本發(fā)明屬于藥物化學(xué)和藥物治療學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種酰胺基取代的橙皮素類衍生物及其制備方法和作為抗阿爾茲海默癥的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

阿爾茲海默病(Alzheimer’s disease AD)是一種年齡相關(guān)性的神經(jīng)退行性變的疾病，隨著人口年齡的增長，發(fā)病率會(huì)顯著增高在未來十年里。全世界，接近4千萬人口患AD。AD是以逐漸的記憶缺失，語言功能的衰退和其他認(rèn)知障礙為特征。盡管AD的機(jī)制尚未完全清楚，通常標(biāo)志像β-淀粉樣肽(Aβ)沉積，Tau蛋白聚集和氧化應(yīng)激在疾病的機(jī)制中起到重要作用。此外，在AD患者中，膽堿能神經(jīng)選擇性缺失導(dǎo)致大腦特定區(qū)域乙酰膽堿的不足，從而影響學(xué)習(xí)和記憶功能。血清學(xué)以及多巴胺系統(tǒng)的改變也被認(rèn)為是AD患者行為學(xué)改變的原因。

目前，有三種療效較好的藥物(多奈哌齊，加蘭他敏和卡巴拉汀)旨在改變AD癥狀通過抑制乙酰膽堿酯酶(AChE)，從而提高突觸的乙酰膽堿含量，乙酰膽堿酯酶能夠水解乙酰膽堿。膽堿能藥物除了具有抑制乙酰膽堿酯酶的性能外，但很少能抑制AD疾病的進(jìn)程。因此，現(xiàn)在沒有有效治療，終止或延緩疾病的進(jìn)程，因此有效的方法亟待被發(fā)現(xiàn)。現(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)提高活性和選擇性雙位點(diǎn)抗AD藥物，能有效的用于AD的治療，通過設(shè)計(jì)不同藥效團(tuán)通過一定方式連接，得到能同時(shí)與AChE的中心催化位點(diǎn)和PAS結(jié)合，提高抑制AD疾病的活性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種酰胺基取代的橙皮素類衍生物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供該酰胺基基取代的橙皮素類衍生物的制備方法。

本發(fā)明還有一個(gè)目的在于提供該酰胺基取代的橙皮素類衍生物作為抗阿爾茲海默癥藥物的應(yīng)用。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

一種酰胺基取代的橙皮素類衍生物，其特征在于結(jié)構(gòu)式為：

其中R表示對氯芐氨基，鄰氯芐氨基，間甲氧基芐氨基，對氯苯乙氨基，鄰氟芐氨基，對甲氧基苯乙氨基，對氯苯乙氨基，芐氨基，對氟芐氨基，鄰氯苯乙氨基，4-甲氧基吡啶氨基，鄰甲氧基芐氨基，鄰氟苯乙氨基，間氯苯乙氨基，糠氨基，對溴芐氨基，對溴苯乙氨基，對甲氧基芐氨基，三氟甲基芐氨基，苯乙氨基中的一種。

所述的酰胺基取代的橙皮素類衍生物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：(1)將橙皮素類似物與2-3倍量的溴乙酸乙酯在弱堿作用下攪拌后得到產(chǎn)物

(2)將步驟(1)所得產(chǎn)物進(jìn)行水解反應(yīng)后，再與各種脂肪胺混合，酰胺基化反應(yīng)得到終產(chǎn)物酰胺基取代的橙皮素類衍生物其中R為對氯芐氨基，鄰氯芐氨基，間甲氧基芐氨基，對氯苯乙氨基，鄰氟芐氨基，對甲氧基苯乙氨基，對氯苯乙氨基，芐氨基，對氟芐氨基，鄰氯苯乙氨基，4-甲氧基吡啶氨基，鄰甲氧基芐氨基，鄰氟苯乙氨基，間氯苯乙氨基，糠氨基，對溴芐氨基，對溴苯乙氨基，對甲氧基芐氨基，三氟甲基芐氨基，苯乙氨基中的一種。

