本發(fā)明涉及生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種用于檢測(cè)FOXL2基因編碼區(qū)的PCR引物及反應(yīng)體系。

背景技術(shù)：

Sanger法測(cè)序-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，是利用一種DNA聚合酶來(lái)延伸結(jié)合在待定序列模板上的引物。直到摻入一種鏈終止核苷酸為止。每一次序列測(cè)定由一套四個(gè)單獨(dú)的反應(yīng)構(gòu)成，每個(gè)反應(yīng)含有所有四種脫氧核苷酸三磷酸(dNTP)，并混入限量的一種不同的雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基團(tuán)，使延長(zhǎng)的寡聚核苷酸選擇性地在G、A、T或C處終止。終止點(diǎn)由反應(yīng)中相應(yīng)的雙脫氧而定。每一種dNTPs和ddNTPs的相對(duì)濃度可以調(diào)整，使反應(yīng)得到一組長(zhǎng)幾百至幾千堿基的鏈終止產(chǎn)物。它們具有共同的起始點(diǎn)，但終止在不同的的核苷酸上，可通過(guò)高分辨率變性凝膠電泳分離大小不同的片段，凝膠處理后可用X-光膠片放射自顯影或非同位素標(biāo)記進(jìn)行檢測(cè)。DNA的復(fù)制需要：DNA聚合酶，單鏈DNA模板，帶有3'-OH末端的單鏈寡核苷酸引物，4種dNTP(dATP、dGTP、dTTP和dCTP)。聚合酶用模板作指導(dǎo)，不斷地將dNTP加到引物的3'-OH末端，使引物延伸，合成出新的互補(bǔ)DNA鏈。如果加入一種特殊核苷酸，雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)，因它在脫氧核糖的3’位置缺少一個(gè)羥基，故不能同后續(xù)的dNTP形成磷酸二酯鍵。如，存在ddCTP、dCTP和三種其他的dNTP(其中一種為α-32P標(biāo)記)的情況下，將引物、模板和DNA聚合酶一起保溫，即可形成一種全部具有相同的5'-引物端和以ddC殘基為3’端結(jié)尾的一系列長(zhǎng)短不一片段的混合物。經(jīng)變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離制得的放射性自顯影區(qū)帶圖譜將為新合成的不同長(zhǎng)度的DNA鏈中C的分布提供準(zhǔn)確信息，從而將全部C的位置確定下來(lái)。類似的方法，在ddATP、ddGTP和ddTTP存在的條件下，可同時(shí)制得分別以ddA、ddG和ddT殘基為3‘端結(jié)尾的三組長(zhǎng)短不一的片段。將制得的四組混合物平行地點(diǎn)加在變性聚丙烯酰胺凝膠電泳板上進(jìn)行電泳，每組制品中的各個(gè)組分將按其鏈長(zhǎng)的不同得到分離，制得相應(yīng)的放射性自顯影圖譜。從所得圖譜即可直接讀得DNA的堿基序列。

毛細(xì)管電泳技術(shù)-VNTR產(chǎn)物，毛細(xì)管電泳是一類以毛細(xì)管為分離通道,以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力的新型液相分離技術(shù)?；緳C(jī)構(gòu)包括進(jìn)樣系統(tǒng)、毛細(xì)管、檢測(cè)系統(tǒng)、高壓電源、清洗系統(tǒng)、溫控系統(tǒng)等。它是以高壓電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力,以毛細(xì)管為分離通道,依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離的一類液相分離技術(shù)。在高電壓作用下,帶電粒子在毛細(xì)管內(nèi)電解質(zhì)溶液中遷移,遷移速度等于電泳和電滲流(EOF)的矢量和。中性粒子的電泳速度為零,其遷移速度相當(dāng)于EOF的速度。各種粒子因遷移速度的不同而實(shí)現(xiàn)分離。

