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一種檢測家蠶二分濃核病毒的LAMP引物及其試劑盒的制作方法

文檔序號:12698119閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一組檢測BmBDV病毒的LAMP的引物,所述引物包括3對引物,

引物BmBDV-F3:TCTGACGTTGGTGGAAGT,

引物BmBDV-B3:AACTTGCTTTCCACTCGA;

引物BmBDV-FIP:TGAGGCGTCCATAGGACCTTTTTTGGAAGTGGAAAACGCAGT,

引物BmBDV-BIP:GAGGATCTGGAGGTGGTGGTTTTTTTGGCTTGTAAATAGGTTGG;

引物BmBDV-LF:ACCGCCCCCAGACACATT,

引物BmBDV-LB:GGAGGTGCTTCAGCAGAGG。

2.一種家蠶BmBDV病毒LAMP檢測試劑盒,其特征在于,所述試劑盒包含家蠶BmBDV

病毒 LAMP預(yù)反應(yīng)液,所述預(yù)反應(yīng)液包含權(quán)利要求1所述的檢測家蠶BmBDV的LAMP引物。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種家蠶BmBDV病毒LAMP檢測試劑盒,其特征在于,

所述預(yù)反應(yīng)液包括:1.5~2.0mM BmBDV-FIP和BmBDV-BIP,0.2~0.4mM BmBDV-F3和BmBDV-B3,0.2~0.5mM BmBDV-LF和BmBDV-LB,20~40mM Tris-HCl (pH8.0~9.0), 10~15mM 氯化鉀,15~20mM 硫酸銨,8~10mM 硫酸鎂, 0.1~0.2% Triton X-100,1.2~1.4mM dNTP, 6-8U Bst DNA 聚合酶大片段,0.6~0.8M 甜菜堿。

4.權(quán)利要求1所述引物用于非診斷目的的家蠶二分濃核病毒BmBDV信息的獲取。

5.權(quán)利要求2所述試劑盒用于非診斷目的的家蠶二分濃核病毒BmBDV信息的獲取。

6.一種家蠶二分濃核病毒BmBDV的信息獲取的方法,其特征在于,所述方法用于非診斷目的,所述方法采用權(quán)利要求2所述的試劑盒進(jìn)行,按照如下步驟進(jìn)行:

S1. 家蠶樣品中BmBDV基因的提取:

S2. 家蠶BmBDV病毒LAMP擴(kuò)增:

(1)根據(jù)待檢樣品數(shù),配制所需的預(yù)反應(yīng)液(含陽性對照、陰性對照),在預(yù)反應(yīng)液中加入2~5μL DNA模板,再加入適量的去離子水,使反應(yīng)體系總體積為25μL;

(2)標(biāo)記清楚后,將檢測反應(yīng)管置于61~65℃溫度下,反應(yīng)45-60min,85℃滅活并溶解低熔點(diǎn)固體石蠟使得染料溶于反應(yīng)液;

(3) 肉眼觀察反應(yīng)體系的顏色變化,同時產(chǎn)物用瓊脂糖凝膠電泳分析。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法,其特征在于,步驟(2)中所述反應(yīng)溫度為62℃,反應(yīng)時間為30min。

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