本發(fā)明屬于化學(xué)制藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一類含吡唑雜環(huán)的熊果酰胺衍生物及其合成與應(yīng)用，具體涉及一類含吡唑雜環(huán)的熊果酰胺衍生物及其合成方法且在治療腫瘤的藥物的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明，腫瘤是機(jī)體在環(huán)境污染、化學(xué)污染、電離輻射、自由基毒素、微生物(細(xì)菌、真菌、病毒等)及其代謝毒素、遺傳特性、內(nèi)分泌失衡、免疫功能紊亂等各種生理生化因素作用下，導(dǎo)致局部組織的某些細(xì)胞在基因水平上失去對(duì)其生長的正常調(diào)控，克隆性異常增殖而形成的新生物。臨床上，腫瘤治療主要采取手術(shù)、放射、化療、免疫及中醫(yī)藥等多種措施?；熂椿瘜W(xué)藥物治療，屬于腫瘤的全身治療方法，目前已有80余種化療藥物應(yīng)用于臨床，多種惡性腫瘤的化療治愈率超過50％。現(xiàn)階段臨床使用的抗腫瘤藥物，可分為烷化劑、鉑化合物、抗生素、天然藥物及激素五大類。其中，約有1/3的藥物來自于植物。從天然植物中分離得到的抗腫瘤活性成分，代表性藥物有紫杉醇、長春新堿、替尼泊苷等。天然抗腫瘤藥物的抗癌譜廣，選擇性高，毒副作用小，在臨床應(yīng)用上有著十分廣闊的發(fā)展前景。目前，從天然植物中提取、分離抗腫瘤活性成分、開發(fā)毒副作用小、專一性高、殺傷力強(qiáng)的天然抗腫瘤藥物，已成為近年來國內(nèi)外抗腫瘤藥物研究的熱點(diǎn)。

熊果酸(ursolicacid，ua)，是一種存在于天然植物中的烏蘇烷型五環(huán)三萜類化合物，具有鎮(zhèn)靜、抗炎、護(hù)肝、降血脂等多種生物活性，是已知多種中草藥的主要活性成分。近年來，國內(nèi)外陸續(xù)報(bào)道了熊果酸對(duì)多種腫瘤細(xì)胞增殖的顯著抑制作用，具有確定的誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用。然而由于熊果酸類化合物較差的溶解性、靶點(diǎn)不明確以及生物利用度較低，限制了其在藥物開發(fā)中的發(fā)展。近年來，隨著人們對(duì)天然產(chǎn)物及其類似物的成藥性研究再度興起，通過化學(xué)手段對(duì)熊果酸的結(jié)構(gòu)修飾以降低副作用、提高生物活性及改善其生物利用度，再次成為萜類天然產(chǎn)物藥物開發(fā)的熱點(diǎn)。

根據(jù)2014年康奈爾大學(xué)njardarson教授對(duì)fda批準(zhǔn)上市藥物的結(jié)構(gòu)統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)59％藥物分子均含有氮原子雜環(huán)結(jié)構(gòu)。因此，基于復(fù)雜天然產(chǎn)物結(jié)構(gòu)引入氮原子雜環(huán)結(jié)構(gòu)是對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾的重要策略。其中，吡唑雜環(huán)是活性藥物分子的重要結(jié)構(gòu)骨架，被廣泛的應(yīng)用于天然產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)改造及活性藥物分子的設(shè)計(jì)合成中。因此，有必要對(duì)熊果酸進(jìn)行進(jìn)一步的研究與探討。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的在于提供一類含吡唑雜環(huán)的熊果酰胺衍生物及其合成與應(yīng)用，用于對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長進(jìn)行抑制，具有新型抗腫瘤藥物的開發(fā)潛力。

為實(shí)現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，本發(fā)明第一方面提供一類含吡唑雜環(huán)的熊果酰胺衍生物，所述衍生物具有如下式8所示的結(jié)構(gòu)通式：

式中，

r¹選自氫(h-)、c1-c4烷基、c3-c6環(huán)烷基、芳基、芳基烷基；

r²選自氫(h-)、c1-c4烷基、鹵代烷基、c(o)or’；所述r’為c1-c4烷基；

r³選自氫(h-)、c1-c6烷基、c3-c6環(huán)烷基、鹵代烷基、環(huán)烷基烷基、烷氧基烷基、任選取代的芳基烷基、雜環(huán)基烷基；

r⁴為c1-c6烷基、c3-c6環(huán)烷基、鹵代烷基、環(huán)烷基烷基、烷氧基烷基、任選取代的芳基烷基、雜環(huán)基烷基；

或者，所述r³和r⁴與橋接的氮原子一起形成取代或未取代的雜環(huán)烷基。

優(yōu)選地，所述r¹中c1-c4烷基為甲基(ch3-)或異丙基(ipr-)。

優(yōu)選地，所述r¹中c3-c6環(huán)烷基為環(huán)戊基(cyclopentyl)。

優(yōu)選地，所述r¹中芳基烷基為芐基(bn-)。

優(yōu)選地，所述r¹中芳基為苯基(ph-)、4-溴苯基(4-brc6h5-)、3-氟苯基(3-fc6h5-)、4-氰基苯基(4-cnc6h5-)或4-羧基苯基(4-co2hc6h5-)。

優(yōu)選地，所述r²中c1-c4烷基為甲基(ch3-)。

優(yōu)選地，所述r²中鹵代烷基為三氟甲基(cf3-)。

優(yōu)選地，所述r²中c(o)or’為co2et-。

優(yōu)選地，所述r³中c1-c6烷基為異丙基(isopropyl-)、正己基(n-hexyl-)或正丁基(n-butyl-)。

優(yōu)選地，所述r³中c3-c6環(huán)烷基為環(huán)己基(cyclopentyl-)或環(huán)丁基(cyclobutyl-)。

優(yōu)選地，所述r³中環(huán)烷基烷基為環(huán)丙基甲基(cyclopropylmethyl-)。

優(yōu)選地，所述r³中鹵代烷基為2,2,2-三氟乙基(2,2,2-trifluoroethyl-，)。

優(yōu)選地，所述r³中烷氧基烷基為3-異丙氧基丙基(3-isopropoxypropyl-，)。

優(yōu)選地，所述r³中取代的芳基烷基為4-氟苯甲基((4-fluorophenyl)methyl-，)或4-甲氧基苯乙基((4-methoxyphenyl)ethyl-，)。

優(yōu)選地，所述r³中雜環(huán)基烷基為2-吡咯乙基(2-(pyrrolidin-1-yl)ethyl-，)、4-吡啶甲基(4-pyridylmethyl-，)、2-呋喃甲基(2-furanylmethyl-，)或3-嗎啉基丙基(3-morpholinopropyl-，)。

