、高嶺土補(bǔ)至100%，混合后制得10%球孢白僵菌可濕性粉劑。混配制劑加水2000倍稀釋，噴霧防治溫室黃瓜上的白粉虱（Trialeurodesvaporariorum），當(dāng)溫室室內(nèi)溫度為26℃，相對(duì)濕度85%時(shí)，7天的累計(jì)防治效果可達(dá)到98.7%。實(shí)例3：防治溫室蔬菜上的棉蚜將生產(chǎn)所得到的純孢粉，按：球孢白僵菌純孢粉（200億孢子/克）10%，葡萄糖（粉末）2%、木質(zhì)素磺酸鈉1%、淀粉3%，分散劑BD553%、洗衣粉3%、高嶺土補(bǔ)至100%，混合后制得10%球孢白僵菌可濕性粉劑?；炫渲苿┘铀?000倍稀釋，噴霧防治溫室黃瓜上的棉蚜（Aphisgossypii），當(dāng)溫室室內(nèi)溫度為26℃，相對(duì)濕度85%時(shí)，7天的累計(jì)防治效果可達(dá)到99.6%。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3