本發(fā)明涉及一種基于ACACB基因鑒定奶牛產(chǎn)奶性狀的方法及其應(yīng)用，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
乙酰輔酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase，ACC)是催化脂肪酸合成代謝第一步反應(yīng)的限速酶，在ATP供能、Mg2+存在下，以HCO3-為羧基供體，將乙酰輔酶A羧化生成丙二酰單酰輔酶A，屬于生物素依賴性酶。ACC廣泛存在于多種生物中，在人類(lèi)和其它哺乳動(dòng)物中該酶屬于組織特異性酶，存在兩種變構(gòu)體ACC1(或稱(chēng)ACCα，265kDa)和ACC2(或稱(chēng)ACCβ，275-280kDa)，分別由ACACA和ACACB基因編碼。在人類(lèi)上，ACACA基因位于染色體17q12上，ACACB基因位于染色體12q23上，二者具有高度的相似性，總的氨基酸序列相似性達(dá)76％，主要區(qū)別在于ACACB比ACACA在第一個(gè)功能區(qū)的N端多出約140個(gè)氨基酸，這些氨基酸序列有助于ACC2結(jié)合并固定在線粒體外膜上(Abu-Elheiga et al.,2000)。
ACC是一個(gè)多亞基酶，其功能區(qū)可分為催化功能區(qū)和非催化功能區(qū)。催化功能區(qū)占據(jù)不到ACC分子的一半，包括生物素羧化酶(Biotin carboxylase，BC)、生物素羧基載體蛋白(Biotin carboxyl carrier protein，BCCP)和羧基轉(zhuǎn)移酶(Carboxyl transferase，CT)3個(gè)部分，其中CT又由α-CT和β-CT兩種亞基組成。非催化功能區(qū)可細(xì)分為5個(gè)部分：1)N末端。這部分在ACC1和ACC2分別有75和139-218個(gè)殘基，是ACC1和ACC2差異最大的一部分。氨基末端包括了ACC1的磷酸化位點(diǎn)和ACC2潛在的磷酸化位點(diǎn)。2)被AMP-激活蛋白激酶(AMPK)磷酸化作用的調(diào)控位點(diǎn)。3)BC和BCCP區(qū)之間的大約110個(gè)氨基酸的保守性較高的區(qū)域。4)BCCP和CT區(qū)之間的大約800個(gè)氨基酸的高度保守區(qū)域。5)C末端。在ACC1和ACC2中該末端的殘基和長(zhǎng)度高度保守(韓春春等，2006)。
目前已有研究證實(shí)，ACC2定位于線粒體膜上，其主要功能是調(diào)節(jié)脂肪酸的氧化。研究發(fā)現(xiàn)，ACC2催化反應(yīng)生成的丙二酸單酰輔酶A是脂肪酸β氧化反應(yīng)關(guān)鍵酶——肉毒堿脂酰輔酶A轉(zhuǎn)移酶I(CPT-I)的重要抑制劑(McGarry et al.,1977；Munday,2002)，ACC2通過(guò)抑制CRT-I的活性，進(jìn)而抑制脂肪酸β氧化反應(yīng)的進(jìn)行；而當(dāng)機(jī)體處于能量消耗狀態(tài)時(shí)，AMPK活性上升并與ACC2作用使其磷酸化，進(jìn)而解除ACC2對(duì)脂肪酸β氧化反應(yīng)的抑制(Chen et al.,2003)。ACC2在哺乳動(dòng)物體內(nèi)主要在骨骼肌、心肌和腎臟等組織中表達(dá)。其中，在骨骼肌和心肌中脂肪酸的β氧化是主要的能量來(lái)源(Abu-Elheiga et al.,2000；Tong,2005)，而在腎臟中，ACC2則與糖尿病腎病中的脂毒性密切相關(guān)(Murea et al.,2010)。Abu-Elheiga等(2003)發(fā)現(xiàn)，缺失ACACB基因的小鼠體內(nèi)脂肪氧化加速而嚴(yán)重減少，進(jìn)而導(dǎo)致體重急劇下降，表明可有效地抵制食物誘導(dǎo)性肥胖；同時(shí)，這些小鼠也能抵制由高糖食物引起的糖尿病。因此，ACACB可作為治療肥胖癥和糖尿病的參考靶點(diǎn)。
牛的ACACB基因位于第17號(hào)染色體上，全長(zhǎng)116.36kb，包含58個(gè)外顯子和57個(gè)內(nèi)含子。其mRNA全長(zhǎng)7007bp(另有剪接變構(gòu)體6種，長(zhǎng)度8384-10027bp不等)，共編碼2331個(gè)氨基酸，mRNA序列與人的同源性為86％，氨基酸序列與人的同源性為88％。
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)是一種特異性DNA體外擴(kuò)增技術(shù)。以少量的DNA為模板，經(jīng)過(guò)變性-退火-延伸的多次循環(huán)，以接近指數(shù)擴(kuò)增的形式產(chǎn)生大量的目標(biāo)DNA分子，目前，該技術(shù)已經(jīng)成為最常用、也最重要的分子生物學(xué)技術(shù)之一。PCR產(chǎn)物經(jīng)過(guò)瓊脂糖凝膠電泳后測(cè)序即可進(jìn)行基因多態(tài)的鑒定工作，檢測(cè)方法簡(jiǎn)單易行。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供檢測(cè)?；蚪M17號(hào)染色體上第66218726位脫氧核糖核苷酸和/或第66218117位脫氧核糖核苷酸和/或第66199005位脫氧核糖核苷酸和/或第66167817位脫氧核糖核苷酸和/或第66102564位脫氧核糖核苷酸的基因型的物質(zhì)的新用途。
本發(fā)明提供了檢測(cè)?；蚪M17號(hào)染色體上第66218726位脫氧核糖核苷酸和/或第66218117位脫氧核糖核苷酸和/或第66199005位脫氧核糖核苷酸和/或第66167817位脫氧核糖核苷酸和/或第66102564位脫氧核糖核苷酸的基因型的物質(zhì)在鑒定或輔助鑒定牛個(gè)體產(chǎn)奶性狀中的應(yīng)用。
本發(fā)明還提供了檢測(cè)?；蚪M17號(hào)染色體上第66218726位脫氧核糖核苷酸和/或第66218117位脫氧核糖核苷酸和/或第66199005位脫氧核糖核苷酸和/或第66167817位脫氧核糖核苷酸和/或第66102564位脫氧核糖核苷酸的基因型的物質(zhì)在制備鑒定或輔助鑒定牛個(gè)體產(chǎn)奶性狀的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
上述應(yīng)用中，所述產(chǎn)奶性狀為305天產(chǎn)奶量和/或乳脂量和/或乳脂率和/或乳蛋白量和/或乳蛋白率。
本發(fā)明還提供了檢測(cè)?；蚪M17號(hào)染色體上第66218726位脫氧核糖核苷酸和/或第66218117位脫氧核糖核苷酸和/或第66199005位脫氧核糖核苷酸和/或第66167817位脫氧核糖核苷酸和/或第66102564位脫氧核糖核苷酸的基因型的物質(zhì)在牛育種中的應(yīng)用。
本發(fā)明還提供了檢測(cè)?；蚪M17號(hào)染色體上第66218726位脫氧核糖核苷酸和/或第66218117位脫氧核糖核苷酸和/或第66199005位脫氧核糖核苷酸和/或第66167817位脫氧核糖核苷酸和/或第66102564位脫氧核糖核苷酸的基因型的物質(zhì)在制備牛育種的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
本發(fā)明還提供了檢測(cè)?；蚪M17號(hào)染色體上第66218726位脫氧核糖核苷酸和/或第66218117位脫氧核糖核苷酸和/或第66199005位脫氧核糖核苷酸和/或第66167817位脫氧核糖核苷酸和/或第66102564位脫氧核糖核苷酸的基因型的物質(zhì)在選育305天產(chǎn)奶量高和/或乳脂量高和/或乳脂率高和/或乳蛋白量高和/或乳蛋白率高的牛中的應(yīng)用。
本發(fā)明還提供了檢測(cè)?；蚪M17號(hào)染色體上第66218726位脫氧核糖核苷酸和/或第66218117位脫氧核糖核苷酸和/或第66199005位脫氧核糖核苷酸和/或第66167817位脫氧核糖核苷酸和/或第66102564位脫氧核糖核苷酸的基因型的物質(zhì)在制備選育305天產(chǎn)奶量高和/或乳脂量高和/或乳脂率高和/或乳蛋白量高和/或乳蛋白率高的牛的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
上述應(yīng)用中，所述檢測(cè)?；蚪M17號(hào)染色體上第66218726位脫氧核糖核苷酸的基因型的物質(zhì)為如下1)或2)：