數(shù)目可變串聯(lián)重復(fù)序列(VariableNumberofTandemRepeats，VNTR)又稱小衛(wèi)星DNA(MinisatelliteDNA)，是一種重復(fù)DNA小序列，為10到幾百核苷酸，拷貝數(shù)10一1000不等。VNTR基本原理與RFLP大致相同，只是對(duì)限制性內(nèi)切酶和DNA探針有特殊要求：(1)限制性內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)必須不在重復(fù)序列中，以保證小衛(wèi)星或微衛(wèi)星序列的完整性。(2)內(nèi)切酶在基因組的其他部位有較多酶切位點(diǎn)，則可使衛(wèi)星序列所在片段含有較少無(wú)關(guān)序列，通過(guò)電泳可充分顯示不同長(zhǎng)度重復(fù)序列片段的多態(tài)性。(3)分子雜交所用DNA探針核苷酸序列必須是小衛(wèi)星序列或微衛(wèi)星序列，通過(guò)分子雜交和放射自顯影后，就可一次性檢測(cè)到眾多小衛(wèi)星或微衛(wèi)星位點(diǎn)，得到個(gè)體特異性的DNA指紋圖譜。

FOXL2基因編碼區(qū)全長(zhǎng)共1131bp，屬于高GC含量序列，在PCR過(guò)程中有一定難度，同時(shí)PCR過(guò)程中的單鏈易形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)。由于FOXL2基因編碼區(qū)存在基因突變的情況且突變情況復(fù)雜，目前已知的突變位點(diǎn)有200余個(gè)，對(duì)PCR體系及引物都有較高要求。因而需要一套高效準(zhǔn)確的引物和反應(yīng)體系以準(zhǔn)確確定FOXL2基因編碼區(qū)的基因突變位點(diǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供用于FOXL2基因編碼區(qū)進(jìn)行PCR復(fù)制和擴(kuò)增的引物及PCR反應(yīng)體系和程序，以確定FOXL2基因編碼區(qū)的基因突變位點(diǎn)。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的檢測(cè)策略如圖1所示,檢測(cè)策略概括如下：采集血液樣本并提取基因組DNA，對(duì)樣本進(jìn)行FOXL2基因編碼區(qū)VNTR檢測(cè)①，檢測(cè)到VNTR突變的樣本可確認(rèn)樣本存在FOXL2編碼區(qū)c.672_701dup30突變，對(duì)未檢測(cè)到VNTR突變的樣本進(jìn)入步驟②，也就是對(duì)樣本進(jìn)行FOXL2編碼區(qū)全長(zhǎng)的檢測(cè)，存在FOXL2編碼區(qū)大段缺失的樣本使用DNAStar軟件分析，對(duì)于無(wú)FOXL2編碼區(qū)大段缺失的樣本進(jìn)入步驟③，也就是對(duì)樣本進(jìn)行FOXL2基因編碼區(qū)分段檢測(cè)，未發(fā)現(xiàn)點(diǎn)突變的樣本在FOXL2編碼區(qū)無(wú)突變，發(fā)現(xiàn)FOXL2編碼區(qū)點(diǎn)突變使用DNAStar軟件分析。

用于檢測(cè)FOXL2基因編碼區(qū)的PCR引物，所述引物包括用于檢測(cè)數(shù)目可變串聯(lián)重復(fù)序列的VNTR引物，用于檢測(cè)FOXL2基因編碼區(qū)全長(zhǎng)的擴(kuò)增引物，用于檢測(cè)FOXL2基因編碼區(qū)分段長(zhǎng)度的擴(kuò)增引物。優(yōu)選地，所述用于檢測(cè)數(shù)目可變串聯(lián)重復(fù)序列的VNTR引物包括：