優(yōu)選地，所述r⁴中c1-c6烷基為異丙基(isopropyl-)、正己基(n-hexyl-)或正丁基(n-butyl-)。

優(yōu)選地，所述r⁴中c3-c6環(huán)烷基為環(huán)戊基(cyclopentyl-)、環(huán)己基(cyclopentyl-)或環(huán)丁基(cyclobutyl-)。

優(yōu)選地，所述r⁴中環(huán)烷基烷基為環(huán)丙基甲基(cyclopropylmethyl-)。

優(yōu)選地，所述r⁴中鹵代烷基為2,2,2-三氟乙基(2,2,2-trifluoroethyl-)。

優(yōu)選地，所述r⁴中烷氧基烷基為3-異丙氧基丙基(3-isopropoxypropyl-)。

優(yōu)選地，所述r⁴中取代的芳基烷基為4-氟苯甲基((4-fluorophenyl)methyl-)或4-甲氧基苯乙基((4-methoxyphenyl)ethyl-)。

優(yōu)選地，所述r⁴中雜環(huán)基烷基為2-吡咯乙基(2-(pyrrolidin-1-yl)ethyl-)、4-吡啶甲基(4-pyridylmethyl-)、2-呋喃甲基(2-furanylmethyl-)或3-嗎啉基丙基(3-morpholinopropyl-)。

優(yōu)選地，所述r³和r⁴與橋接的氮原子一起形成的雜環(huán)烷基選自中的一種。

優(yōu)選地，所述一類含吡唑雜環(huán)的熊果酰胺衍生物為化合物lb-1、化合物lb-2、化合物lb-3、化合物lb-4、化合物lb-5、化合物lb-6、化合物lb-7、化合物lb-8、化合物lb-9、化合物lb-10、化合物lb-11、化合物lb-12、化合物lb-13、化合物lb-14或化合物lb-15，其中，所述化合物的r¹、r²、r³、r⁴基團(tuán)見下表1。

表1.化合物的r¹、r²、r³、r⁴基團(tuán)列表

本發(fā)明第二方面提供一類含吡唑雜環(huán)的熊果酰胺衍生物的合成方法，其合成路線如下：

具體包括以下步驟：

a)以熊果酸(1)為原料，使熊果酸(1)的c-28位羧基獲得芐基保護(hù)，獲得中間體(2)；

優(yōu)選地，在步驟a)中，所述熊果酸(1)為商品化的熊果酸。

優(yōu)選地，在步驟a)中，所述芐基保護(hù)是將熊果酸(1)與碳酸鉀(k2co3)、n,n-二甲基酰胺(dmf)、芐溴(bnbr)混合后進(jìn)行加熱反應(yīng)，獲得的混合物冷卻至室溫后，加水析出固體產(chǎn)物，將固體產(chǎn)物過濾、洗滌、干燥后，獲得中間體(2)。

更優(yōu)選地，所述熊果酸(1)與碳酸鉀加入的摩爾(mol)比為1:1-3。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述熊果酸(1)與碳酸鉀加入的摩爾(mol)比為1:1.5。

更優(yōu)選地，所述熊果酸(1)與n,n-二甲基酰胺加入的摩爾(mol)比為1:9-11。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述熊果酸(1)與n,n-二甲基酰胺加入的摩爾(mol)比為1:10。

更優(yōu)選地，所述熊果酸(1)與芐溴加入的摩爾(mol)比為1:1-2。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述熊果酸(1)與芐溴加入的摩爾(mol)比為1:1.5。

更優(yōu)選地，所述加熱反應(yīng)的條件為：反應(yīng)溫度為50-70℃；反應(yīng)時(shí)間為3-5h。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述加熱反應(yīng)的條件為：反應(yīng)溫度為60℃；反應(yīng)時(shí)間為4h。

更優(yōu)選地，所述室溫為20-25℃。

更優(yōu)選地，所述熊果酸(1)加入的質(zhì)量(mg)與水加入的體積(ml)之比為450-470:40-60。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述熊果酸(1)加入的質(zhì)量(mg)與水加入的體積(ml)之比為460:50。

優(yōu)選地，在步驟a)中，所述中間體(2)的產(chǎn)率為90-94％。

更優(yōu)選地，在步驟a)中，所述洗滌采用水進(jìn)行多次洗滌。

b)在中間體(2)中加入pcc進(jìn)行氧化反應(yīng)，使中間體(2)的c-3位羥基氧化形成羰基，獲得中間體(3)；

優(yōu)選地，在步驟b)中，所述氧化反應(yīng)是將中間體(2)溶于二氯甲烷后冷卻至0℃以下，加入pcc在室溫下攪拌進(jìn)行氧化反應(yīng)，將獲得的反應(yīng)產(chǎn)物過濾、濃縮、分離純化后，獲得中間體(3)。

更優(yōu)選地，所述中間體(2)加入的質(zhì)量(mg)與二氯甲烷加入的體積(ml)之比為440-460:40-60。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述中間體(2)加入的質(zhì)量(mg)與二氯甲烷加入的體積(ml)之比為450:50。

更優(yōu)選地，所述中間體(2)與pcc加入的摩爾比為1:1.2-3。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述中間體(2)與pcc加入的摩爾比為1:1.5。所述pcc為吡啶和cro3在鹽酸溶液中的絡(luò)合鹽。

更優(yōu)選地，所述攪拌時(shí)間為11-13h。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述攪拌時(shí)間為12h。

優(yōu)選地，在步驟b)中，所述中間體(3)的產(chǎn)率為83-85％。

c)將中間體(3)在堿性條件下加入酯類化合物進(jìn)行反應(yīng)，使中間體(3)的c-3位羰基的α-位上形成-co-r²取代基，獲得中間體(4)；

優(yōu)選地，在步驟c)中，所述反應(yīng)是將中間體(3)溶于四氫呋喃(thf)后冷卻至0℃以下，加入堿性化合物、酯類化合物，在室溫下攪拌混合反應(yīng)，將獲得的反應(yīng)產(chǎn)物加水進(jìn)行淬滅反應(yīng)，經(jīng)萃取、洗滌、干燥、過濾、濃縮、分離純化后，獲得中間體(4)，所述中間體(4)中，r²具有如式8化合物中相同的定義。

更優(yōu)選地，所述中間體(3)加入的質(zhì)量(mg)與四氫呋喃加入的體積(ml)之比為250-350:15-25。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述中間體(3)加入的質(zhì)量(mg)與四氫呋喃加入的體積(ml)之比為300:20。

更優(yōu)選地，所述堿性化合物為甲醇鈉。

更優(yōu)選地，所述中間體(3)與堿性化合物加入的摩爾比為1:1-2。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述中間體(3)與堿性化合物加入的摩爾比為1:1.2。

