本發(fā)明涉及一種蛋白質(zhì)提取方法，具體是一種昆蟲(chóng)蛋白質(zhì)提取方法。

背景技術(shù)：

世界上的昆蟲(chóng)約有100多萬(wàn)種，有3650余種可以食用。據(jù)專(zhuān)家們預(yù)測(cè)，到21世紀(jì)，昆蟲(chóng)將成為僅次于微生物和細(xì)胞生物的第三大類(lèi)蛋白質(zhì)來(lái)源，因?yàn)槔ハx(chóng)種類(lèi)多，數(shù)量大，分布廣，繁殖快，高蛋白質(zhì)、低脂肪、低膽固醇，營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)合理，肉質(zhì)纖維少，又易于吸收，優(yōu)點(diǎn)突出，并優(yōu)于植物蛋白質(zhì)，為世界各國(guó)所關(guān)注。

我國(guó)的食蟲(chóng)習(xí)俗，歷史悠久，在少數(shù)民族地區(qū)更盛行。我國(guó)地大物博，昆蟲(chóng)資源種類(lèi)特別豐富。近幾年，曾有蝗蟲(chóng)、蟬的制品出口創(chuàng)匯。在未來(lái)食品的新資源開(kāi)發(fā)研討會(huì)上，我國(guó)衛(wèi)生部正式將螞蟻列為新資源開(kāi)發(fā)項(xiàng)目。我國(guó)也倡議成立全國(guó)性資源昆蟲(chóng)產(chǎn)業(yè)促進(jìn)委員會(huì)，以促進(jìn)昆蟲(chóng)食品和藥品的開(kāi)發(fā)和利用。1994年，在慶祝中國(guó)昆蟲(chóng)學(xué)會(huì)成立50周年之際，及1996年在全國(guó)資源昆蟲(chóng)產(chǎn)業(yè)化研討會(huì)上，都隆重推出了盛大的昆蟲(chóng)宴，大大擴(kuò)大了昆蟲(chóng)可以食用的影響。由于開(kāi)發(fā)昆蟲(chóng)食品和藥品，可以變害為寶，一舉多得，21世紀(jì)，興起了一股創(chuàng)辦昆蟲(chóng)食品實(shí)業(yè)的熱潮，相應(yīng)的昆蟲(chóng)食品和藥品將會(huì)不斷出現(xiàn)。

21世紀(jì)的主導(dǎo)食品是功能性食品，而昆蟲(chóng)食品正是典型的功能性食品。鑒于昆蟲(chóng)是一大類(lèi)發(fā)展?jié)摿薮蟮纳镔Y源和營(yíng)養(yǎng)寶庫(kù)，能食能藥，可以作為運(yùn)動(dòng)員、老年人、少年兒童的高級(jí)營(yíng)養(yǎng)品和有效藥品。

生物高科技產(chǎn)品——昆蟲(chóng)蛋白·江南大學(xué)食品學(xué)院博士生導(dǎo)師夏文水教授，組織國(guó)家重點(diǎn)學(xué)科江南大學(xué)、格瑞生物研究機(jī)構(gòu)的28位免疫學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、遺傳學(xué)方面科學(xué)家聯(lián)合攻關(guān)，最終成功利用生物酶解專(zhuān)利技術(shù)從昆蟲(chóng)中開(kāi)發(fā)新一代蛋白！現(xiàn)在，國(guó)內(nèi)開(kāi)發(fā)昆蟲(chóng)食品，猶如異軍突起，席卷華夏。經(jīng)過(guò)多年的研究，已大量提煉出昆蟲(chóng)營(yíng)養(yǎng)蛋白、昆蟲(chóng)活性蛋白、昆蟲(chóng)幾丁質(zhì)（即甲殼素），并研究出昆蟲(chóng)抗菌肽、抗癌活性物質(zhì)等。

