本發(fā)明涉及藥物化學(xué)領(lǐng)域，涉及布雷菲德菌素a的4位修飾衍生物。具體涉及4-位呋咱類no供體取代的布雷菲德菌素a衍生物的制備方法及在制備抗腫瘤藥物中的用途。
背景技術(shù)：
：布雷菲德菌素a(brefeldina)是大環(huán)內(nèi)酯抗生素，具有廣泛的生物學(xué)活性，包括抗真菌、抗病毒和抗腫瘤等。美國(guó)國(guó)家腫瘤研究院(nci)的檢測(cè)數(shù)據(jù)顯示，brefeldina對(duì)60種腫瘤細(xì)胞系的平均gi50為40nm，其作用機(jī)制與高爾基體的分解有密切聯(lián)系。高爾基體可逆的分解導(dǎo)致蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)的中斷，進(jìn)而導(dǎo)致高爾基體蛋白質(zhì)重新分布進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。本發(fā)明以brefeldina為先導(dǎo)化合物，選擇呋咱氮氧化物作為no供體，通過連接基團(tuán)連接到brefeldina的4位上，設(shè)計(jì)并合成了通式為ⅰ和ⅱ的no供體型brefeldina衍生物。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：發(fā)明要解決的技術(shù)問題是尋找抗腫瘤活性好的no供體型brefeldina衍生物，并進(jìn)一步提供一種包含該衍生物的用于治療腫瘤及其它疾病或病癥的藥物組合物。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：通式ⅰ或ⅱ所示呋咱no供體型布雷菲德菌素a衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽：其中，m、n分別為1-8的整數(shù)。優(yōu)選地，m、n分別為1-4的整數(shù)。更優(yōu)選地，m、n分別為2或3。本發(fā)明優(yōu)選如下化合物：本發(fā)明通式ⅰ或ⅱ的衍生物可用下列方法制備得到：將苯硫酚(2)與氯乙酸在堿性條件下反應(yīng)得苯硫乙酸(3)，然后經(jīng)30％h2o2氧化生成苯磺酰乙酸(4)?；衔?在發(fā)煙hno3存在下加熱環(huán)合成3,4-二苯磺?；辉鄣趸?5)?；衔?的4-位苯磺酰基被乙二醇或丙二醇取代生成單苯磺?；辉鄣趸镱恘o供體化合物6a、6b，化合物6a或6b再與丁二酸酐、戊二酸酐或鄰苯二甲酸酐經(jīng)dmap，三乙胺催化反應(yīng)得到no供體7a-f。將布雷菲德菌素a的4,7-位羥基用tbs保護(hù)得化合物8，化合物8用tbaf脫去4-位tbs保護(hù)基得中間體9，中間體9與呋咱no供體7a-f在edci/dmap條件下縮合得化合物10a-f，化合物10a-f用tbaf脫去7-位tbs保護(hù)基得目標(biāo)化合物11a-f，柱層析石油醚：乙酸乙酯(v/v)為1:1至10:1得到單體化合物。實(shí)驗(yàn)設(shè)備與試劑儀器超凈工作臺(tái)(蘇凈集團(tuán)安泰公司)恒溫培養(yǎng)箱(thermoelectroncorporation)酶標(biāo)儀(bio-rad公司)倒置生物顯微鏡(重慶光學(xué)儀器廠)試劑細(xì)胞培養(yǎng)基rpmi-1640、f12、mem、dmem(高糖)(gibco公司)胎牛血清(杭州四季清有限公司)四甲基偶氮唑藍(lán)(mtt)(sigma公司產(chǎn)品)dmso(sigma公司)細(xì)胞株人肝癌細(xì)胞株bel-7402和hepg-2人結(jié)腸癌細(xì)胞株ht-29、人前列腺癌細(xì)胞株pc-3實(shí)驗(yàn)方法細(xì)胞抑制活性實(shí)驗(yàn)方法細(xì)胞在37℃、5％co2飽和濕度的培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。培養(yǎng)液為含10％熱滅活胎牛血清，青霉素100u/ml和鏈霉素100u/ml的rpmi1640細(xì)胞培養(yǎng)基。48h更換培養(yǎng)液，細(xì)胞貼壁后，用0.25％胰蛋白酶消化傳代。實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞均處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，臺(tái)盼藍(lán)拒染法表明細(xì)胞活力>95％。取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期狀態(tài)良好的細(xì)胞一瓶，加入消化液(0.125％胰蛋白酶+0.01％edta)消化，計(jì)數(shù)2～4×104cell/ml，制成細(xì)胞懸液接種于96孔板上，180μl/孔，置恒溫co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。