更優(yōu)選地，所述酯類化合物選自甲酸乙酯、乙酸乙酯、三氟乙酸乙酯中的一種。

更優(yōu)選地，所述中間體(3)與酯類化合物加入的摩爾比為1:1-2。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述中間體(3)與酯類化合物加入的摩爾比為1:1.0-1.5。

更優(yōu)選地，所述攪拌時(shí)間為3-5h。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述攪拌時(shí)間為4h。

更優(yōu)選地，所述淬滅反應(yīng)是通過加水去除反應(yīng)產(chǎn)物中不需要參與后續(xù)反應(yīng)的溶于水的物質(zhì)。

更優(yōu)選地，所述萃取的反應(yīng)條件為：萃取試劑為乙酸乙酯，萃取次數(shù)為3-4次，萃取試劑用量為25-35ml。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述萃取的反應(yīng)條件為：萃取試劑為乙酸乙酯，萃取次數(shù)為3次，萃取試劑用量為30ml。

更優(yōu)選地，所述洗滌依次采用水、食鹽進(jìn)行多次洗滌。

更優(yōu)選地，所述干燥采用無水硫酸鈉進(jìn)行干燥。

優(yōu)選地，在步驟c)中，所述中間體(4)的產(chǎn)率為65-75％。

d)將中間體(4)與肼類化合物進(jìn)行縮合反應(yīng)，使中間體(4)的c-3位羰基脫水形成r²取代基的吡唑雜環(huán)，獲得中間體(5)；

優(yōu)選地，在步驟d)中，所述縮合反應(yīng)是將中間體(4)與肼類化合物溶于有機(jī)溶劑，加熱攪拌反應(yīng)后冷卻至室溫，將獲得的反應(yīng)產(chǎn)物濃縮、洗滌、分離純化后，獲得中間體(5)，所述中間體(5)中，r¹和r²具有如式8化合物中相同的定義。

更優(yōu)選地，所述肼類化合物選自烷基肼、芳基肼、雜芳基肼中的一種。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述肼類化合物選自苯肼、對(duì)甲苯肼、對(duì)氯苯肼、對(duì)溴苯肼、對(duì)羧基苯肼、對(duì)氰基苯肼中的一種。

更選地，所述中間體(4)與肼類化合物加入的摩爾比為1:1-2。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述中間體(4)與肼類化合物加入的摩爾比為1:1。

更優(yōu)選地，所述有機(jī)溶劑為乙醇。

更優(yōu)選地，所述中間體(4)加入的質(zhì)量(mg)與有機(jī)溶劑加入的體積(ml)之比為310-330:15-25。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述中間體(4)加入的質(zhì)量(mg)與有機(jī)溶劑加入的體積(ml)之比為320:20。

更優(yōu)選地，所述加熱攪拌反應(yīng)的條件為：加熱溫度為80-90℃，攪拌時(shí)間為11-13h。

進(jìn)一步優(yōu)選地，所述加熱攪拌反應(yīng)的條件為：加熱溫度為85℃，攪拌時(shí)間為12h。

更優(yōu)選地，所述洗滌采用水進(jìn)行多次洗滌。

優(yōu)選地，在步驟d)中，所述中間體(5)的產(chǎn)率為80-90％。

e)將中間體(5)進(jìn)行氫化反應(yīng)，使中間體(5)脫出c-28位羧基上的芐基保護(hù)基，獲得中間體(6)；

優(yōu)選地，在步驟e)中，所述氫化反應(yīng)是將中間體(5)和催化劑溶于有機(jī)溶劑，再通入氫氣進(jìn)行反應(yīng)，將獲得的反應(yīng)產(chǎn)物過濾、洗滌、濃縮后攪拌打漿，再次過濾、干燥，即得所需中間體(6)，所述中間體(6)中，r¹和r²具有如式8化合物中相同的定義。

更優(yōu)選地，所述催化劑為10wt％鈀碳混合物(pd與c的重量之比為10:90)。

更優(yōu)選地，所述中間體(5)與催化劑加入的質(zhì)量之比為30-40:45-55。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述中間體(5)與催化劑加入的質(zhì)量之比為35:50。

更優(yōu)選地，所述有機(jī)溶劑為甲醇。

更優(yōu)選地，所述中間體(5)加入的質(zhì)量(mg)與有機(jī)溶劑加入的體積(ml)之比為30-40:15-25。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述中間體(5)加入的質(zhì)量(mg)與有機(jī)溶劑加入的體積(ml)之比為35:20。

更優(yōu)選地，所述氫氣在常壓下通入。

更優(yōu)選地，所述催化氫化反應(yīng)在常壓下進(jìn)行。

更優(yōu)選地，所述洗滌采用甲醇進(jìn)行多次洗滌。

更優(yōu)選地，所述再次過濾為減壓抽濾方式。

優(yōu)選地，在步驟e)中，所述中間體(6)的產(chǎn)率為85-90％。

f)使中間體(6)中的c-28位羧基酰氯化，獲得中間體(7)；

優(yōu)選地，在步驟f)中，所述酰氯化是將中間體(6)溶于無水二氯甲烷中冷卻至0℃以下，再依次加入草酰氯、n,n-二甲基酰胺(dmf)，在室溫下攪拌混合反應(yīng)，濃縮后干燥，獲得中間體(7)，所述中間體(7)中，r¹和r²具有如式8化合物中相同的定義。

更優(yōu)選地，所述中間體(6)加入的質(zhì)量(g)與無水二氯甲烷加入的體積(ml)之比為1:2-10。

更優(yōu)選地，所述冷卻是在冰水浴中進(jìn)行冷卻至0℃以下。

更優(yōu)選地，所述中間體(6)與草酰氯加入的摩爾比為1:1-2。

更優(yōu)選地，所述中間體(6)與n,n-二甲基酰胺加入的摩爾比為1:0.01-0.1。

更優(yōu)選地，所述攪拌時(shí)間為5-7h。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述攪拌時(shí)間為6h。

g)使中間體(7)的c-28位羧基酰氯與胺類化合物形成酰胺鍵，即得所需化合物(8)。

優(yōu)選地，在步驟g)中，所述形成酰胺鍵是將中間體(7)溶于n,n-二甲基酰胺(dmf)，依次加入堿性化合物、胺類化合物，在室溫下攪拌混合反應(yīng)，濃縮、分離純化、攪拌打漿后干燥，即得所需化合物(8)。

更優(yōu)選地，所述中間體(7)加入的質(zhì)量(g)與n,n-二甲基酰胺(dmf)加入的體積(ml)之比為1:2-10。

更優(yōu)選地，所述堿性化合物為三乙胺(et3n)或n,n-二異丙基乙胺(ipr2net)。

更優(yōu)選地，所述中間體(7)與堿性化合物加入的摩爾比為1:1-2。

更優(yōu)選地，所述胺類化合物的結(jié)構(gòu)通式為：r³r⁴nh，式中，r³和r⁴具有如式8化合物中相同的定義。

更優(yōu)選地，所述中間體(7)與胺類化合物加入的量的摩爾比為1:1-1.5。

更優(yōu)選地，在步驟e)或g)中，所述攪拌打漿是將殘留物經(jīng)乙醚攪拌打漿。

優(yōu)選地，在步驟a)、b)、c)或e)中，所述過濾是將反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)硅藻土過濾除去不溶物。

