本發(fā)明涉及一種微生物多糖小核菌多糖高效提取純化方法與應(yīng)用，屬于微生物多糖制備技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
小核菌多糖(Scleroglucan)又稱硬葡聚糖或小核菌膠，是一種由絲狀真菌小核菌合成分泌的一種水溶性非離子胞外多糖，水溶液具有良好的流變特性和穩(wěn)定性。硬葡聚糖分子是由含有β-D-(1,6)-葡萄糖殘基側(cè)鏈的線性β-D-(1,3)-葡萄糖殘基鏈組成，分子量約5～6×106Da，分子以棒狀三螺旋形式存在，具有半剛性。硬葡聚糖水溶液具有耐高溫(可達(dá)120℃)、耐高鹽(最高可達(dá)20,0000mg/L)、耐酸堿(pH2～12范圍內(nèi)穩(wěn)定)、抗高剪切、持水性好并且環(huán)境友好等諸多突出特性。因此硬葡聚糖在食品、醫(yī)藥、化妝品、石油等工業(yè)領(lǐng)域具有良好的應(yīng)用價值。目前在國際市場中，硬葡聚糖作為保濕、抗炎、增稠成分普遍應(yīng)用在化妝品中，常被國際知名化妝品品牌所采用。硬葡聚糖還能夠提高原油采收率，在當(dāng)前普遍進(jìn)入三次采油的趨勢下，其具有廣闊的應(yīng)用前景。研究報道表明硬葡聚糖在所試的140多種聚合物中耐溫性能最好，同時具有良好的耐鹽性和抗剪切性，可用作增稠劑、懸浮劑、穩(wěn)定劑等，在油田鉆采助劑領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。
由于硬葡聚糖分子在水溶液中形成穩(wěn)定的三螺旋結(jié)構(gòu)，且生產(chǎn)菌為絲狀真菌，因此在硬葡聚糖大量產(chǎn)生后，在發(fā)酵液中形成非常穩(wěn)定的微凝膠或超分子結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)嚴(yán)重影響了硬葡聚糖發(fā)酵產(chǎn)量的進(jìn)一步提高和后提取純化?；谝陨想y題，目前在硬葡聚糖發(fā)酵生產(chǎn)過程中，多采用直接乙醇沉淀提取產(chǎn)生含有菌絲體的硬葡聚糖粗品或采用高溫高剪切破壞微凝膠等高耗能技術(shù)進(jìn)行除菌提純的硬葡聚糖精品。此外，專利CN102154408A也報道了在硬葡聚糖發(fā)酵生產(chǎn)早期濃度較低時即進(jìn)行在線膜分離提取的技術(shù)路線，但工藝過程復(fù)雜，生產(chǎn)成本居高不下。還有一些采用生物酶解預(yù)處理方法提純硬葡聚糖，生物酶類物質(zhì)成本高，并且需要控制酶反應(yīng)溫度，反應(yīng)時間較長，特別是處理小核菌多糖高粘溶液，反應(yīng)混合時間更長，而且引入了酶類雜質(zhì)，成本較高，這些條件并不利于工業(yè)生產(chǎn)?，F(xiàn)有技術(shù)中的提純方法都影響了硬葡聚糖產(chǎn)業(yè)和市場應(yīng)用的發(fā)展。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明根據(jù)以上技術(shù)缺陷結(jié)合硬葡聚糖分子的理化性質(zhì)，通過大量研究實驗開發(fā)出高效硬葡聚糖提取純化的工業(yè)制備技術(shù)，以簡單低成本的技術(shù)工藝進(jìn)行硬葡聚糖除菌獲得高純度高品質(zhì)的硬葡聚糖產(chǎn)品。
本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
本發(fā)明的第一個目的是提供了一種高純度高品質(zhì)硬葡聚糖產(chǎn)品的制備方法，包括以下步驟：