昆蟲(chóng)的蛋白質(zhì)含量比牛肉、豬肉、雞、魚(yú)都要高。例如，干的黃蜂含蛋白質(zhì)約81%，蜜蜂43%，蟬72%，草蜢70%，蟋蟀65%，稻蝗60．08%，柞蠶蛹52．14%，蠅蛆60．88%，黃粉蟲(chóng)63．19%，鼎實(shí)多刺蟻64．50%，紅胸多刺蟻58．60%等，而且蛋白質(zhì)中富含人體所需要的各種氨基酸，尤其是不能自行合成的賴(lài)氨酸、蘇氨酸、蛋氨酸等。此外，蟲(chóng)體中還含有少量脂肪、糖類(lèi)、多種維生素及礦物質(zhì)等。還可以從昆蟲(chóng)表皮中提取幾丁質(zhì)，從血液中提取抗菌肽等。

現(xiàn)在比較流行的昆蟲(chóng)蛋白提取一般都是堿法和鹽法提取，堿法、鹽法提取都存在著缺點(diǎn)。堿法提取雖然提取率較高，提取簡(jiǎn)單易行，生產(chǎn)成本較低，但在高堿的條件下，蛋白提取液中會(huì)生成賴(lài)一丙氨酸，這種物質(zhì)不但有毒，而且還會(huì)引起營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的損失。同時(shí)，高堿條件下還會(huì)造成蛋白質(zhì)水解，加速美拉德反應(yīng)，產(chǎn)生黑褐色物質(zhì)，從而造成提取液顏色的加深，提取物中非蛋白質(zhì)含量增加，分離效果降低。除此之外，堿法和鹽法提取對(duì)反應(yīng)設(shè)備的要求較高，會(huì)造成嚴(yán)重的環(huán)境污染，增加后處理的生產(chǎn)成本。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種昆蟲(chóng)蛋白質(zhì)提取方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問(wèn)題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

上述的一種昆蟲(chóng)蛋白質(zhì)提取方法，是將昆蟲(chóng)蟲(chóng)體經(jīng)過(guò)預(yù)處理、烘干然后攪碎制成蟲(chóng)漿，脫脂過(guò)濾，在對(duì)蟲(chóng)漿溶液采用酶法提取，純化分離，干燥，制得昆蟲(chóng)蛋白質(zhì)。

一種昆蟲(chóng)蛋白質(zhì)提取方法，具體包括以下步驟：

(1)將昆蟲(chóng)蟲(chóng)體經(jīng)過(guò)除雜、洗凈，滅菌烘干；

(2)將經(jīng)過(guò)步驟(1)的昆蟲(chóng)蟲(chóng)體粉碎過(guò)篩；

(3)使用有機(jī)溶劑對(duì)經(jīng)過(guò)步驟(2)的粉碎物制成蟲(chóng)漿，再進(jìn)行浸泡；

(4)通過(guò)超臨界流體co2萃取法對(duì)步驟（3）的蟲(chóng)漿進(jìn)行萃取脫脂；

(5)將步驟（4）中生成的脫脂物加水勻漿；

(6)將步驟（5）中生成的勻漿過(guò)濾去表皮物質(zhì)，勻漿在100°的條件下，浸提20-30min；

（7）將步驟（6）中的勻漿按體積比1-1.5%加酶水解，料液比為1:10，溫度為50-55°，ph值7.5-8，恒溫3-5小時(shí)；

(8)將經(jīng)過(guò)步驟（7）的漿液使用3%活性炭脫色，吸附溫度為30°，時(shí)間為2小時(shí)；

（9）將經(jīng)過(guò)步驟（8）的產(chǎn)物用電點(diǎn)-鹽析聯(lián)用法進(jìn)行富集沉淀；

(10)將步驟（9）中產(chǎn)生的沉淀物用離心機(jī)脫鹽；

(11)將步驟（10）中生成的脫鹽產(chǎn)物加水勻漿；

（12）將步驟（11）中生成的勻漿液沉淀排水；

(13)將步驟（12）中生成的沉淀物用小分子生物活性肽分離技術(shù)清除難溶蛋白；

(14)將步驟（13）生成的產(chǎn)物利用噴霧干燥法即可制得昆蟲(chóng)蛋白。

所述昆蟲(chóng)蛋白質(zhì)提取方法，其中：所述步驟（7）中的酶為胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的組合。