優(yōu)選地，在步驟b)、c)、d)、e)、f)或g)中，所述濃縮是將反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行加壓蒸餾濃縮。

優(yōu)選地，在步驟b)、c)、d)或g)中，所述分離純化是將反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱進(jìn)行層析分離純化。

優(yōu)選地，在步驟a)、e)、f)或g)中，所述干燥為真空干燥，所述真空干燥的條件分別為55-65℃，真空度0.005-0.015pa。所述真空干燥為常規(guī)采用油泵進(jìn)行抽真空的干燥方式。

本發(fā)明第三方面提供一類含吡唑雜環(huán)的熊果酰胺衍生物在制備用于治療腫瘤的藥物中的用途。

優(yōu)選地，所述腫瘤為宮頸癌或肺癌。

更優(yōu)選地，所述腫瘤的細(xì)胞為宮頸癌細(xì)胞hela或肺癌細(xì)胞spc-a-1中的一種或多種。

所述一類含吡唑雜環(huán)的熊果酰胺衍生物制備用于治療腫瘤的藥物的機(jī)理為對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行殺傷，從而抑制其活性，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞生長。

本發(fā)明第四方面提供一種藥物組合物，包括治療有效量的一類含吡唑雜環(huán)的熊果酰胺衍生物。

如上所述，本發(fā)明提供的一類含吡唑雜環(huán)的熊果酰胺衍生物及其合成與應(yīng)用，通過在熊果酸a環(huán)的結(jié)構(gòu)修飾，合成了一系列在熊果酸a環(huán)上具有吡唑雜環(huán)的熊果酰胺衍生物。經(jīng)過體外抗腫瘤的活性研究表明，這類熊果酸三萜類衍生物對(duì)腫瘤細(xì)胞生長具有明顯的抑制作用，具有新型抗腫瘤藥物的開發(fā)潛力。

附圖說明

圖1顯示為本發(fā)明的一類含吡唑雜環(huán)的熊果酰胺衍生物在不同時(shí)間段對(duì)腫瘤細(xì)胞hela的抑制活性示意圖。

圖2顯示為本發(fā)明的一類含吡唑雜環(huán)的熊果酰胺衍生物在不同時(shí)間段對(duì)腫瘤細(xì)胞spc-a-1的抑制活性示意圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明，應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。

以下通過特定的具體實(shí)例說明本發(fā)明的實(shí)施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可由本說明書所揭露的內(nèi)容輕易地了解本發(fā)明的其他優(yōu)點(diǎn)與功效。本發(fā)明還可以通過另外不同的具體實(shí)施方式加以實(shí)施或應(yīng)用，本說明書中的各項(xiàng)細(xì)節(jié)也可以基于不同觀點(diǎn)與應(yīng)用，在沒有背離本發(fā)明的精神下進(jìn)行各種修飾或改變。

以下實(shí)施例中使用的試劑均為本領(lǐng)域常規(guī)使用的試劑，使用的儀器均為本領(lǐng)域常規(guī)使用的儀器。

實(shí)施例1

取熊果酸(1)460mg、無水碳酸鉀280mg溶于10mln,n-二甲基酰胺中，再加入bnbr300mg，反應(yīng)混合物在60℃左右加熱4小時(shí)至反應(yīng)進(jìn)行完全?；旌衔锢鋮s至室溫下，加入50mlh2o，析出白色固體。所得固體依次經(jīng)過濾、水洗、真空干燥即得0.50g中間體(2)，中間體(2)的產(chǎn)率為92％。

中間體(2)的譜圖鑒定結(jié)果如下：

¹hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝7.36-7.29(m,5h),5.24-5.23(m,1h),5.10(d,j＝12.5hz,1h),4.98(d,j＝12.5hz,1h),3.20(dd,j＝11.0,4.5hz,1h),2.04-1.98(m,1h),1.89-1.76(m,3h),1.73-1.67(m,2h),1.64-1.55(m,4h),1.53-1.44(m,6h),1.37-1.26(m,6h),1.07(s,3h),1.05-1.02(m,2h),0.98(s,3h),0.93(d,j＝6.0hz,3h),0.89(s,3h),0.85(d,j＝6.5hz,3h),0.78(s,3h),0.64(s,3h).

¹³cnmr(125mhz,cdcl3):δ＝177.3,138.1,136.3,128.4(2c),128.1(2c),127.9,125.7,79.0,66.0,55.2,52.9,48.1,47.5,42.0,39.5,39.1,38.8,38.7,38.6,36.9,36.6,33.0,30.6,28.1,27.9,27.2,24.2,23.5,23.2,21.2,18.3,17.0(2c),15.6,15.4.

合成過程如下：

實(shí)施例2

取中間體(2)450mg溶于50ml無水二氯甲烷中，冷卻至0℃以下，加入pcc355mg反應(yīng)，混合物緩慢升至室溫下攪拌12小時(shí)左右至反應(yīng)進(jìn)行完全。反應(yīng)混合物經(jīng)硅藻土過濾除去不溶物，有機(jī)相加壓濃縮，殘留物經(jīng)硅膠柱層析分離純化即得375mg中間體(3)，中間體(3)為白色固體，中間體(3)的產(chǎn)率為84％。

中間體(3)的譜圖鑒定結(jié)果如下：

¹hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝7.37-7.29(m,5h),5.25(t,j＝3.5hz,1h),5.11(d,j＝12.5hz,1h),4.99(d,j＝12.5hz,1h),2.57-2.50(m,1h),2.40-2.34(m,1h),2.27(d,j＝11.5hz,1h),2.04-1.98(m,1h),1.92-1.87(m,3h),1.82-1.68(m,3h),1.64-1.54(m,3h),1.50-1.41(m,5h),1.35-1.28(m,4h),1.10-1.07(m,1h),1.08(s,6h),1.03(d,j＝9.0hz,6h),0.93(d,j＝6.0hz,3h),0.85(d,j＝6.5hz,3h),0.68(s,3h).

¹³cnmr(125mhz,cdcl3):δ＝177.2,138.2,136.3,128.4(2c),128.1(2c),127.9,125.4,66.0,55.2,52.9,48.1,47.4,46.7,42.1,39.4,39.3,39.1,38.8,36.6,36.5,34.2,32.5,30.6,27.9,26.5,24.2,23.5,23.3,21.4,21.1,19.5,17.0,16.9,15.2.

