本發(fā)明涉及具有抗腫瘤活性的化合物，具體涉及從蟾蜍中提取得到的具有抗腫瘤活性的嚏根草苷元合成的新化合物及其在預(yù)防和治療腫瘤疾病中的用途，屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤是嚴重危害人類健康和生命的多發(fā)病和常見病。在腫瘤的術(shù)療、放療、化療、生物治療四大療法中，化療仍是主要的治療方法，現(xiàn)有的化療藥物抗腫瘤活性有限，且毒副作用較大，病人耐受能力差，且價格昂貴。因此，通過研究天然植物中的化學(xué)抗癌物質(zhì)預(yù)防癌癥的發(fā)生和發(fā)展，已成為癌癥化學(xué)預(yù)防研究的一個重要領(lǐng)域，并受到世界各國科學(xué)界的普遍關(guān)注及研究熱點。
多發(fā)性骨髓瘤(mm)是一種惡性漿細胞病，其腫瘤細胞起源于骨髓中的漿細胞，而漿細胞是b淋巴細胞發(fā)育到最終功能階段的細胞。因此多發(fā)性骨髓瘤可以歸到b淋巴細胞淋巴瘤的范圍。多發(fā)性骨髓瘤常伴有多發(fā)性溶骨性損害、高鈣血癥、貧血、腎臟損害。由于正常免疫球蛋白的生成受抑，因此容易出現(xiàn)各種細菌性感染。
結(jié)直腸癌(coloncancer)的發(fā)病率在消化道惡性腫瘤中僅次于胃癌而位居第2位。結(jié)腸癌是常見的發(fā)生于結(jié)腸部位的消化道惡性腫瘤，好發(fā)于直腸與乙狀結(jié)腸交界處。結(jié)直腸癌在西方社會是癌癥相關(guān)死亡的第二大原因，在美國是第二大致死的原因。結(jié)腸癌主要為腺癌、黏液腺癌、未分化癌。目前結(jié)腸癌的主要治療方案為手術(shù)加化學(xué)藥物治療。
膀胱癌(bladdercarcinoma)是指發(fā)生在膀胱黏膜上的惡性腫瘤，是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，也是全身十大常見腫瘤之一。膀胱癌在我國泌尿生殖系腫瘤發(fā)病率位于第一位，而在西方其發(fā)病率僅次于前列腺癌，居第2位。在中國，膀胱癌為死亡率最高的10種腫瘤之一，男性膀胱癌發(fā)病率為女性的3～4倍，2005年男性發(fā)病率為4.0/10萬，女性為1.5/10萬。膀胱癌可發(fā)生于任何年齡，且隨年齡增長而增加。
嚏根草苷元(hellebrigenin)是從中華蟾蜍(bufogargarizans)皮水提物中分離得到的。已有研究報道，嚏根草苷元具有抗多發(fā)性骨髓瘤的作用，本發(fā)明對嚏根草苷元進行深入研究，合成得到具有抗腫瘤活性的新強心苷化合物。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
發(fā)明目的：本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種具有強抗腫瘤活性的新的強心苷化合物及其在預(yù)防和治療腫瘤疾病中的用途。
技術(shù)方案：為了實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：
具有抗腫瘤活性的強心苷化合物，其結(jié)構(gòu)式如下：
其中r1是羧基，r2是羥基，為新的強心苷化合物，命名為hellebrigeninacid。
本發(fā)明提供的具有抗腫瘤活性的新強心苷化合物的合成方法包括以下步驟及其流程如下：
取0.3g嚏根草苷元于燒杯中，加入10ml70％乙醇溶液，振蕩溶解，得到溶液a；將a倒入裝有30ml銀氨溶液的燒瓶中，振蕩混勻后，置于水浴鍋內(nèi)并調(diào)節(jié)溫度至60℃，加熱5min，趁熱過濾，得到濾液b；用鹽酸調(diào)節(jié)b溶液ph值至5，充分攪拌，靜置沉淀，過濾，沉淀用重蒸水洗滌多次，干燥即得所需的強心苷化合物。
所述的銀氨溶液的制備方法為：先加入2％的硝酸銀溶液，然后加入5％氫氧化鈉水溶液至ph10，振蕩試管，出現(xiàn)白色沉淀，再逐滴滴入1％的稀氨水，直到最初產(chǎn)生的沉淀恰好溶解為止。
以本發(fā)明提供的具有抗腫瘤活性的強心苷化合物，將強心苷化合物(hellebrigeninacid)和藥學(xué)上可接受的載體制備成片劑、膠囊劑、注射劑、粉針劑、顆粒劑、脂肪乳劑、微囊、滴丸、軟膏劑或透皮控釋貼劑等劑型。
將本發(fā)明提供的強心苷化合物制成片劑時，把強心苷化合物和乳糖或玉米淀粉，需要時加入潤滑劑硬脂酸鎂，混合均勻，整粒，然后壓片制成片劑。
本發(fā)明提供的強心苷化合物制成膠囊劑時把強心苷化合物和載體乳糖或玉米淀粉混合均勻，整粒，然后裝膠囊制成膠囊劑。
本發(fā)明提供的強心苷化合物制成顆粒劑時，把強心苷化合物和稀釋劑乳糖或玉米淀粉、混合均勻，整粒，干燥，制成顆粒劑。
本發(fā)明提供的強心苷化合物制成粉針劑、注射液時加入載體按藥學(xué)常規(guī)方法制備得到。