(1)以含菌絲體的硬葡聚糖粗品或者高濃度硬葡聚糖發(fā)酵液原料，將其稀釋堿溶后進(jìn)行微波強化溶解；
(2)將步驟(1)中所得硬葡聚糖溶液進(jìn)行固液分離，除去不溶性菌絲體，并采用水洗滌所得菌絲體，所得洗滌液合并入硬葡聚糖溶液；
(3)中和除菌后的硬葡聚糖溶液；
(4)采用超濾膜處理中和除菌后的硬葡聚糖溶液，脫鹽并濃縮，用水洗滌硬葡聚糖濃縮液并繼續(xù)脫鹽；
(5)采用乙醇沉淀硬葡聚糖并洗滌，干燥后獲得高純硬葡聚糖產(chǎn)品。
本發(fā)明中，所述高純度是指所述產(chǎn)品中的硬葡聚糖的純度大于等于90％，或者大于等于92％、93％、95％，優(yōu)選的為等于92.8％、93.5％、95.5％等。
本發(fā)明中，所述高品質(zhì)是指所述產(chǎn)品的粘度高，其1％(w/v)溶液的粘度在1200mPa.s以上(美國Brookfield DV2T：3#轉(zhuǎn)子，60r/min，25℃測定)。
步驟(1)中，含菌絲體的硬葡聚糖粗品的純度為40～70％，含菌絲體的硬葡聚糖粗品可以由現(xiàn)有技術(shù)中的多種方法制備得到，屬于常規(guī)技術(shù)手段；含菌絲體的硬葡聚糖粗品或者高濃度硬葡聚糖發(fā)酵液可以由現(xiàn)有技術(shù)中的多種方法制備得到，屬于常規(guī)技術(shù)手段。
優(yōu)選的，所述高濃度硬葡聚糖發(fā)酵液中葡聚糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5％(w/v)及其以上，優(yōu)選為2.5～5％(w/v)，當(dāng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于等于2.5％(w/v)時，發(fā)酵液中含有顯著微凝膠顆粒。
硬葡聚糖的分子結(jié)構(gòu)有一定的剛性，在水溶液中有很強的聚集傾向，易發(fā)生超分子結(jié)構(gòu)，產(chǎn)生微凝膠，嚴(yán)重影響了硬葡聚糖發(fā)酵產(chǎn)量的進(jìn)一步提高和后提取純化。
所述稀釋堿溶的具體步驟為：向含菌絲體的硬葡聚糖粗品或者高濃度硬葡聚糖發(fā)酵液中加入堿溶液，使得堿終濃度為0.05～0.35mol/L，硬葡聚糖濃度為0.8～1.2％(w/v)。優(yōu)選的堿是NaOH或KOH。
加入堿對含菌絲體的硬葡聚糖粗品或者高濃度硬葡聚糖發(fā)酵液進(jìn)行物理稀釋和溶解，使得硬葡聚糖的粘度降低，降低原理是在一定pH范圍下，破壞了硬葡聚糖大分子之間的氫鍵，而選擇堿終濃度的原則是：在降低粘度的同時還需保證所得產(chǎn)品具有較高品質(zhì)。經(jīng)過試驗驗證，本發(fā)明選擇堿終濃度為0.05～0.35mol/L，硬葡聚糖濃度為0.8～1.2％(w/v)，確保了產(chǎn)品的高純度和高品質(zhì)。
在提高產(chǎn)品純度和收率上，本發(fā)明采用了微波強化溶解，一方面，微波輻射能穿透稀釋堿溶后的硬葡聚糖溶液，達(dá)到物料內(nèi)部，物料吸收微波能，內(nèi)部溫度迅速上升，增大被分離物質(zhì)在介質(zhì)中的溶解度，使硬葡聚糖分子形成的三螺旋結(jié)構(gòu)完全破壞而溶于水，從而使菌體可易于分離。另一方面，微波能夠透射到生物組織內(nèi)部使偶極分子和蛋白質(zhì)的極性側(cè)鏈以極高的頻率振蕩，引起分子的電磁振蕩等作用，加之稀釋堿溶的作用下，能夠降解破壞溶液中的雜蛋白，使其降解為小分子多肽，以更有利于后續(xù)醇沉的操作，在醇沉過程中，小分子多肽不會被絮凝沉淀。另外，稀釋堿溶后的硬葡聚糖溶液中含有菌絲體，菌絲體吸收微波能，細(xì)胞內(nèi)部溫度迅速上升，使細(xì)胞內(nèi)部壓力超過細(xì)胞壁膨脹承受能力，細(xì)胞破裂，使菌絲體內(nèi)的硬葡聚糖溶出，既殺滅了菌體提高產(chǎn)品品質(zhì)又增加了硬葡聚糖的收率。