換液，加入受試藥物，20μl/孔，培養(yǎng)72小時(shí)。將mtt加入96孔板中，20μl/孔，培養(yǎng)箱中孵育4小時(shí)。吸去上清液，加dmso，150μl/孔，平板搖床上震蕩10分鐘。用酶聯(lián)免疫監(jiān)測(cè)儀在波長(zhǎng)為570nm處測(cè)定每孔的吸光度，分別計(jì)算各濃度下的細(xì)胞抑制率。抑制率計(jì)算方法：藥敏孔相對(duì)od值＝藥敏孔絕對(duì)od值﹣空白對(duì)照孔絕對(duì)od值實(shí)驗(yàn)結(jié)果表1實(shí)施例對(duì)3種人類癌細(xì)胞株抗增殖活性的ic50值(nm)樣品pc-3ht-29hepg-2bel-7402實(shí)施例1116±6232±8514±1314±1實(shí)施例246±4282±22407±1747±2實(shí)施例3252±9788±26732±3132±1實(shí)施例495±65741±3721828±9328±3實(shí)施例5108±5401±19815±429±1實(shí)施例6153±11858±54616±3912±1藥理試驗(yàn)證明，本發(fā)明的部分布雷菲德菌素a衍生物具有更好的抗腫瘤作用，可以用于進(jìn)一步制備抗腫瘤藥物。實(shí)施例1將60gnaoh與480mlh2o配成的溶液倒入反應(yīng)瓶中，取苯硫酚(75ml,0.63mol)，而后加入氯乙酸(78g,0.825mol)，反應(yīng)液中有大量白色沉淀析出。加入6nhcl，得白色固體苯硫乙酸(3)。將3(20g,0.12mol)溶于90ml冰乙酸中，加入24.3ml30％h2o2，室溫?cái)嚢琛４磻?yīng)完全，加入發(fā)煙hno348ml。升溫反應(yīng)，4h后，有白色針狀晶體析出，過濾，干燥得3,4-二苯磺?；辉鄣趸?5)。將乙二醇(0.56ml,10mmol)和5(1g,2.7mmol)溶于10mlthf中，滴入30％naoh水溶液(0.5ml,3mmol)，反應(yīng)2h。傾入20mlh2o中，用乙酸乙酯(3×20ml)萃取，有機(jī)層合并后加飽和食鹽水洗一次，用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液濃縮、重結(jié)晶，得白色固體化合物6a。將化合物6a(202mg,0.71mmol)溶于10ml二氯甲烷中，加入丁二酸酐(111mg,1.11mmol)。依次加入催化量的dmap，三乙胺0.3ml，室溫?cái)嚢?h。待反應(yīng)結(jié)束后，無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液濃縮，硅膠柱層析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)，得到白色粉末狀固體7a。將布雷菲德菌素a(150.9mg,0.54mmol)溶于5ml無水二氯甲烷中，加入tbsotf(310μl,1.35mmol)和2,6-二甲基吡啶(189μl,1.62mmol)室溫?cái)嚢?h,用二氯甲烷(3×5ml)萃取，有機(jī)層合并后加飽和食鹽水洗一次，用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液濃縮，硅膠柱層析(正己烷：乙酸乙酯＝100:1)，得化合物8。將化合物8溶于5ml無水四氫呋喃中，加入tbaf(290μl,0.29mmol),冰浴下攪拌25h,用乙酸乙酯(3×5ml)萃取，有機(jī)層合并后加飽和食鹽水洗一次，用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液濃縮，硅膠柱層析(正己烷：乙酸乙酯＝10:1)，得化合物9。將化合物9溶于10ml無水二氯甲烷中，加入7a(32.8mg,0.08mmol)，edci(29.4mg,0.15mmol)，催化量的dmap，室溫?cái)嚢?2h。tlc監(jiān)測(cè)反應(yīng)，待反應(yīng)完全或不繼續(xù)進(jìn)行時(shí)，停止反應(yīng)。有機(jī)相用飽和食鹽水洗，再用無水硫酸鈉干燥、過濾、濃縮，硅膠柱層析(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)，得到化合物10a。