FOXL2-F4:5'-TGCTTCATCAAGGTGCCG-3'(SEQ ID NO 1)；

FOXL2-R4:5'-GCACAAGCGAACTGCAGG-3'(SEQ ID NO 2)。

優(yōu)選地，所述用于檢測(cè)FOXL2基因編碼區(qū)全長(zhǎng)的擴(kuò)增引物包括：

FOXL2-F3:5'-CGCAGTCTCCAGAAGTTTGA-3'(SEQ ID NO 3)；

FOXL2-R3:5'-GAGGGTGTGAGGTCAGGCT-3'(SEQ ID NO 4)；

優(yōu)選地，所述用于檢測(cè)FOXL2基因編碼區(qū)分段長(zhǎng)度的擴(kuò)增引物包括：

FOXL2-1F 5'-CGCAGTCTCCAGAAGTTTGA-3'(SEQ ID NO 5)；

FOXL2-1R 5'-GCAGGAGGCATAGGGCAT-3'(SEQ ID NO 6)；

或

FOXL2-2F 5'-CATGAAGAGGCCCTTCCG-3'(SEQ ID NO 7)；

FOXL2-2R 5'-GCCCAGAGGGTGTGAGGT-3'(SEQ ID NO 8)。

優(yōu)選地，所述體系包括用于檢測(cè)數(shù)目可變串聯(lián)重復(fù)序列的PCR體系，用于檢測(cè)FOXL2基因編碼區(qū)全長(zhǎng)的PCR體系，用于檢測(cè)FOXL2基因編碼區(qū)分段長(zhǎng)度的PCR體系。

優(yōu)選地，所述用于檢測(cè)數(shù)目可變串聯(lián)重復(fù)序列的PCR體系以15μL計(jì)為：

10×Buffer I，1.5μL；2.5mM dNTP，1.2μL；5μM熒光引物，0.8μL；TAKARA HS Taq酶，0.1μL；DNA,1.2μL；ddH₂O，9.2μL，總反應(yīng)體系為15μL。

優(yōu)選地，用于檢測(cè)FOXL2基因編碼區(qū)全長(zhǎng)的PCR體系以20μL計(jì)為：

10×Buffer I，2μL；2.5mM dNTP，1.6μL；5μM引物FOXL2-F3，0.6μL；5μM引物FOXL2-R3，0.6μL；Taq Hot Start酶(5U/μL)，0.2μL；DNA,2.0μL；ddH₂O，補(bǔ)齊至20μL；總反應(yīng)體系為20μL。

優(yōu)選地，用于檢測(cè)FOXL2基因編碼區(qū)分段長(zhǎng)度的PCR體系以50μL計(jì)為：

DNA模板，1μL；引物FOXL2-1F，1μL；引物FOXL2-1R，1μL；10mM dNTP，1μL；Taq Buffer，5μL；25mM MgCl₂，5μL；Taq酶(5U/μL)，0.5μL；水，35.5μL；

或

DNA模板，1μL；引物FOXL2-2F，1μL；引物FOXL2-2R，1μL；10mM dNTP，1μL；Taq Buffer，5μL；25mM MgCl₂，5μL；Taq酶(5U/μL)，0.5μL；水，35.5μL。

優(yōu)選地，檢測(cè)數(shù)目可變串聯(lián)重復(fù)序列的PCR體系的PCR反應(yīng)條件為：

95℃，5min，1個(gè)循環(huán)；95℃，30s，60℃，30s，72℃，30s，40個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸12min，1個(gè)循環(huán),16℃保存。

優(yōu)選地，檢測(cè)FOXL2基因編碼區(qū)全長(zhǎng)的PCR體系的PCR反應(yīng)條件為：

95℃，5min，1個(gè)循環(huán)；95℃，30s，60℃，30s，72℃，30s，40個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸12min，1個(gè)循環(huán),16℃保存。

優(yōu)選地，檢測(cè)FOXL2基因編碼區(qū)分段長(zhǎng)度的PCR體系的PCR反應(yīng)條件為：

95℃預(yù)變性5min；94℃變性30s；55-60℃退火35s；72℃延伸40-50s；72℃修復(fù)延伸5-8min；35個(gè)循環(huán)。

本發(fā)明的有益效果如下：

通過(guò)建立FOXL2基因編碼區(qū)檢測(cè)的檢測(cè)策略及檢測(cè)體系，可以快速檢測(cè)到FOXL2基因編碼區(qū)的重復(fù)序列，同時(shí)避免被測(cè)DNA在檢測(cè)中形成二級(jí)結(jié)構(gòu)影響測(cè)序的準(zhǔn)確性。本發(fā)明的檢測(cè)策略不僅節(jié)約檢測(cè)成本，同時(shí)提高了檢測(cè)準(zhǔn)確性，縮短檢測(cè)時(shí)間。通過(guò)反復(fù)實(shí)踐，摸索到FOXL2基因編碼區(qū)的檢測(cè)反應(yīng)條件，在科研或臨床應(yīng)用中，能得到相近的檢測(cè)成功率及準(zhǔn)確率，節(jié)約了寶貴的科研經(jīng)費(fèi)。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明方法檢測(cè)策略流程示意圖；