1)由序列表中序列1所示的單鏈DNA分子和序列表中序列2所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)A；
2)由序列A所示的單鏈DNA分子和序列B所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)B；
所述序列A為將序列1刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列1具有相同功能的核苷酸；
所述序列B為將序列2刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列2具有相同功能的核苷酸；
或所述檢測(cè)?；蚪M17號(hào)染色體上第66218117位脫氧核糖核苷酸的基因型的物質(zhì)為如下3)或4)：
3)由序列表中序列3所示的單鏈DNA分子和序列表中序列4所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)C；
4)由序列C所示的單鏈DNA分子和序列D所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)D；
所述序列C為將序列3刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列3具有相同功能的核苷酸；
所述序列D為將序列4刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列4具有相同功能的核苷酸；
或所述檢測(cè)?；蚪M17號(hào)染色體上第66199005位脫氧核糖核苷酸的基因型的物質(zhì)為如下5)或6)：
5)由序列表中序列5所示的單鏈DNA分子和序列表中序列6所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)E；
6)由序列E所示的單鏈DNA分子和序列F所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)F；
所述序列E為將序列5刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列5具有相同功能的核苷酸；
所述序列F為將序列6刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列6具有相同功能的核苷酸；
或所述檢測(cè)?；蚪M17號(hào)染色體上第66167817位脫氧核糖核苷酸的基因型的物質(zhì)為如下7)或8)：
7)由序列表中序列7所示的單鏈DNA分子和序列表中序列8所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)G；
8)由序列G所示的單鏈DNA分子和序列H所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)H；
所述序列G為將序列7刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列7具有相同功能的核苷酸；
所述序列H為將序列8刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列8具有相同功能的核苷酸；
或所述檢測(cè)?；蚪M17號(hào)染色體上第66102564位脫氧核糖核苷酸的基因型的物質(zhì)為如下為如下9)或10)：
9)由序列表中序列9所示的單鏈DNA分子和序列表中序列10所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)I；
10)由序列I所示的單鏈DNA分子和序列J所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)J；
所述序列I為將序列9刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列9具有相同功能的核苷酸；
所述序列J為將序列10刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列10具有相同功能的核苷酸。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種鑒定或輔助鑒定牛產(chǎn)奶性狀的方法。
本發(fā)明提供的鑒定或輔助鑒定牛產(chǎn)奶性狀的方法為如下(1)和/或(2)和/或(3)和/或(4)和/或(5)：
(1)是檢測(cè)牛個(gè)體的基因型是TT基因型還是CC基因型還是TC基因型，根據(jù)所述牛個(gè)體的基因型確定所述牛個(gè)體在第一泌乳期和第二泌乳期的305天產(chǎn)奶量和/或乳脂量和/或乳脂率和/或乳蛋白量：
CC基因型的牛個(gè)體在第一泌乳期的305天產(chǎn)奶量和乳蛋白量高于TT基因型的牛個(gè)體，TT基因型的牛個(gè)體在第一泌乳期的305天產(chǎn)奶量和乳蛋白量高于TC基因型的牛個(gè)體；TT基因型的牛個(gè)體在第一泌乳期的乳脂量和乳脂率高于TC基因型的牛個(gè)體，TC基因型的牛個(gè)體在第一泌乳期的乳脂量和乳脂率高于CC基因型的牛個(gè)體；
TT基因型的牛個(gè)體在第二泌乳期的305天產(chǎn)奶量和乳脂量高于CC基因型的牛個(gè)體，CC基因型的牛個(gè)體在第二泌乳期的305天產(chǎn)奶量和乳脂量高于TC基因型的牛個(gè)體；TT基因型的牛個(gè)體在第二泌乳期的乳脂率和乳蛋白量高于TC基因型的牛個(gè)體，TC基因型的牛個(gè)體在第二泌乳期的乳脂率和乳蛋白量高于CC基因型的牛個(gè)體；
所述TT基因型為?；蚪M17號(hào)染色體上第66218726個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基均為T(mén)的純合體；
所述CC基因型為?；蚪M17號(hào)染色體上第66218726個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基均為C的純合體；
所述TC基因型為?；蚪M17號(hào)染色體上第66218726個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基為T(mén)和C的雜合體；
(2)是檢測(cè)牛個(gè)體的基因型是GG基因型還是AA基因型還是GA基因型，根據(jù)所述牛個(gè)體的基因型確定所述牛個(gè)體在第一泌乳期和第二泌乳期的305天產(chǎn)奶量和/或乳脂量和/或乳脂率和/或乳蛋白量：
AA基因型的牛個(gè)體在第一泌乳期的305天產(chǎn)奶量高于GG基因型的牛個(gè)體，GG基因型的牛個(gè)體在第一泌乳期的305天產(chǎn)奶量高于GA基因型的牛個(gè)體；GG基因型的牛個(gè)體在第一泌乳期的乳脂量高于AA基因型的牛個(gè)體，AA基因型的牛個(gè)體在第一泌乳期的乳脂量高于GA基因型的牛個(gè)體；GG基因型的牛個(gè)體在第一泌乳期的乳脂率高于GA基因型的牛個(gè)體，GA基因型的牛個(gè)體在第一泌乳期的乳脂率高于AA基因型的牛個(gè)體；
GG基因型的牛個(gè)體在第二泌乳期的305天產(chǎn)奶量、乳脂量和乳蛋白量高于AA基因型的牛個(gè)體，AA基因型的牛個(gè)體在第二泌乳期的305天產(chǎn)奶量、乳脂量和乳蛋白量高于GA基因型的牛個(gè)體；
所述GG基因型為?；蚪M17號(hào)染色體上第66218117個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基均為T(mén)的純合體；
所述AA基因型為?；蚪M17號(hào)染色體上第66218117個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基均為C的純合體；
所述GA基因型為?；蚪M17號(hào)染色體上第66218117個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基為G和A的雜合體；
(3)是檢測(cè)牛個(gè)體的基因型是GG基因型還是AA基因型還是GA基因型，根據(jù)所述牛個(gè)體的基因型確定所述牛個(gè)體在第一泌乳期和第二泌乳期的305天產(chǎn)奶量和/或乳脂量和/或乳脂率和/或乳蛋白量：
GG基因型的牛個(gè)體在第一泌乳期的乳脂量和乳脂率高于GA基因型的牛個(gè)體，GA基因型的牛個(gè)體在第一泌乳期的乳脂量和乳脂率高于AA基因型的牛個(gè)體；