將化合物10a溶于2ml無水四氫呋喃中，加入tbaf(193μl,0.193mmol),室溫?cái)嚢?5h,用乙酸乙酯(3×2ml)萃取，有機(jī)層合并后加飽和食鹽水洗一次，用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液濃縮，硅膠柱層析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)，得白色粉末狀固體11a，產(chǎn)率21.6％:mp.148-151℃；1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.72～8.09(5h,m,ar-h),7.23(1h,dt,j＝15.78hzand3.06hz,c3-h),5.71(1h,m,c11-h),5.62(1h,dt,j＝15.73hzand1.61hz,c2-h),5.22(2h,m,c4,c10-h),4.72(1h,m,c15-h),4.36～4.60(5h,m,oh,och2ch2o),4.06(1h,m,c7-h),2.59～2.73(4h,m,coch2ch2co),0.72～1.99(15h,m,c5,2c6,2c8,c9,2c12,2c13,2c14-h,ch3)；13c-nmr(400mhz,dmso-d6)δ171.86,171.00,164.98,158.69,148.43,136.70,136.17,131.59,130.16,130.00,129.81,128.74,128.36,117.00,110.48,76.38,71.26,70.35,69.23,61.70,54.92,49.03,42.93,42.84,33.38,31.38,28.51,27.22,26.39,20.61；hr-ms(esi,m+na)m/z:calcdforc30h36n2o12s:671.1881,found671.1881。實(shí)施例2參照實(shí)施例1的合成方法。黃色油狀物，產(chǎn)率8.4％；1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.72～8.01(5h,m,ar-h),7.24(1h,dd,j＝15.77hzand3.24hz,c3-h),5.70(1h,m,c11-h),5.58(1h,dd,j＝15.88hzand1.65hz,c2-h),5.19～5.23(2h,m,c4,c10-h),4.72(1h,m,c15-h),4.41～4.62(4h,t,j＝3.87hz,och2ch2o),4.54(1h,d,j＝3.39hz,oh),4.04(1h,m,c7-h),2.50(4h,m,coch2ch2ch2co),0.73～2.40(17h,m,c5,2c6,2c8,c9,2c12,2c13,2c14,coch2ch2ch2co,ch3)；13c-nmr(400mhz,dmso-d6)δ172.64,171.99,165.29,159.07,149.03,137.60,137.08,136.48,130.34,130.34,130.13,128.69,128.69,117.27,110.84,76.44,71.62,70.73,69.72,61.67,49.48,43.32,43.20,40.68,33.76,32.78,32.73,31.75,26.74,20.96,20.00；hr-ms(esi,m+na)m/z:calcdforc31h38n2o12s:685.2038,found685.2046。實(shí)施例3參照實(shí)施例1的合成方法。黃色油狀物，產(chǎn)率5.2％；1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.72～8.02(5h,m,ar-h),7.23(1h,dd,j＝15.76hzand3.09hz,c3-h),5.71(1h,m,c11-h),5.61(1h,dd,j＝15.83hzand1.60hz,c2-h),5.18～5.24(2h,m,c4,c10-h),4.71(1h,m,c15-h),4.57(1h,s,oh),4.15～4.45(4h,t,j＝6.09hz,och2ch2ch2o),4.03(1h,m,c7-h),2.59～2.73(4h,m,coch2ch2co),0.72～2.48(17h,m,c5,2c6,2c8,c9,2c12,2c13,2c14-h,och2ch2ch2o,ch3)；13c-nmr(400mhz,dmso-d6)δ172.38,171.45,165.33,159.14,148.79,137.54,137.09,136.51,130.38,130.38,130.15,128.72,128.72,117.35,110.89,76.72,71.60,70.72,68.62,60.89,49.43,43.31,43.20,40.63,33.75,31.75,28.93,28.93,27.76,26.76,20.96；hr-ms(esi,m+na)m/z:calcdforc31h38n2o12s:685.2038,found685.2039。實(shí)施例4參照實(shí)施例1的合成方法。