圖2為實(shí)施例1中S1樣本VNTR檢測(cè)結(jié)果圖；

圖3為用GeneMapper V3.5軟件觀看到的實(shí)施例1中S1樣本VNTR檢測(cè)結(jié)果；

圖4為實(shí)施例1中S2樣本檢測(cè)到FOXL2編碼區(qū)大片段缺失的結(jié)果圖；

圖5a為實(shí)施例1中S3樣本檢測(cè)到FOXL2編碼區(qū)點(diǎn)突變的結(jié)果圖；

圖5b為實(shí)施例1中S4樣本檢測(cè)到FOXL2編碼區(qū)點(diǎn)突變的結(jié)果圖。

具體實(shí)施方式

為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明，下面結(jié)合優(yōu)選實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說(shuō)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，下面所具體描述的內(nèi)容是說(shuō)明性的而非限制性的，不應(yīng)以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。

FOXL2基因編碼區(qū)全長(zhǎng)共1131bp，屬于高GC含量序列，在PCR過(guò)程中有一定難度，同時(shí)PCR過(guò)程中的單鏈易形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，運(yùn)用有效的PCR檢測(cè)策略及檢測(cè)體系和合適的引物，可以高效的確定FOXL2基因編碼區(qū)的基因突變位點(diǎn)。

檢測(cè)策略為先用VNTR引物進(jìn)行數(shù)目可變串聯(lián)重復(fù)序列的檢測(cè)①，如果沒(méi)有發(fā)現(xiàn)有重復(fù)序列，則進(jìn)行FOXL2基因編碼區(qū)全長(zhǎng)的檢測(cè)②，如果FOXL2編碼區(qū)無(wú)大片段缺失，則進(jìn)行FOXL2基因編碼區(qū)分段長(zhǎng)度的檢測(cè)③。

①對(duì)FOXL2基因編碼區(qū)進(jìn)行VNTR檢測(cè)：

用于VNTR檢測(cè)的引物序列如下：

FOXL2-F4:5'-TGCTTCATCAAGGTGCCG-3'(SEQ ID NO 1)；

FOXL2-R4:5'-GCACAAGCGAACTGCAGG-3'(SEQ ID NO 2)。

通常情況下，PCR擴(kuò)增后的產(chǎn)物長(zhǎng)度為713bp。

進(jìn)行VNTR檢測(cè)的體系如表1所示，反應(yīng)程序如表2所示。

PCR體系(15μL體系)：

表1

PCR反應(yīng)程序

表2

②當(dāng)FOXL2基因編碼區(qū)進(jìn)行VNTR檢測(cè)后，沒(méi)有檢測(cè)出重復(fù)序列，則對(duì)FOXL2基因編碼區(qū)的全長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)；

用于檢測(cè)FOXL2基因編碼區(qū)全長(zhǎng)的擴(kuò)增引物序列如下：

FOXL2-F3:5'-CGCAGTCTCCAGAAGTTTGA-3'(SEQ ID NO 3)；

FOXL2-R3:5'-GAGGGTGTGAGGTCAGGCT-3'(SEQ ID NO 4)；

通常情況下，PCR擴(kuò)增后的長(zhǎng)度為1355bp。

對(duì)FOXL2基因編碼區(qū)全長(zhǎng)進(jìn)行PCR擴(kuò)增的體系情況如表3所示，PCR反應(yīng)程序如表4所示。

PCR體系(20μL體系)：

表3

PCR反應(yīng)程序：

表4

③當(dāng)FOXL2基因編碼區(qū)未發(fā)現(xiàn)VNTR及大片段缺失后，則對(duì)FOXL2基因編碼區(qū)進(jìn)行分段長(zhǎng)度檢測(cè)；