本發(fā)明提供的強心苷化合物制成脂肪乳劑、軟膏劑或透皮控釋貼劑等劑型時加入載體按藥學(xué)常規(guī)方法制備得到。
本發(fā)明提供的的具有抗腫瘤活性的強心苷化合物(hellebrigeninacid)在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
作為優(yōu)選方案，本發(fā)明提供的具有抗腫瘤活性的強心苷化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，所述的腫瘤為多發(fā)性骨髓瘤、結(jié)腸癌、膀胱癌等。
有益效果：本發(fā)明提供的具有抗腫瘤活性的強心苷化合物和現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點：
本發(fā)明通過對蟾蜍化學(xué)成分進行系統(tǒng)深入研究，化學(xué)合成得到強心苷化合物(hellebrigeninacid)，為新化合物。且經(jīng)過體外抗腫瘤活性研究表明，本發(fā)明提供的強心苷化合物對多發(fā)性骨髓瘤、結(jié)腸癌及膀胱癌等具有很強的抗腫瘤活性，是一種優(yōu)良的抗腫瘤新化合物，可開發(fā)成新的抗腫瘤藥物。
附圖說明
圖1為強心苷化合物hellebrigeninacid的結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實施方式
根據(jù)下述實施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實施例所描述的具體的工藝條件及其結(jié)果僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會限制權(quán)利要求書中所詳細描述的本發(fā)明。
實施例1強心苷化合物的制備
取0.3g嚏根草苷元于燒杯中，加入10ml70％乙醇溶液，振蕩溶解，得到溶液a；將a倒入裝有30ml銀氨溶液的燒瓶中，振蕩混勻后，置于水浴鍋內(nèi)并調(diào)節(jié)溫度至60℃，加熱5min，趁熱過濾，得到濾液b；用鹽酸調(diào)節(jié)b溶液ph值至5，充分攪拌，靜置沉淀，過濾，沉淀用重蒸水洗滌多次，干燥即得所需的強心苷化合物(hellebrigeninacid)，結(jié)構(gòu)式如圖1所示。
實施例2體外抗腫瘤試驗
1、抗人多發(fā)性骨髓瘤細胞株arp-1實驗
人多發(fā)性骨髓瘤細胞株arp-1用含10％小牛血清、100u/ml青霉素、0.1mg/ml鏈霉素的rpmi-1640培養(yǎng)基在37℃、5％co2培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。用0.25％胰酶加0.02％edta消化、傳代。取對數(shù)生長期細胞，經(jīng)胰酶消化后用含10％小牛血清的rpmi-1640培養(yǎng)液制備細胞懸浮液，細胞濃度約為1×105個/ml，接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔180μl；本發(fā)明實施例1制備得到的新化合物hellebrigeninacid(結(jié)構(gòu)如圖1、下同)分別設(shè)1μg/ml，2μg/ml，5μg/ml，10μg/ml，20μg/ml，40μg/ml6個濃度，每孔再分別加入20μl二甲亞砜，每組設(shè)4個復(fù)孔，置37℃、5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h后，每孔加入10μlwst-8溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4h后，使用el-x800酶標儀在λ＝450nm下測熒光值。以加入不含細胞的培養(yǎng)基的孔作空白值，以陰性對照組的孔作對照值。按照公式計算藥物抑制(％)＝(對照組熒光值—試驗組熒光值)/(對照組熒光值—空白組熒光值)×100％。
實驗結(jié)果：化合物hellebrigeninacid的3nm，7.8nm，15nm，31.25nm，62.5nm，125nm，250nm7個濃度對人多發(fā)性骨髓瘤細胞株arp-1的抑制率分別為26.73％，48.54％，57.71％，59.85％，72.08％，83.19％，83.68％。計算hellebrigeninacid抑制人多發(fā)性骨髓瘤細胞株arp-1的ic50為12nm。
實驗結(jié)果表明本發(fā)明分離得到的新化合物hellebrigeninacid對人多發(fā)性骨髓瘤具有很好的抑制作用。并優(yōu)于嚏根草苷元活性。
2、抗人結(jié)腸癌細胞sw620實驗
