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一種帶有熒光標記的豬繁殖與呼吸綜合征病毒及其構建方法和應用與流程

文檔序號:12644833閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種帶有熒光標記的豬繁殖與呼吸綜合征病毒的構建方法,其特征在于,其包括:

將含有熒光標記基因的熒光標記表達盒連接至感染性克隆質粒上的連接位點;

將所述感染性克隆質粒轉染宿主細胞,經(jīng)培養(yǎng)后得到帶有熒光標記的豬繁殖與呼吸綜合征病毒;

其中,所述感染性克隆質粒含有用于表達所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒的結構蛋白的表達序列,所述表達序列包括N蛋白基因序列和連接至所述N蛋白基因序列下游的3’端非編碼序列,所述連接位點位于所述N蛋白基因序列的下游和所述3’端非編碼序列的上游之間。

2.根據(jù)權利要求1所述的帶有熒光標記的豬繁殖與呼吸綜合征病毒的構建方法,其特征在于,所述熒光標記表達盒還含有調控所述熒光標記基因表達的調控序列,所述調控序列選自SEQ ID NO.1-6中的任意一種。

3.根據(jù)權利要求2所述的帶有熒光標記的豬繁殖與呼吸綜合征病毒的構建方法,其特征在于,所述調控序列的3’端與所述熒光標記基因的5’端之間插入有Kozark序列,所述Kozark序列的堿基序列如SEQ ID NO.7所示。

4.根據(jù)權利要求1所述的帶有熒光標記的豬繁殖與呼吸綜合征病毒的構建方法,其特征在于,所述熒光標記基因為綠色熒光蛋白基因或紅色熒光蛋白基因,所述綠色熒光蛋白基因的堿基序列如SEQ ID NO.8所示,所述紅色熒光蛋白基因的堿基序列如SEQ ID NO.9所示。

5.根據(jù)權利要求1-4中任一項所述的帶有熒光標記的豬繁殖與呼吸綜合征病毒的構建方法,其特征在于,所述感染性克隆質粒是pBAC-SD16。

6.根據(jù)權利要求1-4中任一項所述的帶有熒光標記的豬繁殖與呼吸綜合征病毒的構建方法,其特征在于,所述宿主細胞是Marc-145細胞或者MA-104細胞。

7.一種帶有熒光標記的豬繁殖與呼吸綜合征病毒,其特征在于,其由權利要求1-6中任一項所述的帶有熒光標記的豬繁殖與呼吸綜合征病毒的構建方法所構建得到。

8.權利要求7所述的帶有熒光標記的豬繁殖與呼吸綜合征病毒在篩選抗病毒藥物中的應用。

9.權利要求7所述的帶有熒光標記的豬繁殖與呼吸綜合征病毒在制備抗病毒藥物中的應用。

10.權利要求7所述的帶有熒光標記的豬繁殖與呼吸綜合征病毒在制備豬繁殖與呼吸綜合征病毒基因工程疫苗中的應用。

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