所述昆蟲(chóng)蛋白質(zhì)提取方法，其中，所述步驟（4）中的超臨界流體co2萃取法的工藝條件為：萃取壓力30mpa，co2流量20l/h,溫度35°，時(shí)間2.5h。

所述昆蟲(chóng)蛋白質(zhì)提取方法，其中：所述步驟（7）中的溫度為55°。

所述昆蟲(chóng)蛋白質(zhì)提取方法，其中：所述步驟(7)中的ph值為8。

所述昆蟲(chóng)蛋白質(zhì)提取方法，其中：所述ph值7.5-8的恒溫時(shí)間為5h。

有益效果：

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提取條件比較溫和，提取時(shí)間較短，能更多地保留蛋白質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，同時(shí)在低水解度的條件下，對(duì)黃粉蟲(chóng)蛋白的功能性質(zhì)也有一定的改進(jìn)，對(duì)環(huán)境污染較小。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明提取流程圖；

圖2為超臨界流體co2萃取法各條件正交實(shí)驗(yàn)表格；

圖3為圖2工藝條件因素水平表；

圖4為酶法提取雙酶組合試驗(yàn)列表的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖5為雙酶組合試驗(yàn)柱狀圖；

圖6不同方法的蛋白質(zhì)析出試驗(yàn)柱狀圖；

圖7為各種干燥方法對(duì)比列表。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

請(qǐng)參閱圖1～4，本發(fā)明實(shí)施例中，一種昆蟲(chóng)蛋白質(zhì)提取方法，是將昆蟲(chóng)蟲(chóng)體經(jīng)過(guò)預(yù)處理、烘干然后攪碎制成蟲(chóng)漿，脫脂過(guò)濾，在對(duì)蟲(chóng)漿溶液采用酶法提取，純化分離，干燥，制得昆蟲(chóng)蛋白質(zhì)。

本發(fā)明昆蟲(chóng)蛋白質(zhì)提取方法，具體步驟如下：

(1)將昆蟲(chóng)蟲(chóng)體經(jīng)過(guò)除雜、洗凈，滅菌烘干；

(2)將經(jīng)過(guò)步驟（1）的昆蟲(chóng)蟲(chóng)體粉碎過(guò)篩；

(3)使用有機(jī)溶劑對(duì)經(jīng)過(guò)步驟（2）的粉碎物制成蟲(chóng)漿，再進(jìn)行浸泡；

(4)通過(guò)超臨界流體co2萃取法對(duì)步驟（3）的蟲(chóng)漿進(jìn)行萃取脫脂；

(5)將步驟（4）中生成的脫脂物加水勻漿；

(6)將步驟（5）中生成的勻漿過(guò)濾去表皮物質(zhì)，勻漿在100°的條件下，浸提20-30min；

(7)將步驟（6）中的勻漿按體積比1-1.5%加酶水解，料液比為1:10，溫度為50-55°，ph值7.5-8，恒溫3-5小時(shí)；

(8)將經(jīng)過(guò)步驟（7）的漿液使用3%活性炭脫色，吸附溫度為30°，時(shí)間為2小時(shí)；

(9)將經(jīng)過(guò)步驟（8）的產(chǎn)物用電點(diǎn)-鹽析聯(lián)用法進(jìn)行富集沉淀；

(10)將步驟（9）中產(chǎn)生的沉淀物用離心機(jī)脫鹽；

(11)將步驟（10）中生成的脫鹽產(chǎn)物加水勻漿；

(12)將步驟（11）中生成的勻漿液沉淀排水；

(13)將步驟（12）中生成的沉淀物用小分子生物活性肽分離技術(shù)清除難溶蛋白；

(14)將步驟（13）生成的產(chǎn)物利用噴霧干燥法即可制得昆蟲(chóng)蛋白。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：上述步驟（7）中的酶為胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的組合。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：上述步驟（4）中的超臨界流體co2萃取法的工藝條件為：萃取壓力30mpa，co2流量20l/h,溫度35°，時(shí)間2.5h。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：上述步驟（7）中的溫度為55°。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：上述步驟（7）中的ph值為8。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：上述步驟（7）中ph值7.5-8的恒溫時(shí)間為5h。