GA基因型的牛個(gè)體在第二泌乳期的305天產(chǎn)奶量和乳蛋白量高于GG基因型的牛個(gè)體，GG基因型的牛個(gè)體在第二泌乳期的305天產(chǎn)奶量和乳蛋白量高于AA基因型的牛個(gè)體；GG基因型的牛個(gè)體在第二泌乳期的乳脂量高于GA基因型的牛個(gè)體，GA基因型的牛個(gè)體在第二泌乳期的乳脂量高于AA基因型的牛個(gè)體；
所述GG基因型為?；蚪M17號(hào)染色體上第66199005個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基均為T(mén)的純合體；
所述AA基因型為?；蚪M17號(hào)染色體上第66199005個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基均為C的純合體；
所述GA基因型為?；蚪M17號(hào)染色體上第66199005個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基為G和A的雜合體；
(4)是檢測(cè)牛個(gè)體的基因型是AA基因型還是GG基因型還是AG基因型，根據(jù)所述牛個(gè)體的基因型確定所述牛個(gè)體在第一泌乳期和第二泌乳期的305天產(chǎn)奶量和/或乳脂量和/或乳蛋白量和/或乳蛋白率：
AG基因型的牛個(gè)體在第一泌乳期的乳脂量和乳蛋白量高于GG基因型的牛個(gè)體，GG基因型的牛個(gè)體在第一泌乳期的乳脂量和乳蛋白量高于AA基因型的牛個(gè)體；
GG基因型的牛個(gè)體在第二泌乳期的305天產(chǎn)奶量、乳脂量、乳蛋白量和乳蛋白率高于AG基因型的牛個(gè)體，AG基因型的牛個(gè)體在第二泌乳期的305天產(chǎn)奶量、乳脂量、乳蛋白量和乳蛋白率高于AA基因型的牛個(gè)體；
所述GG基因型為牛基因組17號(hào)染色體上第66167817個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基均為T(mén)的純合體；
所述AA基因型為牛基因組17號(hào)染色體上第66167817個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基均為C的純合體；
所述AG基因型為?；蚪M17號(hào)染色體上第66167817個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基為A和G的雜合體；
(5)是檢測(cè)牛個(gè)體的基因型是AA基因型還是GG基因型還是AG基因型，根據(jù)所述牛個(gè)體的基因型確定所述牛個(gè)體在第一泌乳期和第二泌乳期的305天產(chǎn)奶量和/或乳脂量和/或乳脂率和/或乳蛋白量：
AG基因型的牛個(gè)體在第一泌乳期的305天產(chǎn)奶量高于AA基因型的牛個(gè)體，AA基因型的牛個(gè)體在第一泌乳期的305天產(chǎn)奶量高于GG基因型的牛個(gè)體；GG基因型的牛個(gè)體在第一泌乳期的乳脂率高于AG基因型的牛個(gè)體，AG基因型的牛個(gè)體在第一泌乳期的乳脂率高于AA基因型的牛個(gè)體；AG基因型的牛個(gè)體在第一泌乳期的乳蛋白量高于GG基因型的牛個(gè)體，GG基因型的牛個(gè)體在第一泌乳期的乳蛋白量高于AA基因型的牛個(gè)體；
GG基因型的牛個(gè)體在第二泌乳期的305天產(chǎn)奶量和乳蛋白量高于AA基因型的牛個(gè)體，AA基因型的牛個(gè)體在第二泌乳期的305天產(chǎn)奶量和乳蛋白量高于AG基因型的牛個(gè)體；GG基因型的牛個(gè)體在第二泌乳期的乳脂量高于AG基因型的牛個(gè)體，AG基因型的牛個(gè)體在第二泌乳期的乳脂量高于AA基因型的牛個(gè)體；
所述GG基因型為?；蚪M17號(hào)染色體上第66102564個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基均為T(mén)的純合體；
所述AA基因型為?；蚪M17號(hào)染色體上第66102564個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基均為C的純合體；
所述AG基因型為牛基因組17號(hào)染色體上第66102564個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基為A和G的雜合體。
上述方法中，
所述(1)中，所述檢測(cè)牛個(gè)體的基因型是TT基因型還是CC基因型還是TC基因型的方法為如下A)或B)：
A)直接測(cè)序；
B)測(cè)序含有?；蚪M17號(hào)染色體上第66218726個(gè)核苷酸的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；
所述(2)中，所述檢測(cè)牛個(gè)體的基因型是GG基因型還是AA基因型還是GA基因型的方法為如下C)或D)：
C)直接測(cè)序；
D)測(cè)序含有?；蚪M17號(hào)染色體上第66218117個(gè)核苷酸的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；
所述(3)中，所述檢測(cè)牛個(gè)體的基因型是GG基因型還是AA基因型還是GA基因型的方法為如下E)或F)：
E)直接測(cè)序；
F)測(cè)序含有牛基因組17號(hào)染色體上第66199005個(gè)核苷酸的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；
所述(4)中，所述檢測(cè)牛個(gè)體的基因型是AA基因型還是GG基因型還是AG基因型的方法為如下G)或H)：
G)直接測(cè)序；
H)測(cè)序含有牛基因組17號(hào)染色體上第66167817個(gè)核苷酸的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；
所述(5)中，所述檢測(cè)牛個(gè)體的基因型是AA基因型還是GG基因型還是AG基因型的方法為如下I)或J)：
I)直接測(cè)序；
J)測(cè)序含有牛基因組17號(hào)染色體上第66102564個(gè)核苷酸的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。
上述方法中，
所述B)中的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物所用的引物為如下1)或2)：
1)由序列表中序列1所示的單鏈DNA分子和序列表中序列2所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)A；
2)由序列A所示的單鏈DNA分子和序列B所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)B；
所述序列A為將序列1刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列1具有相同功能的核苷酸；
所述序列B為將序列2刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列2具有相同功能的核苷酸；
所述D)中的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物所用的引物為如下3)或4)：
3)由序列表中序列3所示的單鏈DNA分子和序列表中序列4所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)C；
4)由序列C所示的單鏈DNA分子和序列D所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)D；
所述序列C為將序列3刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列3具有相同功能的核苷酸；
所述序列D為將序列4刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列4具有相同功能的核苷酸；
所述F)中的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物所用的引物為如下5)或6)：
5)由序列表中序列5所示的單鏈DNA分子和序列表中序列6所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)E；
6)由序列E所示的單鏈DNA分子和序列F所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)F；