綜上，稀釋堿溶以及微波強化溶解兩個操作具有協(xié)同作用，是本發(fā)明的關(guān)鍵技術(shù)之一。從綜合效果考慮，本發(fā)明選取了合適的微波強化溶解工藝參數(shù)：微波頻率為900～1500MHz，處理2～5次，間隔2～5min，每次5～20s。采用間歇式的微波強化溶解工藝參數(shù)，能夠提高溶解的效率，降低能耗。采用該工藝參數(shù)，具有較為出乎意料的技術(shù)效果，純度和收率都比較高，在本發(fā)明的一個具體實施例中，可高達(dá)95.5％。
優(yōu)選的，所述微波頻率為1250～1500MHz，處理2～3次，間隔4～5min，每次10～20s。
步驟(2)中，采用板框過濾或離心分離除去不溶性菌絲體。
優(yōu)選的，板框過濾的濾布孔徑是150～300目。
優(yōu)選的，離心分離條件是5000～8000g，離心15～30min。
步驟(3)中，優(yōu)選的，采用稀鹽酸或稀硫酸中和硬葡聚糖溶液，為不破壞硬葡聚糖分子的結(jié)構(gòu)，進(jìn)一步優(yōu)選的，[H+]濃度為0.25～1.0mol/L。
步驟(4)中，采用超濾膜處理中和除菌后的硬葡聚糖溶液，優(yōu)選的，超濾膜截留分子量范圍是50000～200000Da，并控制溫度在45℃以下；優(yōu)選的，采用目的硬葡聚糖溶液體積2～4倍體積的蒸餾水對濃縮液進(jìn)行洗滌，并控制溫度在45℃以下；優(yōu)選的，硬葡聚糖溶液濃縮液中硬葡聚糖含量為1.0～1.5％(w/v)，此濃度更有利于醇沉除雜。
步驟(5)中，優(yōu)選的，所述乙醇的體積分?jǐn)?shù)為60～85％(v/v)，處理時間為30～60min。經(jīng)過試驗驗證，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為60～85％(v/v)，使得硬葡聚糖產(chǎn)品的純度較高。
處理結(jié)束后，采用5000～8000g離心5-15min后，得沉淀再采用體積分?jǐn)?shù)為90～95％(v/v)乙醇溶液洗滌兩次，5000～8000g離心5-10min后所得沉淀即為目標(biāo)硬葡聚糖產(chǎn)物。
得到目標(biāo)硬葡聚糖產(chǎn)物后，進(jìn)行恒溫干燥，優(yōu)選的，干燥溫度為60～80℃，干燥時間為60～180min，即獲得高純度高品質(zhì)硬葡聚糖產(chǎn)品。
本發(fā)明的第二個目的是提供一種采用上述方法制備得到的高純度高品質(zhì)硬葡聚糖產(chǎn)品，其中，所述硬葡聚糖產(chǎn)品純度在90％以上，其質(zhì)量濃度為1％(w/v)溶液的粘度為1200mPa.s及其以上(美國Brookfield DV2T：3#轉(zhuǎn)子，60r/min，25℃測定)。
質(zhì)量濃度為1％(w/v)溶液是指將硬葡聚糖產(chǎn)品配制成硬葡聚糖的水溶液，其中硬葡聚糖的含量為1％。
初始發(fā)酵液中含有1％(w/v)的硬葡聚糖或采用粗品制備得到的1％(w/v)的硬聚糖水溶液時，其粘度只有300～400mPa.s，現(xiàn)有技術(shù)中的硬葡聚糖產(chǎn)品的粘度為800～1000mPa.s(美國Brookfield DV2T：3#轉(zhuǎn)子，60r/min，25℃測定)，而采用本發(fā)明的方法制備得到的硬葡聚糖產(chǎn)品的粘度高達(dá)1200mPa.s及其以上，與現(xiàn)有技術(shù)中的粘度相比兩者具有顯著差異。
上述技術(shù)方案具有如下有益效果：
