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用于檢測FOXL2基因編碼區(qū)的PCR引物及反應(yīng)體系的制作方法

文檔序號:12545136閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.用于檢測FOXL2基因編碼區(qū)的PCR引物,其特征在于,所述引物包括用于檢測數(shù)目可變串聯(lián)重復(fù)序列的VNTR引物,用于檢測FOXL2基因編碼區(qū)全長的擴(kuò)增引物,用于檢測FOXL2基因編碼區(qū)分段長度的擴(kuò)增引物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的PCR引物,其特征在于,所述用于檢測數(shù)目可變串聯(lián)重復(fù)序列的VNTR引物包括:

FOXL2-F4:5'-TGCTTCATCAAGGTGCCG-3'(SEQ ID NO 1);

FOXL2-R4:5'-GCACAAGCGAACTGCAGG-3'(SEQ ID NO 2)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的PCR引物,其特征在于,所述用于檢測FOXL2基因編碼區(qū)全長的擴(kuò)增引物包括:

FOXL2-F3:5'-CGCAGTCTCCAGAAGTTTGA-3'(SEQ ID NO 3);

FOXL2-R3:5'-GAGGGTGTGAGGTCAGGCT-3'(SEQ ID NO 4);

所述用于檢測FOXL2基因編碼區(qū)分段長度的擴(kuò)增引物包括:

FOXL2-1F 5'-CGCAGTCTCCAGAAGTTTGA-3'(SEQ ID NO 5);

FOXL2-1R 5'-GCAGGAGGCATAGGGCAT-3'(SEQ ID NO 6);

FOXL2-2F 5'-CATGAAGAGGCCCTTCCG-3'(SEQ ID NO 7);

FOXL2-2R 5'-GCCCAGAGGGTGTGAGGT-3'(SEQ ID NO 8)。

4.檢測FOXL2基因編碼區(qū)的PCR體系,其特征在于,所述體系包括用于檢測數(shù)目可變串聯(lián)重復(fù)序列的PCR體系,用于檢測FOXL2基因編碼區(qū)全長的PCR體系,用于檢測FOXL2基因編碼區(qū)分段長度的PCR體系。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的PCR體系,其特征在于,所述用于檢測數(shù)目可變串聯(lián)重復(fù)序列的PCR體系以15μL計為:

10×Buffer I,1.5μL;2.5mM dNTP,1.2μL;5μM熒光引物,0.8μL;TAKARA HS Taq酶,0.1μL;DNA,1.2μL;ddH2O,9.2μL,總反應(yīng)體系為15μL。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的PCR體系,其特征在于,用于檢測FOXL2基因編碼區(qū)全長的PCR體系以20μL計為:

10×Buffer I,2μL;2.5mM dNTP,1.6μL;5μM引物FOXL2-F3,0.6μL;5μM引物FOXL2-R3,0.6μL;Taq Hot Start酶(5U/μL),0.2μL;DNA,2.0μL;ddH2O,補(bǔ)齊至20μL;總反應(yīng)體系為20μL。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的PCR體系,其特征在于,用于檢測FOXL2基因編碼區(qū)分段長度的PCR體系以50μL計為:

DNA模板,1μL;引物FOXL2-1F,1μL;引物FOXL2-1R,1μL;10mM dNTP,1μL;Taq Buffer,5μL;25mM MgCl2,5μL;Taq酶(5U/μL),0.5μL;水,35.5μL;

DNA模板,1μL;引物FOXL2-2F,1μL;引物FOXL2-2R,1μL;10mM dNTP,1μL;Taq Buffer,5μL;25mM MgCl2,5μL;Taq酶(5U/μL),0.5μL;水,35.5μL。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測數(shù)目可變串聯(lián)重復(fù)序列的PCR體系,其特征在于,PCR反應(yīng)條件為:

95℃,5min,1個循環(huán);95℃,30s,60℃,30s,72℃,30s,40個循環(huán);最后72℃延伸12min,1個循環(huán),16℃保存。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測FOXL2基因編碼區(qū)全長的PCR體系,其特征在于,PCR反應(yīng)條件為:

95℃,5min,1個循環(huán);95℃,30s,60℃,30s,72℃,30s,40個循環(huán);最后72℃延伸12min,1個循環(huán),16℃保存。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測FOXL2基因編碼區(qū)分段長度的PCR體系,其特征在于,PCR反應(yīng)條件為:

95℃預(yù)變性5min;94℃變性30s;55-60℃退火35s;72℃延伸40-50s;72℃修復(fù)延伸5-8min;35個循環(huán)。

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