所述序列E為將序列5刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列5具有相同功能的核苷酸；
所述序列F為將序列6刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列6具有相同功能的核苷酸。
所述H)中的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物所用的引物為如下7)或8)：
7)由序列表中序列7所示的單鏈DNA分子和序列表中序列8所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)G；
8)由序列G所示的單鏈DNA分子和序列H所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)H；
所述序列G為將序列7刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列7具有相同功能的核苷酸；
所述序列H為將序列8刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列8具有相同功能的核苷酸；
所述J)中的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物所用的引物為如下9)或10)：
9)由序列表中序列9所示的單鏈DNA分子和序列表中序列10所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)I；
10)由序列I所示的單鏈DNA分子和序列J所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)J；
所述序列I為將序列9刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列9具有相同功能的核苷酸；
所述序列J為將序列10刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列10具有相同功能的核苷酸。
本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種鑒定或輔助鑒定牛產(chǎn)奶性狀的產(chǎn)品。
本發(fā)明提供的鑒定或輔助鑒定牛產(chǎn)奶性狀的產(chǎn)品為檢測(cè)?；蚪M17號(hào)染色體上第66218726位脫氧核糖核苷酸和/或第66218117位脫氧核糖核苷酸和/或第66199005位脫氧核糖核苷酸和/或第66167817位脫氧核糖核苷酸和/或第66102564位脫氧核糖核苷酸的基因型的物質(zhì)。
上述產(chǎn)品中，所述檢測(cè)?；蚪M17號(hào)染色體上第66218726位脫氧核糖核苷酸的基因型的物質(zhì)為如下1)或2)：
1)由序列表中序列1所示的單鏈DNA分子和序列表中序列2所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)A；
2)由序列A所示的單鏈DNA分子和序列B所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)B；
所述序列A為將序列1刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列1具有相同功能的核苷酸；
所述序列B為將序列2刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列2具有相同功能的核苷酸；
或所述檢測(cè)?；蚪M17號(hào)染色體上第66218117位脫氧核糖核苷酸的基因型的物質(zhì)為如下3)或4)：
3)由序列表中序列3所示的單鏈DNA分子和序列表中序列4所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)C；
4)由序列C所示的單鏈DNA分子和序列D所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)D；
所述序列C為將序列3刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列3具有相同功能的核苷酸；
所述序列D為將序列4刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列4具有相同功能的核苷酸；
或所述檢測(cè)?；蚪M17號(hào)染色體上第66199005位脫氧核糖核苷酸的基因型的物質(zhì)為如下5)或6)：
5)由序列表中序列5所示的單鏈DNA分子和序列表中序列6所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)E；
6)由序列E所示的單鏈DNA分子和序列F所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)F；
所述序列E為將序列5刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列5具有相同功能的核苷酸；
所述序列F為將序列6刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列6具有相同功能的核苷酸；
或所述檢測(cè)?；蚪M17號(hào)染色體上第66167817位脫氧核糖核苷酸的基因型的物質(zhì)為如下7)或8)：
7)由序列表中序列7所示的單鏈DNA分子和序列表中序列8所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)G；
8)由序列G所示的單鏈DNA分子和序列H所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)H；
所述序列G為將序列7刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列7具有相同功能的核苷酸；
所述序列H為將序列8刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列8具有相同功能的核苷酸；
或所述檢測(cè)?；蚪M17號(hào)染色體上第66102564位脫氧核糖核苷酸的基因型的物質(zhì)為如下為如下9)或10)：
9)由序列表中序列9所示的單鏈DNA分子和序列表中序列10所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)I；
10)由序列I所示的單鏈DNA分子和序列J所示的單鏈DNA分子組成的引物對(duì)J；
所述序列I為將序列9刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列9具有相同功能的核苷酸；
所述序列J為將序列10刪除或增加或改變一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，且與序列10具有相同功能的核苷酸。
上述應(yīng)用或方法或產(chǎn)品中，
所述牛為奶牛；
所述305天產(chǎn)奶量為從產(chǎn)犢到第305個(gè)泌乳日的總產(chǎn)奶量；
所述乳脂率為乳中所含的脂肪的百分率；
所述乳脂量為乳中所含脂肪的重量，它等于乳脂率與產(chǎn)奶量的乘積；
所述乳蛋白率為乳中所含的蛋白的百分率；
所述乳蛋白量為乳中所含蛋白的重量，它等于乳蛋白率與產(chǎn)奶量的乘積；
所述第一泌乳期為母牛第一次產(chǎn)犢后產(chǎn)奶的時(shí)期，一般泌乳期是305天；
所述第二泌乳期為母牛第二次產(chǎn)犢后產(chǎn)奶的時(shí)期，一般泌乳期是305天。
上述應(yīng)用或方法或產(chǎn)品中，
所述?；蚪M序列為?；蚪MBos_taurus_UMD3.1.1/bosTau8版本參考序列。
通過(guò)試驗(yàn)證明：本發(fā)明的方法簡(jiǎn)便、快速、靈敏，結(jié)果可靠、穩(wěn)定、準(zhǔn)確，并可用于輔助鑒定具有優(yōu)良產(chǎn)奶性狀的牛群體，適合實(shí)驗(yàn)室大群體規(guī)模檢測(cè)的需要。不僅可對(duì)待選牛進(jìn)行早期篩選，而且降低了育種花費(fèi)，能有效提高實(shí)際生產(chǎn)中的牛的產(chǎn)奶量，在牛的育種工作中將發(fā)揮巨大作用。
附圖說(shuō)明
圖1為g.66218726T>C、g.66218117G>A、g.66199005G>A、c.781A>G和g.66102564A>G的突變位置。