(1)本發(fā)明提供了一套低成本高效提取純化硬葡聚糖的工業(yè)制備技術(shù)，所得硬葡聚糖產(chǎn)品純度高，品質(zhì)好，其顯著優(yōu)于現(xiàn)有市場產(chǎn)品；
(2)通過本發(fā)明一系列的物理方法處理(堿溶無化學(xué)反應(yīng)屬于物理溶解過程)，建立了一條穩(wěn)定高效的硬葡聚糖制備工藝，不需要進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，減少了成品中的雜質(zhì)組分，所得目標(biāo)產(chǎn)品硬葡聚糖產(chǎn)品純度高達(dá)90％以上，能夠?qū)崿F(xiàn)大規(guī)模的工業(yè)生產(chǎn)；
(3)目標(biāo)產(chǎn)品高純硬葡聚糖產(chǎn)品的收率高達(dá)到85％以上；
(4)本發(fā)明的技術(shù)步驟為不引入任何化學(xué)或有害其他雜質(zhì)，確保的所得產(chǎn)品的生物安全；
(5)相比于酶法提純硬葡聚糖，本發(fā)明高純硬葡聚糖產(chǎn)品的生產(chǎn)周期較短，不需要長時間控制反應(yīng)溫度，降低成本，適合大規(guī)模推廣使用。
具體實施方式
應(yīng)該指出，以下詳細(xì)說明都是示例性的，旨在對本發(fā)明提供進(jìn)一步的說明。除非另有指明，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的相同含義。
需要注意的是，這里所使用的術(shù)語僅是為了描述具體實施方式，而非意圖限制根據(jù)本發(fā)明的示例性實施方式。如在這里所使用的，除非上下文另外明確指出，否則單數(shù)形式也意圖包括復(fù)數(shù)形式，此外，還應(yīng)當(dāng)理解的是，當(dāng)在本說明書中使用術(shù)語“包含”和/或“包括”時，其指明存在特征、步驟、操作和/或它們的組合。
本發(fā)明中，產(chǎn)品收率(％)＝本發(fā)明硬葡聚糖產(chǎn)品的質(zhì)量/原料中硬葡聚糖的質(zhì)量×100％。
實施例1
一種高效的高純度硬葡聚糖產(chǎn)品提取純化的具體工藝步驟內(nèi)容如下：
(1)原料：硬葡聚糖粗品，純度為50～60％；
(2)堿溶：硬葡聚糖終濃度0.8％(w/v)，NaOH的終濃度為0.1mol/L；
(3)微波強制溶解，微波頻率在900MHz，處理2次，間隔3min，每次15s；
(4)固液分離；將步驟(3)中完全溶解的硬葡聚糖溶液進(jìn)行板框過濾，濾布孔徑200目，并用1～2倍體積的蒸餾水洗滌濾餅，所得洗液合并入濾液；
(5)中和：采用[H+]為0.5mol/L的鹽酸中和(4)中所得硬葡聚糖溶液；
(6)超濾脫鹽濃縮：將步驟(5)中獲得的硬葡聚糖中和溶液進(jìn)行超濾脫鹽并濃縮，超濾膜膜截留分子量范圍是100000Da，并控制溫度在45℃以下，采用硬葡聚糖溶液體積2倍體積的蒸餾水對超濾濃縮的硬葡聚糖溶液進(jìn)行洗滌，并控制溫度在45℃以下，硬葡聚糖濃縮液中硬葡聚糖的含量是1.2％(w/v)；
(7)乙醇沉淀，向步驟(6)中所得硬葡聚糖濃縮液中加入一定體積的乙醇，沉淀硬葡聚糖，乙醇體積分?jǐn)?shù)為65％(v/v)，8000g離心15min后，得沉淀再采用體積分?jǐn)?shù)為90％(v/v)乙醇溶液洗滌兩次，8000g離心10min后所得沉淀即為硬葡聚糖產(chǎn)物；
(8)干燥，將步驟(7)中所得沉淀進(jìn)行恒溫干燥，溫度為70℃，干燥時間90min，即獲得了目的高純度硬葡聚糖產(chǎn)品。
經(jīng)檢測，該硬葡聚糖產(chǎn)品的純度為93.5％，產(chǎn)品收率為88％，1％(w/v)溶液粘度為1380mPa.s(美國Brookfield DV2T：3#轉(zhuǎn)子，60r/min，25℃測定)。