白色粉末狀固體，產(chǎn)率23.4％:mp.55-60℃；1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.70～8.00(5h,m,ar-h),7.22(1h,dd,j＝15.80hzand3.26hz,c3-h),5.68(1h,m,c11-h),5.55(1h,dd,j＝15.77hzand1.62hz,c2-h),5.19(2h,m,c4,c10-h),4.69(1h,m,c15-h),4.52(1h,d,j＝3.65hz,oh),4.13～4.44(4h,t,j＝6.08hz,och2ch2ch2o),4.03(1h,m,c7-h),2.32～2.45(4h,m,coch2ch2ch2co),0.68～2.10(19h,m,c5,2c6,2c8,c9,2c12,2c13,2c14,och2ch2ch2o,coch2ch2ch2co,ch3)；13c-nmr(400mhz,dmso-d6)δ172.78,171.95,165.29,159.16,149.05,137.56,137.09,136.51,130.38,130.38,130.14,128.72,128.72,117.25,110.88,76.42,71.62,70.73,68.62,60.62,49.50,43.32,43.20,40.69,33.76,32.83,32.79,31.75,27.76,26.74,20.97,20.28；hr-ms(esi,m+na)m/z:calcdforc32h40n2o12s:699.2194,found699.2196。實(shí)施例5參照實(shí)施例1的合成方法。黃色油狀物，產(chǎn)率5.1％；1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.51～7.95(9h,m,ar-h),7.26(1h,dd,j＝15.89hzand3.42hz,c3-h),5.71(1h,m,c11-h),5.55(1h,dd,j＝15.81hzand1.69hz,c2-h),5.42(1h,dq,j＝10.57hzand1.78hz,c10-h),5.24(1h,dd,j＝15.17hzand9.76hz),4.59～4.73(5h,m,c15-h,och2ch2o),4.55(1h,d,j＝3.55hz,oh),4.08(1h,m,c7-h),0.76～2.56(15h,m,c5,2c6,2c8,c9,2c12,2c13,2c14-h,ch3)；13c-nmr(400mhz,dmso-d6)δ167.16,165.73,165.16,159.06,148.26,137.56,137.06,136.32,132.51,132.27,132.03,130.96,130.39,130.12,130.12,128.66,128.66,128.66,128.66,117.61,110.76,78.08,71.69,70.78,69.36,63.05,49.70,43.36,43.16,40.73,33.80,31.78,26.65,20.91；hr-ms(esi,m+na)m/z:calcdforc34h36n2o12s:719.1881,found719.1862。實(shí)施例6參照實(shí)施例1的合成方法。黃色油狀物，產(chǎn)率8.9％；1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.70～8.02(9h,m,ar-h),7.27(1h,dd,j＝15.77hzand3.44hz,c3-h),5.71(1h,m,c11-h),5.66(1h,dd,j＝15.76hzand1.70hz,c2-h),5.38(1h,m,c10-h),5.25(1h,dd,j＝15.23hzand9.76hz,c4-h),4.74(1h,m,c15-h),4.55(1h,d,j＝3.54hz,oh),4.37～4.49(4h,t,j＝6.15hz,och2ch2ch2o),4.09(1h,m,c7-h),0.75～2.57(17h,m,c5,2c6,2c8,c9,2c12,2c13,2c14-h,och2ch2ch2o,ch3)；13c-nmr(400mhz,dmso-d6)δ167.48,165.72,165.24,159.20,148.26,137.51,137.06,136.51,132.57,131.97,130.58,130.36,130.36,130.20,129.32,129.18,129.04,128.73,128.73,117.75,110.92,78.02,71.71,70.77,68.54,62.09,49.71,43.41,43.16,40.76,38.46,33.80,28.74,27.58,20.93；hr-ms(esi,m+na)m/z:calcdforc35h38n2o12s:733.2038,found733.2048。當(dāng)前第1頁12