本發(fā)明涉及舒洛地特原料藥的制備方法，尤其涉及從肝素鈉副產(chǎn)物分離提取舒洛地特原料藥的方法，屬于生物制藥領域。

背景技術(shù)：

舒洛地特商品名稱為：偉素(VESSEL DUE F)，英文名稱：Sulodexide，化學名稱：葡糖醛酸基葡糖胺聚糖硫酸鹽。舒洛地特制劑有膠囊和注射液兩種劑型，舒洛地特對動脈和靜脈都有較強的抗血栓作用，是目前唯一上市的可口服糖胺聚糖類抗凝血藥，其原研企業(yè)為意大利阿爾法韋士曼制藥公司。

舒洛地特來源于豬小腸粘膜，屬于多組分藥物，含有72~88%硫酸乙酰肝素(HS or FM-H)、12~28%硫酸皮膚素(DS)和不大于4%的慢移動肝素(SM-H)。HS在生物體內(nèi)以蛋白聚糖的形式生物合成，HS的一級結(jié)構(gòu)與肝素明顯不同，HS中GlcA/ IdoA和GlcNAc/ GlcNS的比值較高，硫酸化程度相對較低。HS的結(jié)構(gòu)域由重復的GlcA-(1→4)- GlcNAc二糖及高度硫酸化的肝素樣IdoA(2S)-(1→4)- GlcNS(6S)二糖組成，能夠親和抗凝血酶Ⅲ。DS是一種以(1→3)-β-D-GalNAc(4S)- (1→4)-α-L-Ido 為特征性重復單位的多糖，能夠親和肝素輔因子Ⅱ。因此，舒洛地特具有抗血栓、抗凝、抗心血管疾病、降血脂等多種生物活性。

由粗品肝素經(jīng)離子交換、分級沉淀生產(chǎn)精品肝素的過程中，產(chǎn)生大量含有硫酸皮膚素、硫酸軟骨素、硫酸乙酰肝素、小分子肝素等組分的肝素副產(chǎn)物，目前從肝素鈉副產(chǎn)物中分離提純舒洛地特的方法主要有班氏試劑沉淀、乙醇分級沉淀、離心、樹脂離子交換等相結(jié)合的方法。CN102603924A公開了一種經(jīng)醋酸鉀沉淀、班氏試劑堿性沉淀、乙醇沉淀、陰離子樹脂柱純化等步驟從肝素副產(chǎn)物提取舒洛地特的方法，該方法盡管具有制備的產(chǎn)品純度較高的特點，但存在著收率較低、操作步驟繁瑣、容易引入雜質(zhì)等缺陷；CN104017102A公開了一種通過調(diào)節(jié)溶液高pH值、低pH值、中性pH值，以及結(jié)合離心、乙醇沉淀的方法從肝素副產(chǎn)物制備舒洛地特原料的方法，該方法盡管具有簡單快速的特點，但存在著低pH值易于破壞糖鏈結(jié)構(gòu)的風險。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明旨在通過調(diào)整乙醇用量從肝素副產(chǎn)物中提取舒洛地特原料的方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的弊端。

這種從肝素鈉副產(chǎn)物中提取舒洛地特原料藥的方法，其特征在于它包括以下步驟：

a．原料溶解 將肝素鈉副產(chǎn)物干燥品加水溶解后，加入1%~5%乙酸鈉攪拌溶解，然后用醋酸調(diào)溶液pH值5.0~8.0，所述肝素鈉副產(chǎn)物與水的質(zhì)量比為1:6~1:20；

b．分級沉淀一 在上述所得溶液中加入溶液體積0.3~0.7倍量的95%的乙醇，攪拌10~30min后，在2~10℃下靜置，靜置12~36h后收集上清液；

c．分級沉淀二 在步驟b所得上清液中補加95%乙醇，當溶液中補加的乙醇體積為上清液體積的0.1~0.5倍時，攪拌10~30min，然后在2~10℃下靜置，靜置12~36h后沉淀物與上清液分層，收集沉淀物；

d．氧化 將上述所得沉淀物加水溶解后，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液pH值為10.0~11.0，然后升溫到25~30℃時，加入1~3%過氧化氫攪拌反應，所述沉淀物與水的質(zhì)量比為1:3~1:10；

e．分級沉淀三 上述氧化反應6~24h后，將溶液pH值調(diào)為6.0~7.0，然后將料液經(jīng)微孔濾膜過濾后，在濾液中加入濾液體積1.5~2.5倍量的95%乙醇，攪拌10~30min后，在常溫下靜置8~16h；

f．干燥 將步驟e所得沉淀物脫水、粉碎后，在-1.0~ -0.8 bar、55~65℃下真空干燥12h后制得舒洛地特原料藥。

本發(fā)明取得的技術(shù)進步：與現(xiàn)有技術(shù)比較，本發(fā)明提高了舒洛地特產(chǎn)品收率，比其它制備方法收率提高約10%，成本降低約20%。另外，本發(fā)明避免了使用班氏試劑引入銅離子污染的風險，減少了使用離心機產(chǎn)生的電力消耗。同時增加了過氧化氫氧化步驟，提升了產(chǎn)品質(zhì)量，經(jīng)檢測，260nm和280nm吸光度遠低于標準要求，可直接用于制備口服制劑和注射液。本發(fā)明適于規(guī)?；a(chǎn)，使得肝素鈉副產(chǎn)物得以充分利用，具有工藝簡易、節(jié)能、環(huán)保、生產(chǎn)周期短等優(yōu)勢。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步說明。