實施例2
一種高效的高純度硬葡聚糖產(chǎn)品提取純化的具體工藝步驟內(nèi)容如下：
(1)原料：高含量硬葡聚糖發(fā)酵液，硬葡聚糖含量2.5％(w/v)；
(2)堿溶：硬葡聚糖終濃度1.0％(w/v)，KOH的終濃度為0.25mol/L；
(3)微波強制溶解，微波頻率在1250MHz，處理3次，間隔4min，每次20s；
(4)固液分離；將步驟(3)中完全溶解的硬葡聚糖溶液進(jìn)行板框過濾，濾布孔徑180目，并用1～2倍體積的蒸餾水洗滌濾餅，所得洗液合并入濾液；
(5)中和：采用[H+]為0.8mol/L的硫酸中和(4)中所得硬葡聚糖溶液；
(6)超濾脫鹽濃縮：將步驟(5)中獲得的硬葡聚糖中和溶液進(jìn)行超濾脫鹽并濃縮，超濾膜膜截留分子量范圍是200000Da，并控制溫度在45℃以下，采用硬葡聚糖溶液體積2倍體積的蒸餾水對超濾濃縮的硬葡聚糖溶液進(jìn)行洗滌，并控制溫度在45℃以下，硬葡聚糖濃縮液中硬葡聚糖的含量是1.35％(w/v)；
(7)乙醇沉淀，向步驟(6)中所得硬葡聚糖濃縮液中加入一定體積的乙醇，沉淀硬葡聚糖，乙醇體積分?jǐn)?shù)為70％(v/v)，6000g離心15min后，得沉淀再采用體積分?jǐn)?shù)為90％(v/v)乙醇溶液洗滌兩次，6000g離心10min后所得沉淀即為硬葡聚糖產(chǎn)物；
(8)干燥，將步驟(7)中所得沉淀進(jìn)行恒溫干燥，溫度為75℃，干燥時間90min，即獲得了目的高純度硬葡聚糖產(chǎn)品。
經(jīng)檢測，該硬葡聚糖產(chǎn)品的純度為92.8％，產(chǎn)品收率為86.7％，1％(w/v)溶液粘度為1260mPa.s(美國Brookfield DV2T：3#轉(zhuǎn)子，60r/min，25℃測定)。
實施例3
一種高效的高純度硬葡聚糖產(chǎn)品提取純化的具體工藝步驟內(nèi)容如下：
(1)原料：高含量硬葡聚糖發(fā)酵液，硬葡聚糖含量3.2％(w/v)；
(2)堿溶：硬葡聚糖終濃度1.2％(w/v)，NaOH的終濃度為0.35mol/L；
(3)微波強制溶解，微波頻率在1500MHz，處理3次，間隔5min，每次10s；
(4)固液分離；將步驟(3)中完全溶解的硬葡聚糖溶液進(jìn)行離心分離，條件為6000g，離心20min，并用1～2倍體積的蒸餾水洗滌沉淀，所得上清液合并入濾液；
(5)中和：采用[H+]為1.0mol/L的鹽酸中和(4)中所得硬葡聚糖溶液；
(6)超濾脫鹽濃縮：將步驟(5)中獲得的硬葡聚糖中和溶液進(jìn)行超濾脫鹽并濃縮，超濾膜膜截留分子量范圍是80000Da，并控制溫度在45℃以下，采用硬葡聚糖溶液體積2倍體積的蒸餾水對超濾濃縮的硬葡聚糖溶液進(jìn)行洗滌，并控制溫度在45℃以下，硬葡聚糖濃縮液中硬葡聚糖的含量是1.5％(w/v)；
(7)乙醇沉淀，向步驟(6)中所得硬葡聚糖濃縮液中加入一定體積的乙醇，沉淀硬葡聚糖，乙醇體積分?jǐn)?shù)為68％(v/v)，7000g離心15min后，得沉淀再采用體積分?jǐn)?shù)為90％(v/v)乙醇溶液洗滌兩次，7000g離心10min后所得沉淀即為硬葡聚糖產(chǎn)物；
(8)干燥，將步驟(7)中所得沉淀進(jìn)行恒溫干燥，溫度為80℃，干燥時間90min，即獲得了目的高純度硬葡聚糖產(chǎn)品。
經(jīng)檢測，該硬葡聚糖產(chǎn)品的純度為95.5％，產(chǎn)品收率為86％，1％(w/v)溶液粘度為1420mPa.s(美國Brookfield DV2T：3#轉(zhuǎn)子，60r/min，25℃測定)。
對比例1
