本發(fā)明涉及到解一株淀粉芽孢桿菌(bacillusamyloliquefaciens)h47和短小芽孢桿菌及蘇云金桿菌微生物發(fā)酵蒼耳制備植物源殺蟲劑的生產(chǎn)方法，屬于微生物和發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
蒼耳(xanthiumsibiricumpatrinexwidder)(原變種)一年生草本，高20-90cm。根紡錘狀，分枝或不分枝。莖直立不枝或少有分枝，下部圓柱形，徑4-10mm，上部有縱溝，被灰白色糙伏毛。葉三角狀卵形或心形，長4-9cm，寬5-10cm，近全緣，或有3-5不明顯淺裂，頂端尖或鈍，基部稍心形或截形，與葉柄連接處成相等的楔形，邊緣有不規(guī)則的粗鋸齒，有三基出脈，側(cè)脈弧形，直達葉緣，脈上密被糙伏毛，上面綠色，下面蒼白色，被糙伏毛；葉柄長3-11cm。雄性的頭狀花序球形，徑4-6mm，有或無花序梗，總苞片長圓狀披針形，長1-1.5mm，被短柔毛，花托柱狀，托片倒披針形，長約2mm，頂端尖，有微毛，有多數(shù)的雄花，花冠鐘形，管部上端有5寬裂片；花藥長圓狀線形；雌性的頭狀花序橢圓形，外層總苞片小，披針形，長約3mm，被短柔毛，內(nèi)層總苞片結(jié)合成囊狀，寬卵形或橢圓形，綠色，淡黃綠色或有時帶紅褐色，在瘦果成熟時變堅硬，連同喙部長12-15mm，寬4-7mm，外面有疏生的具鉤狀的刺，刺極細而直，基部微增粗或幾不增粗，長1-1.5mm，基部被柔毛，常有腺點，或全部無毛；喙堅硬，錐形，上端略呈鐮刀狀，長2.5mm，常不等長，少有結(jié)合而成1個喙。瘦果2，倒卵形?；ㄆ?-8月，果期9-10月。
含蒼耳甙(xanthostrumarin)。葉含蒼耳醇(xanthanol)、異蒼耳醇(jsoxanthanol)、蒼耳酯(xanthumin)等。果實含蒼耳甙、脂肪油、樹脂、生物堿、維生素c。蒼耳甙(strumaroside)，即b-谷甾醇葡萄糖甙)、黃質(zhì)寧(xanthinin)、蒼耳明(xanthumin，是黃質(zhì)寧的立體異構(gòu)體)、8-(△2-異戊烯基)-5，7，3，4-四羥基黃酮[8-(△2-isopen-tenyl)-5，7，3，4-tetrahydroxy-flavone]，以及咖啡酸和1，4-二咖啡?？鼘幩岬却紊x產(chǎn)物，具有一定的殺蟲效果，尤其是對蠅蛆類和桃蚜有較好的殺滅作用。
植物源殺蟲劑具有安全、高效、低毒、低殘留等特點，符合害蟲綠色防治的要求，將成為研究者的新寵。利用合適的植物促生菌發(fā)酵蒼耳，不僅有利于生理活性物質(zhì)的提取，還不易造成活性物質(zhì)的失活，促生菌本身還有較好的殺蟲防病和促生作用。有利于改善植物生長和增強殺蟲效果，有利于環(huán)境保護和蒼耳植物本身的有效利用。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷，本發(fā)明利用蒼耳植物為原料，用2013年6月24日保存于中國典型培養(yǎng)物保藏中心的，保藏編號為：cctccno：m2013283的解淀粉芽孢桿菌(bacillusamyloliquefaciens)h47(該菌株以下簡稱：解淀粉芽孢桿菌h47cctccm2013283)和市售短小芽孢桿菌及市售蘇云金桿菌發(fā)酵制備植物源殺蟲劑，有利于改善植物生長和增強殺蟲效果，有利于環(huán)境保護。
發(fā)明的發(fā)酵技術(shù)方案：
1)菌種準備：將解淀粉芽孢桿菌h47cctccm2013283和市售短小芽孢桿菌、市售蘇云金桿菌分別接種于種子培養(yǎng)基，于30℃，250r/min震蕩培養(yǎng)12h；所述種子培養(yǎng)基成分按g/l計為：蛋白胨10，酵母膏5，nacl10，其余成分為水，121℃高壓滅菌15min，調(diào)整ph至7.0。按一定比例混合做種子。
2)發(fā)酵液準備：選用質(zhì)量優(yōu)良的蒼耳，用水沖洗，70％—75％酒精浸泡3min，用水洗凈，經(jīng)攪碎機攪碎后待用。
3)發(fā)酵罐空消及空氣管道消毒：按相關(guān)說明書進行發(fā)酵罐空消。
4)發(fā)酵液實消：將步驟2所得蒼耳放入發(fā)酵罐中，補充自來水至終體積為10l，按相關(guān)說明書進行實消滅菌。
5)接種培養(yǎng)：當(dāng)發(fā)酵罐溫度降至37℃時，將步驟1所得種子按體積比1％的接種量，接種至裝有蒼耳的發(fā)酵罐中，25—30℃條件下培養(yǎng)3—12天，設(shè)置工藝要求的通氣量并保持罐壓，設(shè)置各其他培養(yǎng)參數(shù)培養(yǎng)。
6)出料：培養(yǎng)完畢，放出發(fā)酵液，過濾，過濾后所得發(fā)酵液即為殺蟲劑成品。本發(fā)明的有益效果：