合成過程如下：

實(shí)施例3

取中間體(3)300mg溶于20ml無水四氫呋喃中，反應(yīng)液冷卻至0℃下，向其中加入甲醇鈉45mg，然后加入甲酸乙酯45mg。反應(yīng)混合物置于室溫下攪拌約4小時(shí)至反應(yīng)進(jìn)行完全。加入少量水淬滅反應(yīng)，混合物經(jīng)乙酸乙酯萃取三次(3x30ml)。合并有機(jī)相依次用水、食鹽水洗、無水硫酸鈉干燥、過濾。有機(jī)相濃縮，殘留經(jīng)硅膠柱層析快速分離得中間體(4a)。

中間體(4a)的譜圖鑒定結(jié)果如下：

¹hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝14.92(brs,1h),8.57(s,1h),7.37-7.30(m,5h),5.28(t,j＝3.3hz,1h),5.12(d,j＝12.5hz,1h),4.99(d,j＝12.5,1h),2.32-2.28(m,2h),2.05-1.92(m,4h),1.82-1.69(m,3h),1.65-1.56(m,2h),1.50-1.43(m,3h),1.39-1.26(m,5h),1.18(s,3h),1.14-1.10(m,2h),1.11(s,3h),1.08(s,3h),0.94(d,j＝6.5hz,3h),0.89(s,3h),0.86(d,j＝6.5hz,3h),0.68(s,3h).

¹³cnmr(125mhz,cdcl3):δ＝177.2,138.1,136.3,128.4(2c),128.2(2c),127.9,125.4,105.8,66.0,53.0,52.0,48.1,45.5,42.2,40.1,39.4,39.3,39.1,38.8,36.6,36.2,32.3,30.6,28.4,27.9,24.2,23.4,23.3,21.1,20.9,19.4,17.0,16.9,14.6.

hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc38h52o4:572.3866；found:572.3871.

合成過程如下：

實(shí)施例4

取中間體(3)300mg溶于20ml無水四氫呋喃中，反應(yīng)液冷卻至0℃下，向其中加入甲醇鈉45mg，然后加入乙酸乙酯55mg。將反應(yīng)置于室溫下攪拌4小時(shí)左右至反應(yīng)進(jìn)行完全，加入少量水淬滅反應(yīng)?；旌衔镉靡宜嵋阴ポ腿∪?3x30ml)。合并有機(jī)相依次經(jīng)水洗、食鹽水洗、無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液經(jīng)加壓蒸餾濃縮，殘留物經(jīng)硅膠柱層析快速分離即得中間體(4b)。

合成過程如下：

實(shí)施例5

取中間體(3)300mg溶于20ml無水四氫呋喃中，反應(yīng)液冷卻至0℃下，向其中加入甲醇鈉45mg，然后加入三氟乙酸乙酯55mg。將反應(yīng)置于室溫下攪拌4小時(shí)左右至反應(yīng)進(jìn)行完全，加入少量水淬滅反應(yīng)?；旌衔镉靡宜嵋阴ポ腿∪?3x30ml)。合并有機(jī)相依次經(jīng)水洗、食鹽水洗、無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液經(jīng)加壓蒸餾濃縮，殘留物經(jīng)硅膠柱層析快速分離即得中間體(4c)。

合成過程如下：

實(shí)施例6

取中間體(4a)320mg、4-氰基苯肼鹽酸鹽95mg溶于20ml乙醇中，加熱至80℃下攪拌反應(yīng)12小時(shí)左右至反應(yīng)進(jìn)行完全。反應(yīng)液冷卻至室溫下，減壓蒸餾除去溶劑，殘留物加水洗滌數(shù)次，初產(chǎn)物進(jìn)一步經(jīng)硅膠柱層析純化得到315mg中間體(5)，中間體(5)為白色固體，中間體(5)的產(chǎn)率為84％。

中間體(5)的譜圖鑒定結(jié)果如下：

¹hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝7.78(d,j＝8.5hz,2h),7.55(d,j＝8.5hz,2h),7.34(s,1h),7.37-7.31(m,5h),5.32(t,j＝3.0hz,1h),5.12(d,j＝12.5,1h),4.98(d.j＝12.5hz,1h),4.14-4.09(m,1h),2.77(d,j＝15.5hz,1h),2.31(d,j＝11.0hz,1h),2.15(d,j＝15.5hz,1h),2.05-1.99(m,3h),1.90-1.84(m,1h),1.82-1.60(m,4h),1.50-1.47(m,3h),1.39-1.24(m,6h),1.12-1.08(m,1h),1.09(s,3h),1.03(s,3h),1.02(s,3h),0.95(s,3h),0.93(s,3h),0.88(d,j＝3.9hz,3h),0.69(s,3h).

¹³cnmr(125mhz,cdcl3):δ＝177.3,146.7,146.5,139.5,138.1,136.4,132.6,130.0,128.5(2c),128.2(2c),128.0,125.7,118.1,115.1,112.9,66.1,58.5,54.6,53.1,48.3,46.4,42.2,39.5,39.2,38.9,38.0,37.1,36.7,34.7,32.6,30.7,29.7,28.0,24.3,23.4,23.3,22.8,21.2,19.2,18.5,17.0,16.9,15.5.

hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc45h55n3o2:669.4294；found:669.4283.

合成過程如下：

實(shí)施例7

取中間體(5)35mg、10％pd/c50mg溶于20ml甲醇中，常壓催化氫化。待反應(yīng)進(jìn)行完全，過濾除去鈀碳，甲醇洗滌數(shù)次。濾液加壓濃縮，所得殘留物經(jīng)乙醚攪拌打漿，過濾，固體真空干燥即得25mg化合物(6)，化合物(6)為白色固體，化合物(6)的產(chǎn)率為86％。

化合物(6)的譜圖鑒定結(jié)果如下：

¹hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝10.95(brs,1h),7.75(d,j＝8.5hz,2h),7.52(d,j＝8.5hz,2h),7.37(s,1h),5.32(t,j＝3.5hz,1h),2.64(d,j＝15.0hz,1h),2.23(d,j＝11.5hz,1h),2.14(d,j＝15.5hz,1h),2.05-1.99(m,3h),1.90-1.84(m,1h),1.72-1.66(m,4h),1.53-1.49(m,3h),1.42-1.26(m,6h),1.15-1.12(m,1h),1.10(s,3h),1.03(s,3h),0.99(s,3h),0.95(d,j＝6.5hz,3h),0.93(s,3h),0.89(d,j＝6.0hz,3h),0.84(s,3h).