實施例1：

a．原料溶解 稱取肝素鈉副產(chǎn)物干燥品1kg，緩慢加入15L純化水攪拌溶解后，補加純化水至溶液體積為20L，然后加入0.2kg乙酸鈉攪拌溶解，用醋酸調(diào)溶液pH值5.0；

b．分級沉淀一 向步驟a所得溶液中加入體積濃度95%的乙醇6L，攪拌10min后，在2℃下靜置，靜置12h后沉淀物與上清液分層，收集上清液；

c．分級沉淀二 向步驟b所得的上清液中補加95%體積濃度的乙醇4L，攪拌10min后在2℃下靜置，靜置12h后沉淀物與上清液分層，收集沉淀物；

d．氧化 將步驟c所得沉淀物0.63kg加純化水溶解后定容至6L，然后用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為10.0，調(diào)溶液溫度至25℃后加入60ml質(zhì)量濃度為30%的過氧化氫，攪拌反應；

e．分級沉淀三 上述氧化反應6h后，調(diào)整溶液pH值為6.0，再將溶液經(jīng)0.2μm微孔濾膜過濾后，在濾液中加入9.1L的95%體積濃度的乙醇，攪拌10min后在常溫下靜置8h；

f．干燥 將步驟e所得沉淀物脫水、粉碎后，放置真空干燥箱中，在-1.0~ -0.8 bar、55~65℃下真空干燥12h，制得本發(fā)明舒洛地特原料藥0.31kg。

實施例2：本實施例與實施例1不同之處是，

a．原料溶解 稱取肝素鈉副產(chǎn)物干燥品2kg，緩慢加入15L純化水攪拌溶解后，補加純化水至溶液體積為20L，然后加入0.6kg乙酸鈉攪拌溶解，用醋酸調(diào)溶液pH值6.5；

b．分級沉淀一 向步驟a所得溶液中加入體積濃度為95%的乙醇10L，攪拌20min后在6℃環(huán)境下靜置，靜置24h后沉淀物與上清液分層，收集上清液；

c．分級沉淀二 向步驟b所得的上清液中補加95%體積濃度的乙醇10L，攪拌20min后在6℃環(huán)境下靜置，靜置24h后沉淀物與上清液分層，收集沉淀物；

d．氧化 將步驟c所得沉淀物1.29kg加純化水溶解后定容至6L，然后用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為10.5，調(diào)溶液溫度至27.5℃后加入120ml質(zhì)量濃度為30%的過氧化氫，然后攪拌反應；

e．分級沉淀三 上述氧化反應12h后，調(diào)整溶液pH值為6.5，再將溶液經(jīng)0.2μm微孔濾膜過濾后，在濾液中加入12L的95%體積濃度的乙醇，攪拌20min后在常溫下靜置12h；

f．干燥 步驟e所得沉淀物脫水、粉碎后，放置真空干燥箱中，在-1.0~ -0.8 bar、55~65℃下真空干燥12h，制得本發(fā)明舒洛地特原料藥0.65kg。

實施例3：本實施例與實施例1不同之處是，

a．原料溶解 稱取肝素鈉副產(chǎn)物干燥品3kg，緩慢加入15L純化水攪拌溶解后，補加純化水至溶液體積為20L，然后加入1kg乙酸鈉攪拌溶解，再用醋酸調(diào)溶液pH值8.0；

b．分級沉淀一 向步驟a所得溶液中加入14L體積濃度為95%的乙醇，攪拌30min后在10℃環(huán)境下靜置，靜置36h后沉淀物與上清液分層，收集上清液；

c．分級沉淀二 向步驟b所得的上清液中補加95%體積濃度的乙醇16L，攪拌30min后在10℃環(huán)境下靜置，靜置36h后沉淀物與上清液分層，收集沉淀物；

d．氧化 將步驟c所得沉淀物1.95kg用純化水溶解后定容至6L，然后用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為11.0，調(diào)溶液溫度至30℃后加入180ml質(zhì)量濃度為30%的過氧化氫，然后攪拌反應；

e．分級沉淀三 上述反應24h后，調(diào)整溶液pH值為7.0，再將溶液經(jīng)0.2μm微孔濾膜過濾后，在濾液中加入15L的95%體積濃度的乙醇，攪拌30min后在常溫下靜置16h；

f．干燥 步驟e所得沉淀物脫水、粉碎后，放置真空干燥箱中，在-1.0~ -0.8 bar、55~65℃下真空干燥12h，即得舒洛地特原料藥0.97kg。

取上述實施例1、實施例2、實施例3制得的舒洛地特原料藥樣品分別進行理化性質(zhì)檢測及電泳分析，結(jié)果表明三個樣品檢測結(jié)果均符合企業(yè)內(nèi)控質(zhì)量標準，檢測結(jié)果見下表1。

表1 舒洛地特檢測結(jié)果