用于檢測(cè)FOXL2基因編碼區(qū)分段長(zhǎng)度的擴(kuò)增引物包括：

FOXL2-1F 5'-CGCAGTCTCCAGAAGTTTGA-3'(SEQ ID NO 5)；

FOXL2-1R 5'-GCAGGAGGCATAGGGCAT-3'(SEQ ID NO 6)；

通常情況下，PCR擴(kuò)增后的產(chǎn)物長(zhǎng)度為773bp；

或

FOXL2-2F 5'-CATGAAGAGGCCCTTCCG-3'(SEQ ID NO 7)；

FOXL2-2R 5'-GCCCAGAGGGTGTGAGGT-3'(SEQ ID NO 8)。

通常情況下，PCR擴(kuò)增后的產(chǎn)物長(zhǎng)度為798bp。

對(duì)FOXL2基因編碼區(qū)分段長(zhǎng)度進(jìn)行PCR擴(kuò)增的體系情況如表5所示，PCR反應(yīng)程序如表6所示。

PCR體系(50μL體系)：

表5

PCR反應(yīng)程序：

表6

實(shí)施例1

現(xiàn)選取4例在FOXL2編碼區(qū)存在基因突變的例子(S1、S2、S3、S4)，具體闡述檢測(cè)過(guò)程如下：

將S1、S2、S3、S4樣本進(jìn)行①數(shù)目可變串聯(lián)重復(fù)序列檢測(cè)：

用于VNTR檢測(cè)的引物序列如下：

FOXL2-F4:5'-TGCTTCATCAAGGTGCCG-3'(SEQ ID NO 1)；

FOXL2-R4:5'-GCACAAGCGAACTGCAGG-3'(SEQ ID NO 2)。

PCR擴(kuò)增后的產(chǎn)物長(zhǎng)度為713bp。

PCR體系以15μL計(jì)為：

10×Buffer I，1.5μL；2.5mM dNTP，1.2μL；5μM熒光引物，0.8μL；TAKARA HS Taq酶，0.1μL；DNA,1.2μL；ddH₂O，9.2μL，總反應(yīng)體系為15μL。

PCR反應(yīng)程序：

95℃，5min，1個(gè)循環(huán)；95℃，30s，60℃，30s，72℃，30s，40個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸12min，1個(gè)循環(huán),16℃保存。

由步驟①所得結(jié)果發(fā)現(xiàn)S1存在VNTR(即存在FOXL2編碼區(qū)c.672_701dup30突變)，S2、S3、S4樣本未發(fā)現(xiàn)此突變，此三個(gè)樣本進(jìn)入②對(duì)FOXL2基因編碼區(qū)的全長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)。

②檢測(cè)FOXL2基因編碼區(qū)全長(zhǎng)：

擴(kuò)增引物序列如下：

FOXL2-F3:5'-CGCAGTCTCCAGAAGTTTGA-3'(SEQ ID NO 3)；

FOXL2-R3:5'-GAGGGTGTGAGGTCAGGCT-3'(SEQ ID NO 4)；

PCR擴(kuò)增后的長(zhǎng)度為1355bp。

PCR體系以20μL計(jì)為：

10×Buffer I，2μL；2.5mM dNTP，1.6μL；5μM引物FOXL2-F3，0.6μL；5μM引物FOXL2-R3，0.6μL；Taq Hot Start酶(5U/μL)，0.2μL；DNA,2.0μL；ddH₂O，補(bǔ)齊至20μL；總反應(yīng)體系為20μL。

PCR反應(yīng)程序：

95℃，5min，1個(gè)循環(huán)；95℃，30s，60℃，30s，72℃，30s，40個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸12min，1個(gè)循環(huán),16℃保存。

由步驟②檢測(cè)發(fā)現(xiàn)S2樣本存在FOXL2編碼區(qū)大片段缺失(即c.17_93del),S3、S4樣本未發(fā)現(xiàn)編碼區(qū)大片段缺失，此兩樣本進(jìn)入③FOXL2基因編碼區(qū)進(jìn)行分段長(zhǎng)度檢測(cè)。