具體實(shí)施方式
下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。
下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。
下述實(shí)施例中的定量試驗(yàn)，均設(shè)置三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果取平均值。
下述實(shí)施例中的中國(guó)荷斯坦公牛管制凍精樣品和女兒群體的母牛血樣分別來(lái)源于北京三元綠荷奶牛養(yǎng)殖中心和北京市畜牧獸醫(yī)總站。
下述實(shí)施例中的305天產(chǎn)奶量：從產(chǎn)犢到第305個(gè)泌乳日的總產(chǎn)奶量。
下述實(shí)施例中的乳脂率：乳中所含的脂肪的百分率。
下述實(shí)施例中的乳脂量：乳中所含脂肪的重量，它等于乳脂率與產(chǎn)奶量的乘積。
下述實(shí)施例中的乳蛋白率：乳中所含的蛋白的百分率。
下述實(shí)施例中的乳蛋白量：乳中所含蛋白的重量，它等于乳蛋白率與產(chǎn)奶量的乘積。
下述實(shí)施例中的第一泌乳期：母牛第一次產(chǎn)犢后產(chǎn)奶的時(shí)期，一般泌乳期是305天。
下述實(shí)施例中的第二泌乳期：母牛第二次產(chǎn)犢后產(chǎn)奶的時(shí)期，一般泌乳期是305天。
實(shí)施例1、奶牛產(chǎn)奶性狀相關(guān)的分子標(biāo)記及鑒定奶牛產(chǎn)奶性狀的方法
一、奶牛ACACB基因多態(tài)位點(diǎn)的確定
1、DNA池的制備
選擇北京地區(qū)共40頭中國(guó)荷斯坦公牛作為基因多態(tài)性檢測(cè)的試驗(yàn)群體，將40頭中國(guó)荷斯坦公牛隨機(jī)均分為兩組，利用核酸分析儀準(zhǔn)確測(cè)定其凍精基因組DNA的濃度，并將這些DNA均稀釋成濃度為50ng/μL，等量混合成兩個(gè)DNA池，作為PCR擴(kuò)增的模板。
2、引物的設(shè)計(jì)
根據(jù)牛ACACB基因序列(位于GenBank登錄號(hào)為AC_000174.1的序列中，更新日為2014年12月31日)，設(shè)計(jì)如表1的54對(duì)引物。
表1、ACACB基因PCR擴(kuò)增引物序列信息
3、PCR擴(kuò)增
以步驟1得到的DNA池為模板，分別采用表1中的各組引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。
表1中引物9F和9R采用常規(guī)PCR方法，其余引物采用了降落PCR的方法(touchdown PCR)。降落PCR的原理大致如下：首先在較高的溫度下擴(kuò)增，此時(shí)雖然擴(kuò)增效率低，但非特異擴(kuò)增基本沒(méi)有；隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，退火溫度的逐步降低，非特異擴(kuò)增也會(huì)逐步增多；但由于此時(shí)特異的擴(kuò)增產(chǎn)物已經(jīng)達(dá)到一定的數(shù)量?jī)?yōu)勢(shì)，因此會(huì)對(duì)非特異擴(kuò)增產(chǎn)生強(qiáng)烈的競(jìng)爭(zhēng)抑制，從而大幅提高PCR的特異性和效率。表1中部分引物的退火溫度表示為“a-b touchdown”(a>b)的形式即為降落PCR中所用的退火溫度范圍，表示在反應(yīng)過(guò)程中退火溫度逐步由a℃降落到b℃。
PCR反應(yīng)體系如表2所示(表2中的正向引物F和反向引物R分別表示1F和1R、2F和2R等)。常規(guī)PCR和降落PCR反應(yīng)條件如表3所示。
表2、PCR反應(yīng)體系
表3、PCR反應(yīng)條件
4、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的測(cè)序及序列分析
對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，結(jié)果發(fā)現(xiàn)公牛群體ACACB基因上游2000bp的側(cè)翼序列中存在2個(gè)SNP標(biāo)記、5’UTR區(qū)存在1個(gè)SNP標(biāo)記、第13外顯子中存在1個(gè)SNP標(biāo)記，3’UTR區(qū)存在1個(gè)SNP標(biāo)記，如表4所示，突變位置如圖1所示。
表4、ACACB基因發(fā)現(xiàn)的5個(gè)SNPs
上述發(fā)現(xiàn)的ACACB基因的5個(gè)SNP中，
g.66218726T>C是以牛的基因組DNA為模板，以1F和1R為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到的產(chǎn)物(產(chǎn)物的核苷酸序列如序列11所示)自3’末端起第193位(也即為?；蚪MBos_taurus_UMD3.1.1/bosTau8版本參考序列17號(hào)染色體上第66218726個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基)。將?；蚪M17號(hào)染色體上第66218726個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基均為T(mén)的個(gè)體的基因型命名為純合TT基因型，將?；蚪M17號(hào)染色體上第66218726個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基均為C的個(gè)體的基因型命名為純合CC基因型，將?；蚪M17號(hào)染色體上第66218726個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基為T(mén)和C的個(gè)體的基因型命名為雜合TC基因型。
g.66218117G>A是以牛的基因組DNA為模板，以2F和2R為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到的產(chǎn)物(產(chǎn)物的核苷酸序列如序列12所示)的自5’末端起第501位(也即為?；蚪MBos_taurus_UMD3.1.1/bosTau8版本參考序列17號(hào)染色體上第66218117個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基)。將?；蚪M17號(hào)染色體上第66218117個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基均為G的個(gè)體的基因型命名為純合GG基因型，將?；蚪M17號(hào)染色體上第66218117個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基均為A的個(gè)體的基因型命名為純合AA基因型，將?；蚪M17號(hào)染色體上第66218117個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基為T(mén)和C的個(gè)體的基因型命名為雜合GA基因型。
g.66199005G>A是以牛的基因組DNA為模板，以7F和7R為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到的產(chǎn)物(產(chǎn)物的核苷酸序列如序列13所示)的自5’末端起第387位(也即為?；蚪MBos_taurus_UMD3.1.1/bosTau8版本參考序列17號(hào)染色體上第66199005個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基)。將?；蚪M17號(hào)染色體上第66199005個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基均為G的個(gè)體的基因型命名為純合GG基因型，將?；蚪M17號(hào)染色體上第66199005個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基均為A的個(gè)體的基因型命名為純合AA基因型，將?；蚪M17號(hào)染色體上第66199005個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基為G和A的個(gè)體的基因型命名為雜合GA基因型。
