本發(fā)明涉及一種熊去氧膽酸的制備方法。
技術(shù)背景
熊去氧膽酸(udca)，主要成分是3a,7β-二羥基-5β-膽甾烷-24-酸，為有機(jī)化合物，無臭，味苦。在乙醇中易溶，在氯仿中不溶；在冰醋酸中易溶，在氫氧化鈉試液中溶解。醫(yī)學(xué)上用于增加膽汁酸分泌，并使膽汁成分改變，降低膽汁中膽固醇及膽固醇脂，有利于膽結(jié)石中的膽固醇逐漸溶解。
鵝去氧膽酸(cdca)，主要成分為3α,7α-二羥基-5β-膽甾烷-24-酸，主要作用是降低膽汁內(nèi)膽固醇的飽和度，也是合成熊去氧膽酸的原料。
鵝去氧膽酸合成熊去氧膽酸反應(yīng)式為：
由鵝去氧膽酸合成熊去氧膽酸的方法較多，主要為化學(xué)合成，如：
將7-酮去氧膽酸溶解于溶劑中，加入手性催化劑，堿性條件下，維持壓力在0～20mpa，通入氫氣在15～81℃下進(jìn)行氫化還原反應(yīng)，反應(yīng)完成后蒸餾除溶劑；加入13～95倍純化水，然后加入酸液使氫化還原反應(yīng)后的產(chǎn)物結(jié)晶；將固體和液體分離，洗滌干燥后，所得固體粉末即為熊去氧膽酸。
以鵝去氧膽酸為原料，分別將羧基保護(hù)后和3-羥基選擇性保護(hù)后，再將7-位羥基經(jīng)mitsunobu反應(yīng)或采用對(duì)甲苯磺酰氯、甲磺酰氯、對(duì)硝基苯磺酰氯制成酯，再脫去保護(hù)基制備熊去氧膽酸。
將鵝去氧膽酸經(jīng)過選擇氧化得到7-o-石膽酸，7-o-石膽酸選擇還原得到含有一定量鵝去氧膽酸的熊去氧膽酸產(chǎn)品，此熊去氧膽酸產(chǎn)品與硅化劑反應(yīng)，生成熊去氧膽酸硅化物不溶于有機(jī)溶劑，而其中的鵝去氧膽酸與硅化劑反應(yīng)，生成鵝去氧膽酸硅化物溶于有機(jī)溶劑，將得到的熊去氧膽酸硅化物酸化水解，得到高純度熊去氧膽酸產(chǎn)品。
以上方法的優(yōu)點(diǎn)是選擇性較好、收率較穩(wěn)定，其缺點(diǎn)主要是反應(yīng)條件和過程較復(fù)雜，成本較高。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明目的在于提供一種熊去氧膽酸的制備方法，反應(yīng)條件溫和、收率高、選擇性好、成本較低。
為了解決上述問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是這樣的，一種熊去氧膽酸的制備方法，包括以下步驟：
1)將鵝去氧膽酸溶于有機(jī)溶劑—水混合溶液中，加入緩沖液調(diào)ph至7，加入脂肪酶lipozymecalb，在36-38攝氏度下攪拌反應(yīng)；
2)反應(yīng)后，反應(yīng)液濃縮，析出大部分晶體后過濾，水洗，干燥得到熊去氧膽酸粗品；
3)將熊去氧膽酸粗品重結(jié)晶，得到精制的熊去氧膽酸產(chǎn)品。
其中，步驟1中有機(jī)溶劑—水混合溶液可以選擇甲醇，乙醇，四氫呋喃，dmf，dma，dmso，hmpa等與水的混合溶液，機(jī)溶劑與水的體積比為2:1到1:2，優(yōu)選1:1的丙酮—水混合溶劑。
脂肪酶lipozymecalb的加入量為鵝去氧膽酸質(zhì)量的1/20-1/5。
緩沖液為tris-鹽酸緩沖液。其中tris-鹽酸緩沖液的配制方法為:50ml0.1m三羥甲基氨基甲烷(tris)溶液與45ml0.1m鹽酸混勻后，加水稀釋至100ml。
步驟3)中，重結(jié)晶所用的溶劑為甲醇，乙醇，四氫呋喃中的一種或兩種以上任意比例的混合。
本發(fā)明的特點(diǎn)在于提供一種高效酶催化鵝去氧膽酸合成熊去氧膽酸的方法；用一種。具體試驗(yàn)步驟為：
有益效果：本發(fā)明利用來源于南極假絲酵母b的非特異性脂肪酶lipozymecalb，該酶是一種手性催化酶，可以催化鵝去氧膽酸反應(yīng)得到純度較高的熊去氧膽酸，反應(yīng)條件溫和、收率高、選擇性好、成本較低。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1將50g的鵝去氧膽酸溶于200ml丙酮—水(體積比為1:1)混合溶液，加入100mltris-鹽酸緩沖液調(diào)ph至7，加入5g脂肪酶lipozymecalb(購(gòu)買于novozymes公司)，水浴加熱至37攝氏度，攪拌反應(yīng)3小時(shí)。將反應(yīng)液濃縮，析出大部分晶體后過濾，水洗，干燥得到熊去氧膽酸粗品。將熊去氧膽酸粗品用100ml甲醇重結(jié)晶，得到精制的熊去氧膽酸產(chǎn)品35g，收率為70％。
實(shí)施例2將50g的鵝去氧膽酸溶于200ml甲醇—水(體積比為1:1)混合溶液，加入100mltris-鹽酸緩沖液調(diào)ph至7，加入5g脂肪酶lipozymecalb，水浴加熱至37攝氏度，攪拌反應(yīng)3小時(shí)。將反應(yīng)液濃縮，析出大部分晶體后過濾，水洗，干燥得到熊去氧膽酸粗品。將熊去氧膽酸粗品用100ml甲醇重結(jié)晶，得到精制的熊去氧膽酸產(chǎn)品32g，收率為64％。
實(shí)施例3將50g的鵝去氧膽酸溶于200mldmf—水(體積比為1:1)混合溶液，加入100mltris-鹽酸緩沖液調(diào)ph至7，加入10g脂肪酶lipozymecalb，水浴加熱至37攝氏度，攪拌反應(yīng)3小時(shí)。將反應(yīng)液濃縮，析出大部分晶體后過濾，水洗，干燥得到熊去氧膽酸粗品。將熊去氧膽酸粗品用100ml乙醇重結(jié)晶，收率為72％。
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。