¹³cnmr(125mhz,cdcl3):δ＝183.6，146.6，146.2，139.3，137.8，132.5(2c),129.9(2c),125.6,117.9,115.0,112.9,54.4,52.6,47.9,46.3,42.1,39.4,39.1,38.7,37.9,36.9,36.6,34.6,32.3,30.6,29.5,27.9,24.0,23.4,23.2,22.7,21.1,19.1,16.9,16.7,15.4.

hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc44h63n4o2:579.3825；found:579.3816.

合成過程如下：

實(shí)施例8

取中間體(6)100mg溶于20ml無水ch2cl2中，冷卻至0℃以下，依次加入(cocl)225μl和催化量的dmf30mg。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌6小時(shí)，減壓蒸除溶劑，殘留物經(jīng)真空干燥即得中間體(7)，中間體(7)無需純化直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。

合成過程如下：

實(shí)施例9化合物lb-1的制備

取中間體(7)100mg溶于10ml無水dmf中，依次加入35μlet3n、0.22mmolr¹r²nh2。混合物在室溫下攪拌至反應(yīng)完全。高真空減壓濃縮蒸除溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱層析快速純化，所得產(chǎn)物經(jīng)甲基叔丁基醚打漿，收集固體經(jīng)干燥后得102mg化合物lb-1，化合物lb-1為白色固體，化合物lb-1的產(chǎn)率為89％。

化合物lb-1的譜圖鑒定結(jié)果如下：

¹hnmr(500mhz,chloroform-d)δ＝7.85–7.70(m,2h),7.59–7.49(m,2h),7.38(s,1h),6.79(t,j＝5.2hz,1h),5.40(t,j＝3.6hz,1h),3.50(dt,j＝16.5,5.6hz,1h),3.40–3.23(m,1h),2.73(m,7h),2.17(d,j＝15.0hz,1h),2.09(m,2h),2.05–1.95(m,2h),1.95–1.82(m,5h),1.82–1.59(m,3h),1.56–1.37(m,5h),1.36–1.23(m,4h),1.13(s,4h),1.04(d,j＝15.8hz,6h),0.99–0.93(m,5h),0.92(d,j＝6.5hz,3h),0.90–0.83(m,5h)ppm.

hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc44h62n5o:676.4954；found:676.4957.

合成過程如下：

實(shí)施例10化合物lb-2的制備

制備方法同化合物lb-1的制備方法?；衔飈b-2的產(chǎn)率為72％。

化合物lb-2的譜圖鑒定結(jié)果如下：

¹hnmr(500mhz,chloroform-d)δ＝7.93–7.63(m,2h),7.63–7.45(m,2h),7.39(s,1h),5.83(d,j＝6.5hz,1h),5.39(t,j＝3.6hz,1h),4.12(m,1h),2.67(d,j＝14.9hz,1h),2.18(d,j＝14.9hz,1h),2.13–2.04(m,2h),2.03–1.82(m,5h),1.81–1.57(m,8h),1.57–1.40(m,7h),1.38–1.28(m,2h),1.14(s,4h),1.04(d,j＝12.9hz,6h),0.97(s,7h),0.94–0.82(m,7h)ppm.

hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc43h59n4o:647.4689；found:647.4694.

合成過程如下：

實(shí)施例11化合物lb-3的制備

制備方法同化合物lb-1的制備方法。化合物lb-3的產(chǎn)率為72％。

化合物lb-3的譜圖鑒定結(jié)果如下：

¹hnmr(500mhz,chloroform-d)δ＝8.57(d,j＝5.0hz,2h),7.78(d,j＝8.2hz,2h),7.54(d,j＝8.3hz,2h),7.39(s,1h),7.20(d,j＝5.0hz,2h),6.34(dt,j＝11.5,5.8hz,1h),5.40(t,j＝3.5hz,1h),4.62(dt,j＝15.5,7.7hz,1h),4.19(dd,j＝15.6,5.2hz,1h),2.64(dd,j＝15.0,5.6hz,1h),2.21–2.12(m,1h),2.12–1.90(m,6h),1.82(m,1h),1.71(m,2h),1.62–1.47(m,5h),1.41-1.28(m,4h),1.15(s,4h),1.04(d,j＝13.7hz,6h),0.99(d,j＝5.2hz,3h),0.96–0.89(m,6h),0.76(s,3h)ppm.

hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc44h56n5o:670.4485；found:670.4494.

合成過程如下：

實(shí)施例12化合物lb-4的制備

制備方法同化合物lb-1的制備方法。化合物lb-4的產(chǎn)率為75％。

化合物lb-4的譜圖鑒定結(jié)果如下：

¹hnmr(500mhz,chloroform-d)δ＝7.81–7.73(m,2h),7.57–7.51(m,2h),7.41–7.35(m,2h),6.33(m,1h),6.27(q,j＝5.3hz,1h),6.20(d,j＝3.3hz,1h),5.38(t,j＝3.5hz,1h),4.44–4.32(m,2h),2.64(dd,j＝14.9,6.1hz,1h),2.15(d,j＝14.9,5.1hz,1h),2.09–1.97(m,3h),1.97–1.87(m,2h),1.78(m,1h),1.75–1.64(m,3h),1.57–1.46(m,5h),1.44–1.34(m,2h),1.33–1.21(m,2h),1.12(m,4h),1.03(d,j＝12.7hz,6h),0.97(d,j＝2.6hz,3h),0.93(s,3h),0.90(d,j＝6.5hz,3h),0.74(s,3h)ppm.

hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc43h55n4o2:659.4325；found:659.4327.

合成過程如下：

實(shí)施例13化合物lb-5的制備

制備方法同化合物lb-1的制備方法。化合物lb-5的產(chǎn)率為83％。

化合物lb-5的譜圖鑒定結(jié)果如下：

¹hnmr(500mhz,chloroform-d)δ＝7.79–7.73(m,2h),7.57–7.51(m,2h),7.38(s,1h),5.33(d,j＝3.6hz,1h),3.63(d,j＝17.4hz,4h),2.65(d,j＝15.0hz,1h),2.53–2.49(m,1h),2.43–2.36(m,5h),2.31(s,4h),2.15(d,j＝15.2hz,2h),2.11–2.05(m,2h),1.82–1.75(m,2h),1.72(m,2h),1.54–1.49(m,3h),1.42(qd,j＝9.7,8.2,4.8hz,3h),1.32–1.25(m,1h),1.12(s,4h),1.09–1.00(m,7h),1.00–0.94(m,6h),0.92(d,j＝6.4hz,3h),0.85(d,j＝9.3hz,3h)ppm.

hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc43h60n5o:662.4798；found:662.4810.