c.781A>G是以牛的基因組DNA為模板，以13F和13R為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到的產(chǎn)物(產(chǎn)物的核苷酸序列如序列14所示)的自5’末端起第186位(也即為牛基因組Bos_taurus_UMD3.1.1/bosTau8版本參考序列17號(hào)染色體上第66167817個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基)。將牛基因組17號(hào)染色體上第66167817個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基均為A的個(gè)體的基因型命名為純合AA基因型，將?；蚪M17號(hào)染色體上第66167817個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基均為G的個(gè)體的基因型命名為純合GG基因型，將?；蚪M17號(hào)染色體上第66167817個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基為A和G的個(gè)體的基因型命名為雜合AG基因型。
g.66102564A>G是以牛的基因組DNA為模板，以50F和50R為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到的產(chǎn)物(產(chǎn)物的核苷酸序列如序列15所示)的自3’末端起第204位(也即為?；蚪MBos_taurus_UMD3.1.1/bosTau8版本參考序列17號(hào)染色體上第66102564個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基)。將?；蚪M17號(hào)染色體上第66102564個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基均為A的個(gè)體的基因型命名為純合AA基因型，將?；蚪M17號(hào)染色體上第66102564個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基均為G的個(gè)體的基因型命名為純合GG基因型，將?；蚪M17號(hào)染色體上第66102564個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基為A和G的個(gè)體的基因型命名為雜合AG基因型。
二、奶牛ACACB基因多態(tài)位點(diǎn)與產(chǎn)奶性狀的相關(guān)性分析
1、基因型檢測(cè)
根據(jù)步驟一中獲得的ACACB基因5個(gè)SNPs情況，分別采用5個(gè)SNPs對(duì)應(yīng)的SNP引物對(duì)40頭荷斯坦公牛家系共1093頭女兒群體進(jìn)行群體基因型分型。具體步驟如下：提取女兒群體的母牛血樣(為非抗凝血)的基因組DNA，基因組樣品交由博淼生物科技(北京)有限公司使用“用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜法”，即MALDI-TOF-MS檢測(cè)技術(shù)對(duì)步驟一獲得的5個(gè)SNPs位點(diǎn)的基因型進(jìn)行檢測(cè)?；蛐蜋z測(cè)結(jié)果如表5所示。
2、產(chǎn)奶性狀檢測(cè)
分別檢測(cè)上述1093頭試驗(yàn)?zāi)概５?05天產(chǎn)奶量、乳脂量、乳脂率、乳蛋白量和乳蛋白率5個(gè)產(chǎn)奶性狀。每個(gè)個(gè)體的測(cè)定日的記錄依次包括牛只個(gè)體號(hào)、父號(hào)、母號(hào)、外祖父號(hào)、出生日期、泌乳期、產(chǎn)犢日期、測(cè)定日期、測(cè)定日產(chǎn)奶量、測(cè)定日乳脂率、測(cè)定日乳蛋白率、測(cè)定日體細(xì)胞數(shù)、估計(jì)的305天產(chǎn)奶量、估計(jì)的305天乳脂量和305天乳蛋白量15項(xiàng)信息。
3、單個(gè)SNP位點(diǎn)與性狀的關(guān)聯(lián)分析模型
采用SAS 9.13軟件中的MIXED過(guò)程對(duì)奶牛305天產(chǎn)奶量、乳脂量、乳脂率、乳蛋白量和乳蛋白率5個(gè)產(chǎn)奶性狀和基因型進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。關(guān)聯(lián)分析采用動(dòng)物模型，具體模型如下：Y＝μ+hys+b×M+G+a+e。其中，Y：產(chǎn)奶性狀(個(gè)體305天產(chǎn)奶量、乳脂量、乳脂率、乳蛋白量或乳蛋白率)觀察值，μ：總體均值，hys：場(chǎng)年季效應(yīng)，b：協(xié)變量M的回歸系數(shù)，M：產(chǎn)犢月齡效應(yīng)，G：基因型效應(yīng)，a：個(gè)體隨機(jī)加性遺傳效應(yīng)，e：隨機(jī)殘差效應(yīng)。關(guān)聯(lián)分析方法參見(jiàn)文獻(xiàn)“東天，基于GWAS后分析策略研究EEF1D基因與奶牛產(chǎn)奶性狀遺傳效應(yīng)[D].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)，2013.”。
5個(gè)產(chǎn)奶性狀和基因型關(guān)聯(lián)分析結(jié)果如表5所示。從表5中可以看出：
在第一泌乳期時(shí)，
g.66218726T>C與305天產(chǎn)奶量、乳脂量、乳脂率和乳蛋白量達(dá)到顯著或極顯著關(guān)聯(lián)水平(P＝0.0367-P＝0.0029)，優(yōu)勢(shì)等位基因?yàn)門(mén)。CC基因型的牛個(gè)體的305天產(chǎn)奶量和乳蛋白量高于TT基因型的牛個(gè)體，TT基因型的牛個(gè)體的305天產(chǎn)奶量和乳蛋白量高于TC基因型的牛個(gè)體。TT基因型的牛個(gè)體的乳脂量和乳脂率高于TC基因型的牛個(gè)體，TC基因型的牛個(gè)體的乳脂量和乳脂率高于CC基因型的牛個(gè)體。
g.66218117G>A與305天產(chǎn)奶量、乳脂量和乳脂率達(dá)到顯著或極顯著關(guān)聯(lián)水平(P＝0.0386-P＝0.0071)，優(yōu)勢(shì)等位基因?yàn)镚。AA基因型的牛個(gè)體的305天產(chǎn)奶量高于GG基因型的牛個(gè)體，GG基因型的牛個(gè)體的305天產(chǎn)奶量高于GA基因型的牛個(gè)體。GG基因型的牛個(gè)體的乳脂量高于AA基因型的牛個(gè)體，AA基因型的牛個(gè)體的乳脂量高于GA基因型的牛個(gè)體。GG基因型的牛個(gè)體的乳脂率高于GA基因型的牛個(gè)體，GA基因型的牛個(gè)體的乳脂率高于AA基因型的牛個(gè)體。
g.66199005G>A與乳脂量和乳脂率分別達(dá)到極顯著關(guān)聯(lián)水平(P＝0.0047)和顯著關(guān)聯(lián)水平(P＝0.0412)，優(yōu)勢(shì)等位基因?yàn)镚。GG基因型的牛個(gè)體的乳脂量和乳脂率高于GA基因型的牛個(gè)體，GA基因型的牛個(gè)體的乳脂量和乳脂率高于AA基因型的牛個(gè)體。
c.781A>G與乳脂量(P＝0.0483)和乳蛋白量(P＝0.0289)達(dá)到顯著關(guān)聯(lián)水平。AG基因型的牛個(gè)體的乳脂量和乳蛋白量高于GG基因型的牛個(gè)體，GG基因型的牛個(gè)體的乳脂量和乳蛋白量高于AA基因型的牛個(gè)體。
g.66102564A>G與305天產(chǎn)奶量、乳脂率和乳蛋白量達(dá)到顯著或極顯著關(guān)聯(lián)水平(P＝0.0448-P＝0.0012)，優(yōu)勢(shì)等位基因?yàn)镚。AG基因型的牛個(gè)體的305天產(chǎn)奶量高于AA基因型的牛個(gè)體，AA基因型的牛個(gè)體的305天產(chǎn)奶量高于GG基因型的牛個(gè)體。GG基因型的牛個(gè)體的乳脂率高于AG基因型的牛個(gè)體，AG基因型的牛個(gè)體的乳脂率高于AA基因型的牛個(gè)體。AG基因型的牛個(gè)體的乳蛋白量高于GG基因型的牛個(gè)體，GG基因型的牛個(gè)體的乳蛋白量高于AA基因型的牛個(gè)體。
在第二泌乳期時(shí)，