本發(fā)明提供了發(fā)酵蒼耳制得一種生物源殺蟲劑的方法。本發(fā)明制備方法及過程中無污染安全可靠，發(fā)酵時間周期短，工藝環(huán)節(jié)少，簡單易操作，可節(jié)省投資和運行費用。與傳統(tǒng)化學(xué)藥劑相比，其具綠色安全，環(huán)境友好等優(yōu)勢，且促生菌本身還有較好的殺蟲防病和促生作用，擁有廣闊的應(yīng)用前景。
具體實施方法：
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明進行進一步描述。以下實施例僅為本發(fā)明的幾個具體實施例，但本發(fā)明的設(shè)計構(gòu)思并不局限于此，凡利用此構(gòu)思對本發(fā)明進行非實質(zhì)性的改動，均應(yīng)屬于侵犯本發(fā)明保護范圍的行為。
實施例1
1)菌種準備：將解淀粉芽孢桿菌h47cctccm2013283和市售短小芽孢桿菌、市售蘇云金桿菌分別接種于種子培養(yǎng)基，于30℃，250r/min震蕩培養(yǎng)12h；所述種子培養(yǎng)基成分按g/l計為：蛋白胨10，酵母膏5，nacl10，其余成分為水，121℃高壓滅菌15min，調(diào)整ph至7.0。按2:2:1混合做種子。
2)發(fā)酵液準備：選用質(zhì)量優(yōu)良的蒼耳，用水沖洗，70％—75％酒精浸泡3min，用水洗凈，經(jīng)攪碎機攪碎后待用。
3)發(fā)酵罐空消及空氣管道消毒：按相關(guān)說明書進行發(fā)酵罐空消。
4)發(fā)酵液實消：將步驟2所得蒼耳放入發(fā)酵罐中，補充自來水至終體積為10l，按相關(guān)說明書進行實消滅菌。
5)接種培養(yǎng)：當(dāng)發(fā)酵罐溫度降至37℃時，將步驟1所得種子按體積比1％的接種量，接種至裝有蒼耳的發(fā)酵罐中，25℃條件下培養(yǎng)6天，設(shè)置工藝要求的通氣量并保持罐壓，設(shè)置各其他培養(yǎng)參數(shù)培養(yǎng)。
6)出料：培養(yǎng)完畢，放出發(fā)酵液，過濾，過濾后所得發(fā)酵液即為殺蟲劑成品。
實施例2
1)菌種準備：將解淀粉芽孢桿菌h47cctccm2013283和市售短小芽孢桿菌、市售蘇云金桿菌分別接種于種子培養(yǎng)基，于30℃，250r/min震蕩培養(yǎng)12h；所述種子培養(yǎng)基成分按g/l計為：蛋白胨10，酵母膏5，nacl10，其余成分為水，121℃高壓滅菌15min，調(diào)整ph至7.0。按1:2:1混合做種子。
2)發(fā)酵液準備：選用質(zhì)量優(yōu)良的蒼耳，用水沖洗，70％—75％酒精浸泡3min，用水洗凈，經(jīng)攪碎機攪碎后待用。
3)發(fā)酵罐空消及空氣管道消毒：按相關(guān)說明書進行發(fā)酵罐空消。
4)發(fā)酵液實消：將步驟2所得蒼耳放入發(fā)酵罐中，補充自來水至終體積為10l，按相關(guān)說明書進行實消滅菌。
5)接種培養(yǎng)：當(dāng)發(fā)酵罐溫度降至37℃時，將步驟1所得種子按體積比1％的接種量，接種至裝有蒼耳的發(fā)酵罐中，27℃條件下培養(yǎng)6天，設(shè)置工藝要求的通氣量并保持罐壓，設(shè)置各其他培養(yǎng)參數(shù)培養(yǎng)。
6)出料：培養(yǎng)完畢，放出發(fā)酵液，過濾，過濾后所得發(fā)酵液即為殺蟲劑成品。
實施例3
1)菌種準備：將解淀粉芽孢桿菌h47cctccm2013283和市售短小芽孢桿菌、市售蘇云金桿菌分別接種于種子培養(yǎng)基，于30℃，250r/min震蕩培養(yǎng)12h；所述種子培養(yǎng)基成分按g/l計為：蛋白胨10，酵母膏5，nacl10，其余成分為水，121℃高壓滅菌15min，調(diào)整ph至7.0。按1:2:2混合做種子。
2)發(fā)酵液準備：選用質(zhì)量優(yōu)良的蒼耳，用水沖洗，70％—75％酒精浸泡3min，用水洗凈，經(jīng)攪碎機攪碎后待用。
3)發(fā)酵罐空消及空氣管道消毒：按相關(guān)說明書進行發(fā)酵罐空消。
4)發(fā)酵液實消：將步驟2所得蒼耳放入發(fā)酵罐中，補充自來水至終體積為10l，按相關(guān)說明書進行實消滅菌。
5)接種培養(yǎng)：當(dāng)發(fā)酵罐溫度降至37℃時，將步驟1所得種子按體積比1％的接種量，接種至裝有蒼耳的發(fā)酵罐中，30℃條件下培養(yǎng)6天，設(shè)置工藝要求的通氣量并保持罐壓，設(shè)置各其他培養(yǎng)參數(shù)培養(yǎng)。
6)出料：培養(yǎng)完畢，放出發(fā)酵液，過濾，過濾后所得發(fā)酵液即為殺蟲劑成品。