合成過程如下：

實(shí)施例14化合物lb-6的制備

制備方法同化合物lb-1的制備方法?；衔飈b-6的產(chǎn)率為72％。

化合物lb-6的譜圖鑒定結(jié)果如下：

¹hnmr(500mhz,chloroform-d)δ＝7.77(d,j＝8.2hz,2h),7.54(d,j＝8.2hz,2h),7.38(s,1h),6.43(t,j＝5.3hz,1h),5.39(d,j＝3.5hz,1h),3.76(t,j＝4.7hz,4h),3.45(m,1h),3.11(m,1h),2.70–2.62(m,1h),2.49–2.39(m,6h),2.17(d,j＝15.2hz,1h),2.13–1.96(m,4h),1.83(m,1h),1.78–1.66(m,5h),1.51(m,4h),1.42(m,3h),1.31–1.25(m,3h),1.14(s,4h),1.04(d,j＝15.4hz,6h),0.97(d,j＝12.1hz,6h),0.93(d,j＝6.4hz,3h),0.86(s,3h)ppm.

hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc45h64n5o2:706.5060；found:706.5086.

合成過程如下：

實(shí)施例15化合物lb-7的制備

制備方法同化合物lb-1的制備方法?；衔飈b-7的產(chǎn)率為78％。

化合物lb-7的譜圖鑒定結(jié)果如下：

¹hnmr(500mhz,chloroform-d)δ＝7.78(d,j＝8.0hz,2h),7.55(d,j＝8.1hz,2h),7.39(s,1h),7.25(dd,j＝8.5,5.4hz,2h),7.03(t,j＝8.5hz,2h),6.17(t,j＝5.4hz,1h),5.33(t,j＝3.5hz,1h),4.50(dd,j＝14.6,5.9hz,1h),4.21(dd,j＝14.5,4.9hz,1h),2.69–2.60(m,1h),2.16(d,j＝15.0hz,1h),2.10–1.89(m,5h),1.80(m,1h),1.71(m,3h),1.58–1.45(m,5h),1.40(m,2h),1.30(m,2h),1.14(s,4h),1.05(d,j＝11.9hz,6h),0.98(s,3h),0.94(s,3h),0.91(d,j＝6.3hz,3h),0.76(s,3h)ppm.

hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc45h56fn4o:687.4438；found:687.4445.

合成過程如下：

實(shí)施例16化合物lb-8的制備

制備方法同化合物lb-1的制備方法。化合物lb-8的產(chǎn)率為85％。

化合物lb-8的譜圖鑒定結(jié)果如下：

¹hnmr(500mhz,chloroform-d)δ＝7.82–7.71(m,2h),7.59–7.50(m,2h),7.40(s,1h),7.19–7.08(m,2h),6.93–6.87(m,2h),5.89(dd,j＝7.0,3.7hz,1h),5.04(t,j＝3.4hz,1h),3.83(s,3h),3.72(m,1h),3.26–3.11(m,1h),2.82(m,1h),2.71–2.65(m,1h),2.61(d,j＝15.0hz,1h),2.14(d,j＝15.0hz,1h),1.94(m,3h),1.77-1.59(m,6h),1.54–1.34(m,7h),1.33–1.24(m,4h),1.09(s,4h),1.04(d,j＝10.4hz,6h),0.97(s,4h),0.93(s,3h),0.71(s,3h)ppm.

hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc46h59n4o2:713.4795；found:713.4796.

合成過程如下：

實(shí)施例17化合物lb-9的制備

制備方法同化合物lb-1的制備方法。化合物lb-9的產(chǎn)率為81％。

化合物lb-9的譜圖鑒定結(jié)果如下：

¹hnmr(500mhz,chloroform-d)δ＝7.77(d,j＝8.2hz,2h),7.54(d,j＝8.2hz,2h),7.39(s,1h),5.97(dd,j＝6.9,4.3hz,1h),5.42(d,j＝3.5hz,1h),3.28(dt,j＝13.4,6.8hz,1h),2.79(m,4.2hz,1h),2.66(d,j＝15.0hz,1h),2.18(d,j＝15.0hz,1h),2.10(m,2h),2.04–1.85(m,3h),1.82–1.62(m,5h),1.59–1.37(m,7h),1.37–1.22(m,2h),1.14(s,4h),1.04(d,j＝13.8hz,6h),0.97(d,j＝8.1hz,6h),0.95–0.90(m,9h),0.86(s,3h)ppm.

hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc42h59n4o:635.4689；found:635.4694.

合成過程如下：

實(shí)施例18化合物lb-10的制備

制備方法同化合物lb-1的制備方法。化合物lb-10的產(chǎn)率為76％。

化合物lb-10的譜圖鑒定結(jié)果如下：

¹hnmr(500mhz,chloroform-d)δ＝7.83–7.71(m,2h),7.60–7.48(m,2h),7.39(s,1h),6.18(dd,j＝7.4,4.9hz,1h),5.46(t,j＝3.6hz,1h),4.22–4.11(m,1h),3.59(m,1h),2.67(d,j＝14.9hz,1h),2.18(d,j＝15.0hz,1h),2.11(m,2h),2.08–2.03(m,1h),1.99(m,1h),1.86(m,1h),1.80–1.72(m,2h),1.72–1.63(m,2h),1.60–1.46(m,5h),1.46–1.36(m,2h),1.33–1.26(m,2h),1.15(m,4h),1.04(d,j＝14.6hz,6h),0.98(d,j＝11.3hz,6h),0.93(d,j＝6.4hz,3h),0.84(s,3h)ppm.

hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc40h52f3n4o:661.4093；found:661.4098.

合成過程如下：

實(shí)施例19化合物lb-11的制備

制備方法同化合物lb-1的制備方法?；衔飈b-11的產(chǎn)率為82％。

化合物lb-11的譜圖鑒定結(jié)果如下：

hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc42h57n4o2:649.4482；found:649.4470.

合成過程如下：

實(shí)施例20化合物lb-12的制備

制備方法同化合物lb-1的制備方法。化合物lb-12的產(chǎn)率為76％。

化合物lb-12的譜圖鑒定結(jié)果如下：

¹hnmr(500mhz,chloroform-d)δ＝7.77(d,j＝8.0hz,2h),7.54(d,j＝8.2hz,2h),7.39(s,1h),6.03(t,j＝5.1hz,1h),5.44(d,j＝3.7hz,1h),3.22(dt,j＝13.0,6.3hz,1h),2.90(ddd,j＝13.8,7.6,4.2hz,1h),2.67(d,j＝14.9hz,1h),2.18(d,j＝15.0hz,1h),2.11(dq,j＝7.6,3.8,3.0hz,2h),2.03–1.86(m,3h),1.82–1.65(m,4h),1.61–1.36(m,7h),1.34-1.25(m,2h)1.15(s,4h),1.04(d,j＝14.2hz,6h),0.98(d,j＝8.6hz,6h),0.93(d,j＝6.4hz,3h),0.88(s,4h),0.51(dt,j＝8.1,1.9hz,2h),0.26–0.12(m,2h)ppm.

hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc42h57n4o:633.4532；found:633.4539.