一種高效的高純度硬葡聚糖產(chǎn)品提取純化的具體工藝步驟內(nèi)容如下：
(1)原料：高含量硬葡聚糖發(fā)酵液，硬葡聚糖含量3.2％(w/v)；
(2)堿溶：硬葡聚糖終濃度1.2％(w/v)，NaOH的終濃度為0.35mol/L；
(3)固液分離；將步驟(2)中的硬葡聚糖溶液進(jìn)行離心分離，條件為6000g，離心20min，并用1～2倍體積的蒸餾水洗滌沉淀，所得上清液合并入濾液；
(4)中和：采用[H+]為1.0mol/L的鹽酸中和(3)中所得硬葡聚糖溶液；
(5)超濾脫鹽濃縮：將步驟(4)中獲得的硬葡聚糖中和溶液進(jìn)行超濾脫鹽并濃縮，超濾膜膜截留分子量范圍是80000Da，并控制溫度在45℃以下，采用硬葡聚糖溶液體積2倍體積的蒸餾水對超濾濃縮的硬葡聚糖溶液進(jìn)行洗滌，并控制溫度在45℃以下，硬葡聚糖濃縮液中硬葡聚糖的含量是1.5％(w/v)；
(6)乙醇沉淀，向步驟(5)中所得硬葡聚糖濃縮液中加入一定體積的乙醇，沉淀硬葡聚糖，乙醇體積分?jǐn)?shù)為68％(v/v)，7000g離心15min后，得沉淀再采用體積分?jǐn)?shù)為90％(v/v)乙醇溶液洗滌兩次，7000g離心10min后所得沉淀即為硬葡聚糖產(chǎn)物；
(7)干燥，將步驟(6)中所得沉淀進(jìn)行恒溫干燥，溫度為80℃，干燥時間90min，即獲得了目的高純度硬葡聚糖產(chǎn)品。
經(jīng)檢測，該硬葡聚糖產(chǎn)品的純度為83％，產(chǎn)品收率為65％，1％(w/v)溶液粘度為890mPa.s(美國Brookfield DV2T：3#轉(zhuǎn)子，60r/min，25℃測定)。
對比例2
一種高效的高純度硬葡聚糖產(chǎn)品提取純化的具體工藝步驟內(nèi)容如下：
(1)原料：高含量硬葡聚糖發(fā)酵液，硬葡聚糖含量3.2％(w/v)；
(2)堿溶：硬葡聚糖終濃度1.2％(w/v)，NaOH的終濃度為0.35mol/L；
(3)將步驟(2)中的溶液加熱到90℃，保溫60min；
(4)固液分離；將步驟(3)中的硬葡聚糖溶液進(jìn)行離心分離，條件為6000g，離心20min，并用1～2倍體積的蒸餾水洗滌沉淀，所得上清液合并入濾液；
(5)中和：采用[H+]為1.0mol/L的鹽酸中和(4)中所得硬葡聚糖溶液；
(6)超濾脫鹽濃縮：將步驟(5)中獲得的硬葡聚糖中和溶液進(jìn)行超濾脫鹽并濃縮，超濾膜膜截留分子量范圍是80000Da，并控制溫度在45℃以下，采用硬葡聚糖溶液體積2倍體積的蒸餾水對超濾濃縮的硬葡聚糖溶液進(jìn)行洗滌，并控制溫度在45℃以下，硬葡聚糖濃縮液中硬葡聚糖的含量是1.5％(w/v)；
(7)乙醇沉淀，向步驟(6)中所得硬葡聚糖濃縮液中加入一定體積的乙醇，沉淀硬葡聚糖，乙醇體積分?jǐn)?shù)為68％(v/v)，7000g離心15min后，得沉淀再采用體積分?jǐn)?shù)為90％(v/v)乙醇溶液洗滌兩次，7000g離心10min后所得沉淀即為硬葡聚糖產(chǎn)物；
(8)干燥，將步驟(7)中所得沉淀進(jìn)行恒溫干燥，溫度為80℃，干燥時間90min，即獲得了目的高純度硬葡聚糖產(chǎn)品。
經(jīng)檢測，該硬葡聚糖產(chǎn)品的純度為85％，產(chǎn)品收率為68％，1％(w/v)溶液粘度為910mPa.s(美國Brookfield DV2T：3#轉(zhuǎn)子，60r/min，25℃測定)。
結(jié)論：從以上實施例和對比例可以看出，稀釋堿溶和微波強化溶解聯(lián)合使用對提高硬葡聚糖產(chǎn)品的品質(zhì)和收率具有重要的影響。
上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。