g.66218726T>C與305天產(chǎn)奶量、乳脂量、乳脂率和乳蛋白量達(dá)到顯著或極顯著關(guān)聯(lián)水平(P＝0.0249-P＜0.0001)，優(yōu)勢(shì)等位基因?yàn)門(mén)。TT基因型的牛個(gè)體的305天產(chǎn)奶量、乳脂量、乳脂率和乳蛋白量高于TC基因型的牛個(gè)體，TC基因型的牛個(gè)體的305天產(chǎn)奶量、乳脂量、乳脂率和乳蛋白量高于CC基因型的牛個(gè)體。
g.66218117G>A與305天產(chǎn)奶量、乳脂量和乳蛋白量達(dá)到極顯著關(guān)聯(lián)水平(P＜0.0001)，優(yōu)勢(shì)等位基因?yàn)镚。GG基因型的牛個(gè)體的305天產(chǎn)奶量、乳脂量和乳蛋白量高于AA基因型的牛個(gè)體，AA基因型的牛個(gè)體的305天產(chǎn)奶量、乳脂量和乳蛋白量高于GA基因型的牛個(gè)體。
g.66199005G>A與305天產(chǎn)奶量、乳脂量和乳蛋白量達(dá)到顯著或極顯著關(guān)聯(lián)水平(P＝0.0235-P＝0.0003)優(yōu)勢(shì)等位基因?yàn)镚。GA基因型的牛個(gè)體的305天產(chǎn)奶量和乳蛋白量高于GG基因型的牛個(gè)體，GG基因型的牛個(gè)體的305天產(chǎn)奶量和乳蛋白量高于AA基因型的牛個(gè)體。GG基因型的牛個(gè)體的乳脂量高于GA基因型的牛個(gè)體，GA基因型的牛個(gè)體的乳脂量高于AA基因型的牛個(gè)體。
c.781A>G與305天產(chǎn)奶量、乳脂量、乳蛋白量和乳蛋白率達(dá)到顯著或極顯著關(guān)聯(lián)水平(P＝0.0163-P＜0.0001)，優(yōu)勢(shì)等位基因?yàn)镚。GG基因型的牛個(gè)體的305天產(chǎn)奶量、乳脂量、乳蛋白量和乳蛋白率高于AG基因型的牛個(gè)體，AG基因型的牛個(gè)體的305天產(chǎn)奶量、乳脂量、乳蛋白量和乳蛋白率高于AA基因型的牛個(gè)體。
g.66102564A>G與305天產(chǎn)奶量、乳脂量、乳脂率和乳蛋白量達(dá)到顯著或極顯著關(guān)聯(lián)水平(P＝0.015-P＜0.0001)，優(yōu)勢(shì)等位基因?yàn)镚。GG基因型的牛個(gè)體的305天產(chǎn)奶量和乳蛋白量高于AA基因型的牛個(gè)體，AA基因型的牛個(gè)體的305天產(chǎn)奶量和乳蛋白量高于AG基因型的牛個(gè)體。GG基因型的牛個(gè)體的乳脂量高于AG基因型的牛個(gè)體，AG基因型的牛個(gè)體的乳脂量高于AA基因型的牛個(gè)體。
表5、ACACB基因與產(chǎn)奶性狀關(guān)聯(lián)分析(最小二乘均值±標(biāo)準(zhǔn)誤)
注：SNP1代表g.66218726T>C，SNP2代表g.66218117G>A，SNP3代表g.66199005G>A，SNP4代表c.781A>G，SNP5代表g.66102564A>G；*P<0.05，表示差異顯著；**P<0.01，表示差異極顯著。a,b同一列數(shù)據(jù)有不同上標(biāo)表示差異顯著；A,B同一列數(shù)據(jù)有不同上標(biāo)表示差異極顯著。
序列表
<110>中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
<120>一種基于ACACB基因鑒定奶牛產(chǎn)奶性狀的方法及其應(yīng)用
<160>15
<210>1
<211>18bp
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>1
tttctcacct gccctgta 18
<210>2
<211>20bp
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>2
tgaagactct ggctcctcta 20
<210>3
<211>17bp
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>3
acgccaggaa ggcagtg 17
<210>4
<211>18bp
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>4
gatttcagcg gtgggtat 18
<210>5
<211>19bp
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>5
agccaggtaa gatgattgc 19
<210>6
<211>17bp
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>6
aggagggaag gaaggtg 17
<210>7
<211>17bp
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>7
gggaaactga aggactg 17
<210>8
<211>16bp
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>8
gaccgaagaa gcacaa 16
<210>9
<211>19bp
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>9
aggagggtcc actgttgtt 19
<210>10
<211>18bp
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>10
ggaagctgga gtgtttgg 18
<210>11
<211>904bp
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>11
tttctcacct gccctgtagc tatcagtgga ggagaataga cccttcccag gctggcactg 60
atgacaaaaa gctacaactc cctgctgacc catgggccaa acagggaaac tcggaatcaa 120
tcctatgtaa cgatcagatc agatcagatc agatcaatcg ctcagttgtg tctgactctt 180
tgcgacccca tgaatcgcag cacaccagac ctccctgtcc atcaccaact cccggagttc 240
actgggacgt ccatcgagtc agtgatgcca tccagccatc tcatcctctg tcatcccctt 300
ctcctcttgc ccccaatccc tcccagcatg agtgttttcc aatgagtcaa ctcttcgcat 360
gaggtggcca aagtactgga gtttcagttt tagtatcatt ccttccaagg aaatcccagg 420
gctgatctcc ttcaggatgg actggttgga tctccttgca gtccaaggga ctctcaagag 480
ttttctccaa caccacagtt caaaagcatc aattctttgg cgctcagcct tcttcacagt 540
ccaactctca catccataca tgaacaatca gatactctgt gccatagggg gattttggta 600
aatggaactc ttagaactgg ggcaccctgg ggacaaagct ggtatgggcc tcagtgggtg 660
gaatcatctg ctccccggga gaagggtttg ggctgcagca tccagggtgg gaccctgctc 720
tggaattcag ttgggcaaaa agccacatgt gagctgggct tggcgatggg ccgactctgc 780
agcttgggcc ttgggtggcc accagggggc gctgaggcca cgccaggaag gcagtgacgt 840
cccgaggggt gtcagggtgg ctgggaggta ggaagaattc agggtagagg agccagagtc 900
ttca 904
<210>12
<211>1187bp
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>12
cgccaggaag gcagtgacgt cccgaggggt gtcagggtgg ctgggaggta ggaagaattc 60
agggtagagg agccagagtc ttcaaggttg agcagggcaa atgcccttgc gaggcgactc 120
gctgtacctg caggaactct ctgtgctttg gctccatctc ctcccccttg ggcagctgga 180