合成過程如下：

實(shí)施例21化合物lb-13的制備

制備方法同化合物lb-1的制備方法?；衔飈b-13的產(chǎn)率為76％。

化合物lb-13的譜圖鑒定結(jié)果如下：

¹hnmr(500mhz,chloroform-d)δ＝7.86–7.70(m,2h),7.62–7.45(m,2h),7.39(s,1h),5.97–5.84(m,1h),5.41(t,j＝3.6hz,1h),3.31(dq,j＝13.4,6.8hz,1h),3.07(dtd,j＝11.6,7.1,4.4hz,1h),2.66(d,j＝14.9hz,1h),2.18(d,j＝15.0hz,1h),2.14–2.07(m,2h),1.99(td,j＝13.6,4.0hz,1h),1.95–1.85(m,2h),1.82–1.65(m,4h),1.59–1.38(m,10h),1.36–1.28(m,8h),1.14(s,4h),1.04(d,j＝14.2hz,6h),0.97(d,j＝6.0hz,6h),0.94–0.88(m,6h),0.87(s,3h)ppm.

hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc44h63n4o:663.5002；found:663.5005.

合成過程如下：

實(shí)施例22化合物lb-14的制備

制備方法同化合物lb-1的制備方法?；衔飈b-14的產(chǎn)率為76％。

化合物lb-14的譜圖鑒定結(jié)果如下：

¹hnmr(500mhz,chloroform-d)δ＝7.84–7.68(m,2h),7.61–7.46(m,2h),7.38(s,1h),6.39(t,j＝5.1hz,1h),5.39(t,j＝3.7hz,1h),3.60–3.52(m,2h),3.50–3.44(m,1h),3.41–3.34(m,1h),3.24(dq,j＝13.3,5.7hz,1h),2.66(d,j＝15.0hz,1h),2.17(d,j＝15.0hz,1h),2.09(m,2h),2.03–1.94(m,2h),1.81(m,2h),1.74(m,4h),1.52(m,4h),1.45–1.37(m,3h),1.20(dd,j＝6.1,1.5hz,8h),1.13(s,4h),1.04(d,j＝14.9hz,6h),1.00–0.94(m,7h),0.91(d,j＝6.5hz,3h),0.87(s,3h)ppm.

hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc44h63n4o2:679.4951；found:679.4964.

合成過程如下：

實(shí)施例23化合物lb-15的制備

制備方法同化合物lb-1的制備方法?；衔飈b-15的產(chǎn)率為76％。

化合物lb-14的譜圖鑒定結(jié)果如下：

¹hnmr(500mhz,chloroform-d)δ＝7.83–7.71(m,2h),7.60–7.51(m,2h),7.39(s,1h),5.34(d,j＝3.8hz,1h),3.47(s,3h),2.65(d,j＝15.0hz,1h),2.56(d,j＝11.2hz,1h),2.21–1.99(m,4h),1.93–1.69(m,7h),1.56–1.48(m,3h),1.47–1.37(m,3h),1.34-1.24(m,4h)1.13(s,4h),1.04(d,j＝15.7hz,6h),0.97(d,j＝6.3hz,3h),0.96–0.91(m,6h),0.91–0.85(m,2h),0.85(s,3h)ppm.

hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc42h57n4o:633.4532；found:633.4539.

合成過程如下：

實(shí)施例24熊果酰胺衍生物體外抗腫瘤活性

對(duì)熊果酰胺衍生物進(jìn)行了抗腫瘤活性研究，選取腫瘤細(xì)胞hela和spc-a-1為檢測細(xì)胞，以cck-8比色法為檢測方法，酶標(biāo)儀以450nm條件下測其吸光度并計(jì)算細(xì)胞抑制率。

實(shí)驗(yàn)藥液的配制：將測試樣品用少量的dmso溶解配制成儲(chǔ)備液，即按試驗(yàn)最高濃度的1000倍配制儲(chǔ)備液。儲(chǔ)備液保存于-20℃冰箱中備用。

人宮頸癌細(xì)胞(hela)和人肺癌細(xì)胞(spc-a-1)的培養(yǎng)：為貼壁生長細(xì)胞，常規(guī)培養(yǎng)于dmem培養(yǎng)液內(nèi)(含10％胎牛血清、青鏈霉素)，置于37℃、5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每隔3-5d傳代一次。取對(duì)數(shù)生長期的腫瘤細(xì)胞，調(diào)細(xì)胞懸液濃度為1-1.5x10³個(gè)/ml。在96孔板培養(yǎng)板中每孔加細(xì)胞懸液100μl，置于37℃、5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。

培養(yǎng)24h后，分別按設(shè)計(jì)加入藥液。將測試藥液分別加入各孔中，每個(gè)濃度設(shè)6個(gè)平行孔。實(shí)驗(yàn)分為藥物試驗(yàn)組(分別加入不同測試藥物)、對(duì)照組(只加培養(yǎng)液和細(xì)胞，不加測試藥物)和空白組(只加培養(yǎng)液，不加細(xì)胞和測試藥物)。將加藥后的96孔板置于37℃、5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

藥物處理24h/48h/72h后，向每孔加入10μl的cck-8溶液，將培養(yǎng)板置于培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。用酶標(biāo)儀測定各孔在450nm處的od值，計(jì)算細(xì)胞抑制率。

細(xì)胞抑制率(％)＝(對(duì)照組od值-實(shí)驗(yàn)組od值)/(對(duì)照組od值-空白孔o(hù)d值)x100％

測得的細(xì)胞抑制率見圖1-2、附表2-3，表明這類化合物對(duì)hela和spc-a-1細(xì)胞的抑制作用。

從上述實(shí)驗(yàn)可知：本發(fā)明的熊果酰胺衍生物對(duì)人宮頸癌細(xì)胞(hela)和人肺癌細(xì)胞(spc-a-1)有明顯的殺傷作用，具有顯著的抑制腫瘤細(xì)胞活性。

表2.熊果酰胺衍生物對(duì)hela細(xì)胞的殺傷作用

表3.熊果酰胺衍生物對(duì)spc-a-1細(xì)胞的殺傷作用

所以，本發(fā)明有效克服了現(xiàn)有技術(shù)中的種種缺點(diǎn)而具高度產(chǎn)業(yè)利用價(jià)值。

上述實(shí)施例僅例示性說明本發(fā)明的原理及其功效，而非用于限制本發(fā)明。任何熟悉此技術(shù)的人士皆可在不違背本發(fā)明的精神及范疇下，對(duì)上述實(shí)施例進(jìn)行修飾或改變。因此，舉凡所屬技術(shù)領(lǐng)域中具有通常知識(shí)者在未脫離本發(fā)明所揭示的精神與技術(shù)思想下所完成的一切等效修飾或改變，仍應(yīng)由本發(fā)明的權(quán)利要求所涵蓋。