1.一種TaqMan-MGB探針法檢測人類ALDH2基因多態(tài)性的試劑盒,其特征在于,它包括如下核酸序列:
(1)擴(kuò)增ALDH2基因rs671多態(tài)性位點的引物對,其核苷酸序列SEQ ID NO.:1和SEQ ID NO.:2所示;
(2)用于檢測ALDH2基因rs671多態(tài)性位點的TaqMan-MGB探針,其核苷酸序列如SEQ ID NO.:3和SEQ ID NO.:4所示,其中,SEQ ID NO.:3的5’端標(biāo)記FAM信號,SEQ ID NO.:4的5’端標(biāo)記VIC信號;
上述引物對和熒光探針對在一次檢測中共同使用。
2.一種TaqMan-MGB探針法檢測人類ALDH2基因多態(tài)性的試劑盒,其特征在于,該試劑盒包括:權(quán)利要求1所述的引物和探針。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的TaqMan-MGB探針法檢測人類ALDH2基因多態(tài)性的試劑盒,其特征在于,該試劑盒包括:2×PCR反應(yīng)混合液、陽性標(biāo)準(zhǔn)品。
4.根據(jù)權(quán)利要求3述的TaqMan-MGB探針法檢測人類ALDH2基因多態(tài)性的試劑盒,其特征在于,所述的2×PCR反應(yīng)混合液包括:Tris-HCL 10mM,引物SEQ ID NO:1~2 10μM,探針SEQ ID NO.:3和SEQ ID NO.:4 10μM,MgCl2 2mM,KCL 50mM,dNTPs 0.2mM,Taq DNA聚合酶2U/μL。
5.TaqMan-MGB探針法檢測人類ALDH2基因多態(tài)性的方法,其特征在于,包括如下步驟:
(1)提取人外周血基因組DNA;
(2)分別以提取的人外周血基因組DNA和權(quán)利要求2中的陽性標(biāo)準(zhǔn)品為模板,利用SEQ ID NO.:1~6所示的引物和探針,進(jìn)行實時熒光定量PCR反應(yīng);
(3)根據(jù)檢測到的熒光信號值對rs671位點進(jìn)行基因型判定。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的TaqMan-MGB探針法檢測人類ALDH2基因多態(tài)性的方法,其特征在于,步驟(2)中,實時熒光定量PCR反應(yīng)的擴(kuò)增體系如下:總體積20μL,2×PCR反應(yīng)混合液10μL,SEQ ID NO.:1 0.2μM,SEQ ID NO.:2 0.2μM,SEQ ID NO.:3 0.2μM,SEQ ID NO.:4 0.2μM,模板DNA 50ng。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的TaqMan-MGB探針法檢測人類ALDH2基因多態(tài)性的方法,其特征在于,步驟(2)中,實時熒光定量PCR反應(yīng)的擴(kuò)增程序為:95℃,2min;95℃,10s,60℃,45s,收集熒光,40個循環(huán)。