③檢測(cè)FOXL2基因編碼區(qū)分段長(zhǎng)度：

擴(kuò)增引物序列如下：

FOXL2-1F 5'-CGCAGTCTCCAGAAGTTTGA-3'(SEQ ID NO 5)；

FOXL2-1R 5'-GCAGGAGGCATAGGGCAT-3'(SEQ ID NO 6)；

PCR擴(kuò)增后的產(chǎn)物長(zhǎng)度為773bp；

PCR體系以50μL計(jì)為：

DNA模板，1μL；引物FOXL2-1F，1μL；引物FOXL2-1R，1μL；10mM dNTP，1μL；Taq Buffer，5μL；25mM MgCl₂，5μL；Taq酶(5U/μL)，0.5μL；水，35.5μL；

PCR反應(yīng)程序：

95℃預(yù)變性5min；94℃變性30s；55-60℃退火35s；72℃延伸40-50s；72℃修復(fù)延伸5-8min；35個(gè)循環(huán)。

和

擴(kuò)增引物序列如下：

FOXL2-2F 5'-CATGAAGAGGCCCTTCCG-3'(SEQ ID NO 7)；

FOXL2-2R 5'-GCCCAGAGGGTGTGAGGT-3'(SEQ ID NO 8)；

PCR擴(kuò)增后的產(chǎn)物長(zhǎng)度為798bp；

PCR體系以50μL計(jì)為：

DNA模板，1μL；引物FOXL2-2F，1μL；引物FOXL2-2R，1μL；10mM dNTP，1μL；Taq Buffer，5μL；25mM MgCl₂，5μL；Taq酶(5U/μL)，0.5μL；水，35.5μL。

PCR反應(yīng)程序：

95℃預(yù)變性5min；94℃變性30s；55-60℃退火35s；72℃延伸40-50s；72℃修復(fù)延伸5-8min；35個(gè)循環(huán)。

由步驟③發(fā)現(xiàn)S3、S4樣存在FOXL2編碼區(qū)點(diǎn)突變(即c.907C>T及c.931C>T)，檢測(cè)流程結(jié)束。由于測(cè)序所得序列篇幅較長(zhǎng)無(wú)法完全呈現(xiàn)于此，我們現(xiàn)展示S1、S2、S3、S4樣本檢測(cè)的突變位點(diǎn)的信息，結(jié)果如下：

S1樣本VNTR檢測(cè)結(jié)果：

由Chromas軟件可見(jiàn)檢測(cè)到的VNTR結(jié)果如圖2所示：

如圖3所示，由GeneMapper V3.5軟件可直觀看到箭頭所示的VNTR結(jié)果。

S2樣本檢測(cè)到FOXL2編碼區(qū)大片段缺失(即c.17_93del)結(jié)果如圖4所示；圖中采用Chromas軟件顯示結(jié)果，箭頭所示上半部分為S2樣本缺失的檢測(cè)結(jié)果，下圖為FOXL2編碼區(qū)不存在突變的相同位置的檢測(cè)結(jié)果。

S3、S4樣本檢測(cè)到FOXL2編碼區(qū)點(diǎn)突變(即c.907C>T及c.931C>T)，的結(jié)果如圖5a和5b所示，圖5a為S3檢測(cè)結(jié)果，圖5b為S4檢測(cè)結(jié)果；圖5a和圖5b中，圖中上部分箭頭所示為樣本突變點(diǎn)，下部分箭頭所示為該位點(diǎn)不存在突變的該位點(diǎn)信息。

最后應(yīng)說(shuō)明的是：以上各實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對(duì)其限制；盡管參照前述各實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解：其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分或者全部技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明各實(shí)施例技術(shù)方案的范圍。

<110> 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院整形外科醫(yī)院

<120> 用于檢測(cè)FOXL2基因編碼區(qū)的PCR引物及反應(yīng)體系

<160> 8

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

tgcttcatca aggtgccg 18

<210> 2

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

gcacaagcga actgcagg 18

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

cgcagtctcc agaagtttga 20

<210> 4

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

gagggtgtga ggtcaggct 19

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

cgcagtctcc agaagtttga 20

<210> 6

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

gcaggaggca tagggcat 18

<210> 7

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 7

catgaagagg cccttccg 18

<210> 8

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

gcccagaggg tgtgaggt 18