人結(jié)腸癌細胞sw620用含10％小牛血清、100u/ml青霉素、0.1mg/ml鏈霉素的rpmi-1640培養(yǎng)基在37℃、5％co2培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。用0.25％胰酶加0.02％edta消化、傳代。取對數(shù)生長期細胞，經(jīng)胰酶消化后用含10％小牛血清的rpmi-1640培養(yǎng)液制備細胞懸浮液，細胞濃度約為1×105個/ml，接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔180μl；本發(fā)明提供的新化合物hellebrigeninacid分別設(shè)0.1047mm，0.2094mm，0.4188mm，0.8375mm，1.6750mm，3.3500mm6個濃度，每孔再分別加入20μl二甲亞砜，每組設(shè)4個復(fù)孔，置37℃、5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h后，每孔加入10μlwst-8溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4h后，使用el-x800酶標儀在λ＝450nm下測熒光值。以加入不含細胞的培養(yǎng)基的孔作空白值，以陰性對照組的孔作對照值。按照公式計算藥物抑制(％)＝(對照組熒光值—試驗組熒光值)/(對照組熒光值—空白組熒光值)×100％。
實驗結(jié)果：化合物hellebrigeninacid的0.1047mm，0.2094mm，0.4188mm，0.8375mm，1.6750mm，3.3500mm6個濃度對人結(jié)腸癌細胞的抑制率分別為18.93％，29.71％，41.29％，51.25％，67.36％，76.43％。計算hellebrigeninacid抑制sw620腫瘤細胞株的ic50為0.694mm。
實驗結(jié)果表明本發(fā)明分離得到的新化合物hellebrigeninacid對人結(jié)腸癌細胞具有很好的抑制作用。并優(yōu)于嚏根草苷元活性。
3、抗人膀胱癌細胞t24實驗
人膀胱癌細胞t24用含10％小牛血清、100u/ml青霉素、0.1mg/ml鏈霉素的rpmi-1640培養(yǎng)基在37℃、5％co2培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。用0.25％胰酶加0.02％edta消化、傳代。取對數(shù)生長期細胞，經(jīng)胰酶消化后用含10％小牛血清的dmem培養(yǎng)液制備細胞懸浮液，細胞濃度約為1×105個/ml，接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔180μl；本發(fā)明提供的新化合物hellebrigeninacid分別設(shè)0.011mm，0.11mm，1.1mm，3.35mm，6.7mm，13.4mm6個濃度，每孔20μl，每組設(shè)4個復(fù)孔，置37℃、5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h后，每孔加入10μlmtt溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4h后，每孔再分別加入150μl二甲亞砜，使用el-x800酶標儀在λ＝490nm下測熒光值。以加入不含細胞的培養(yǎng)基的孔作空白值，以陰性對照組的孔作對照值。按照公式計算藥物抑制(％)＝(對照組熒光值—試驗組熒光值)/(對照組熒光值—空白組熒光值)×100％。
實驗結(jié)果：化合物hellebrigeninacid的0.011mm，0.11mm，1.1mm，3.35mm，6.7mm，13.4mm6個濃度對人膀胱癌細胞的抑制率分別為8.28％，16.00％，28.88％，48.81％，69.39％，73.50％。計算hellebrigeninacid抑制t24腫瘤細胞株的ic50為2.402mm。
實驗結(jié)果表明本發(fā)明分離得到的新化合物hellebrigeninacid對人膀胱癌細胞具有很好的抑制作用。
實施例3片劑的制備
取上述實施例1制備得到的hellebrigeninacid加藥用輔料淀粉、硬脂酸鎂等適量，充分混勻后，壓片，制成片劑口服使用。
實施例4膠囊劑的制備
取上述實施例1制備得到的hellebrigeninacid加藥用輔料淀粉適量，充分混勻后，裝入膠囊，制成膠囊劑口服使用。
以上實施方式只為說明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思及特點，其目的在于讓熟悉此項技術(shù)的人了解
本發(fā)明內(nèi)容并加以實施，并不能以此限制本發(fā)明的保護范圍，凡根據(jù)本發(fā)明精神實質(zhì)所做的等效變化或修飾，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。