gttcagagct gcgtcggtat cacctgggac ccccggagtc gggggttaca ccatgcaggg 240
tgggggtgct ggaggtggca ggtcttggcc acttgaggat ttctgttact cctcctctgc 300
ttacagatca tgtgacccac caaccccagt tcaagccacg gtttccccat ctgtacgata 360
agagggtagg ctggaggatc cttcaggtct tcgttgcacc acacgggatc tccgttgcat 420
cgtgaggaat cttgctttgc agcacatgga attctctagt tgtgtccctt gggctccaga 480
atgcgagggc tcagttgccc cgcggcatgt gggattcggt tccctgacca gggatcgcac 540
cctctttccc tgcgttgcaa ggtggactca caagcattgg actactaagg aagtttgtag 600
tgtttcattt attcttctca accatgcggt gaagtcttta gatgaaaaaa caggcttggc 660
cgtttgccca aagccacagg tgacagagca aggattcaga gtcagatcaa tctgatttca 720
aagcccagta gtcctgccac tattgaccct ctgcccagat cataattttt tggagtcatt 780
agggagagat tttcaatgga gtgttaaaaa aatttccctg agttacgaat ggctccccct 840
ggagacatcg gaggacacgt ctgcgtttag agagatggct cttccacagg cttgtgtgag 900
ctcttctgga gtgaagtagg ctgggcaaac aacctaagcc ccaccattga ctgagtcctt 960
gacctgcatt tttttcattc cccaactcca ggctcccgct gatgatatcc aggcttcagg 1020
agaacccggg cagcaggcaa gaaatacgct tcctctttgt aagtccactg gagaaaatcc 1080
catgagattc actatttgct aactcttcct tcttgaaaaa cgtgcccaga aatgaagtcg 1140
ctctggcagg gtgaagctgt acctggcata cccaccgctg aaatcat 1187
<210>13
<211>872bp
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>13
gccaggtaac atgattgcat agatcctaaa atggctctct tgttctcctt acagattttc 60
tgaatgatcc tgcttctttt tctatcttgt ctgattttct cctgcctgac cttttcccaa 120
ttaaaaagct gagggaaaat gtcagactcc aagcaagtca ccaagagtaa acggaaagtg 180
agcttcaccc cgagtcagga gccgattcca gcctcagagg gatcccagga gccaccgcag 240
gaagactgca acagcagccc tctgccaaag acccctagcc aggctgagct ggcctcccac 300
aaaggacccc aagacacctg ccagcagagg ccctcccaat cacctctgcc acagaatccc 360
caaggaaacc ccctctcgtc tgatgacgcc tccccagcac gccaagccaa cgggtcagag 420
actgaaggcc cggagatccc aaataccaat gacctgtccg cgccagccag gccccagggc 480
cagcgagcca gaaccctctc cagagaagac aggaagcagg cacacatcaa gagacagctg 540
atgaccaact tcatcctggg ctcttttgat gacaactcct ccgatgaaga tgctggtgct 600
gccctgttcc gacagtcttc ccggaagggc agccgggcca gcctggggac cctgtccctg 660
gagactgctc atgccgcagg cgagactgag acctgtgccc ccgttataag gtaactcaga 720
ctttgtcccc gtaaccagga ggtgcagcgt tgcggtgggg tctacaccct tccctgtgca 780
gccaagcaac cggctatgcc agtgctttga aggtggctat gtggcaagca ggagacatga 840
ggctcccccc ccccaccttc cttccctcct ct 872
<210>14
<211>538bp
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>14
ggaaactgaa ggactgtgtc tgaattctgt tggcccagag gccaggtcta gagccgctgt 60
gctgggaaga ggcactgtat ttccgtgtcg tgtccaggct gttttgggga ggattctgtt 120
tcctctgtga ccctgcaggt ctgacggtgg agtgggcgga acacagtcta caggaggggc 180
aaaggatcag catcccagag tccgtctaca acaatggttg cgtgaaagat gtagatgaag 240
gcttggaggt aaatacagat ccttggaggg gtgtgggggg gccaggagcc agaaccttct 300
cataagcctg gtagcagcag aaactgtcta aacctctaaa gaagtctgtt tgtccattgc 360
cctcaggcag cagaaaaaat tggttttccc ttgatgatca aagcttctga aggcggtgga 420
gggaaaggaa tccggaaggc ggagactgct gaggacttcc ccatcctgtt cagacaagtg 480
agctcctcgc gccgcatgtt tttccccgtg tctttgggaa ttgtgcttct tcggtcgg 538
<210>15
<211>637bp
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>15
ggagggtcca ctgttgttcc ttgagattgt gctgtggccc ttcctgcccc acaggaccat 60
tacccccact gtgactgcga caggaagagg gttgggcgct ccgggtggct ggttgcccac 120
ccaggagtgg gacaggccct ggggctctgg ggctacaggg gggcgggggc ccactgaact 180
cagcgggaga aatgacctcg ccctcctccc ccgactcctg cagcctggtt caagaaaacc 240
ccgagctggc catggactca ctggtgtacg tcagccagca catcagcccg gccgagcggg 300
cccaggtcat tcacctcctg tccaccacgg acggcccggc ctctacctga cccccggtcc 360
tcctggtcgt tcgcaggacc tcgggcaaga gaaaccacac cgatccactg actgcaggcc 420
cttgccagaa ccgtgggggt ttgcttttta aaactcctgg gcgttgccgc aaggctgctg 480
acccccagct cactcctgtt taataaaagg ctcgggagcg cccccttcca agcagaaacc 540
gcccccttct ccgttgctgg gaagtctggt ttttagctct ttaagacact ttgctccatc 600
gttgaatcga attgaaccca aacactccag cttccat 637