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述：

實(shí)施例1（提取黃粉蟲(chóng)蛋白）

具體步驟如下：

(1)將黃粉蟲(chóng)蟲(chóng)體經(jīng)過(guò)除雜、洗凈，滅菌烘干；

（2）將經(jīng)過(guò)步驟（1）的黃粉蟲(chóng)蟲(chóng)體粉碎過(guò)篩；

(3)使用有機(jī)溶劑對(duì)經(jīng)過(guò)步驟（2）的粉碎物制成蟲(chóng)漿，再進(jìn)行浸泡；

(4)通過(guò)如圖2所示的表格最佳工藝條件為：萃取壓力30mpa,co2流量20l/h,溫度35°、時(shí)間2.5h進(jìn)行超臨界流體co2萃取法對(duì)步驟（3）的蟲(chóng)漿進(jìn)行萃取脫脂；

下表為傳統(tǒng)的有機(jī)溶劑萃取法和本發(fā)明采用的超臨界流體co2萃取法的對(duì)比：

(5)將步驟（4）中生成的脫脂物加水勻漿；

(6)將步驟（5）中生成的勻漿過(guò)濾去表皮物質(zhì)，勻漿在100°的條件下，浸提30min；

(7)通過(guò)圖4和圖5實(shí)驗(yàn)表圖可知，將步驟（6）中的勻漿通過(guò)按體積比1.5%加雙酶組合酶（0.5%胰蛋白酶和0.5%胰凝乳蛋白酶的組合）水解，料液比為1:10，溫度為55°，ph值8，恒溫3-5小時(shí)；

(8)將經(jīng)過(guò)步驟（7）的漿液使用3%活性炭脫色，吸附溫度為30°，時(shí)間為2小時(shí)；

(9)通過(guò)蛋白質(zhì)析出試驗(yàn)以及圖6可知將經(jīng)過(guò)步驟（8）的產(chǎn)物用電點(diǎn)-鹽析聯(lián)用法進(jìn)行富集沉淀，蛋白質(zhì)析出率最高；

(10)將步驟（9）中產(chǎn)生的沉淀物用離心機(jī)脫鹽；

(11)將步驟(10)中生成的脫鹽產(chǎn)物加水勻漿；

(12)將步驟(11)中生成的勻漿液沉淀排水；

(13)將步驟(12)中生成的沉淀物用小分子生物活性肽分離技術(shù)清除難溶蛋白；

(14)通過(guò)試驗(yàn)以及試驗(yàn)結(jié)構(gòu)表格圖7可知，通過(guò)噴霧干燥法干燥效果最佳，所以將步驟(13)生成的產(chǎn)物利用噴霧干燥法即可制得昆蟲(chóng)蛋白。

本發(fā)明提取條件比較溫和，提取時(shí)間較短，能更多地保留蛋白質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，同時(shí)在低水解度的條件下，對(duì)黃粉蟲(chóng)蛋白的功能性質(zhì)也有一定的改進(jìn)，對(duì)環(huán)境污染較小。

對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實(shí)施例的細(xì)節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。因此，無(wú)論從哪一點(diǎn)來(lái)看，均應(yīng)將實(shí)施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求而不是上述說(shuō)明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。不應(yīng)將權(quán)利要求中的任何附圖標(biāo)記視為限制所涉及的權(quán)利要求。

此外，應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說(shuō)明書(shū)按照實(shí)施方式加以描述，但并非每個(gè)實(shí)施方式僅包含一個(gè)獨(dú)立的技術(shù)方案，說(shuō)明書(shū)的這種敘述方式僅僅是為清楚起見(jiàn)，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)將說(shuō)明書(shū)作為一個(gè)整體，各實(shí)施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實(shí)施方式。