所述的酰胺基取代的橙皮素類衍生物的制備方法，其特征在于：步驟(1)中弱堿為K₂CO₃，攪拌時(shí)間為18-22min，反應(yīng)溶劑為DMF。

所述的酰胺基取代的橙皮素類衍生物的制備方法，其特征在于步驟(2)中水解在堿性條件下，催化劑為氫氧化鈉，溶劑為乙醇；氨基取代化反應(yīng)溫度為室溫，在HOBT和EDC鹽酸鹽的催化下進(jìn)行，溶劑為氯仿。

所述的酰胺基取代的橙皮素類衍生物的應(yīng)用，其特征在于作為制備抗阿爾茲海默癥的藥物中的應(yīng)用。

所述的應(yīng)用，所述的藥物為注射劑、片劑、丸劑、膠囊劑、懸浮劑或乳劑。

本發(fā)明所述的該酰胺基取代的橙皮素類衍生物的制備方法，主要合成路線為：

其具體步驟為：

(1)將橙皮素類似物與15倍量的DMF溶劑混合，加入2-3倍量的溴乙酸乙酯，在K₂CO₃的作用下攪拌20min后，得到產(chǎn)物

(2)將上述產(chǎn)物溶于乙醇中，將反應(yīng)裝置放于冰浴條件，加入適量NaOH調(diào)PH到2到3左右，反應(yīng)2h，終止反應(yīng)，加水析出，抽濾得到水解產(chǎn)物，用氯仿溶解，再加5倍量的脂肪胺，適量的HOBT和EDC鹽酸鹽，攪拌反應(yīng)過夜。停止反應(yīng)，干燥，中性氧化鋁珠層析，得到最終產(chǎn)物酰胺基取代的橙皮素衍生物R為對氯芐氨基，鄰氯芐氨基，間甲氧基芐氨基，對氯苯乙氨基，鄰氟芐氨基，對甲氧基苯乙氨基，對氯苯乙氨基，芐氨基，對氟芐氨基，鄰氯苯乙氨基，4-甲氧基吡啶氨基，鄰甲氧基芐氨基，鄰氟苯乙氨基，間氯苯乙氨基，糠氨基，對溴芐氨基，對溴苯乙氨基，對甲氧基芐氨基，三氟甲基芐氨基，苯乙氨基中的一種。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：

本發(fā)明通過體外乙酰膽堿酯酶和丁酰膽堿酯酶的抑制實(shí)驗(yàn)，證明本發(fā)明的酰胺基取代的橙皮素類衍生物對乙酰膽堿酯酶具有較強(qiáng)的抑制活性和較高的選擇性，可以作為乙酰膽堿酯酶抑制劑藥物應(yīng)用。表明本發(fā)明所述的衍生物可用于制備治療阿爾茲海默癥的藥物。

本發(fā)明公開了一種酰胺基取代的橙皮素類衍生物及其制備和作為治療阿爾茲海默癥的藥物中的應(yīng)用。研究證明，本發(fā)明所涉及的酰胺基取代的橙皮素類衍生物對乙酰膽堿酯酶具有很強(qiáng)的抑制性能及很好的抑制選擇性，其對乙酰膽堿酯酶的抑制能力比對丁酰膽堿酯酶的抑制活性高出1200多倍。表明該類化合物能夠發(fā)展成為治療阿爾茨海默癥(Alzheimer’sdisease)的藥物。

具體的實(shí)施方式：

下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明。除非特別說明，本發(fā)明采用的試劑、設(shè)備和方法為本技術(shù)領(lǐng)域常規(guī)市購的試劑、設(shè)備和常規(guī)使用的方法。

實(shí)施例一：化合物3的合成

將化合物2，即橙皮素(5.72g，約0.02mol)溶于100mL無水DMF中，加入1.5倍摩爾量的K2CO3，隨后加入2倍量的溴乙酸乙酯，常溫?cái)嚢?0min。終止反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取，反復(fù)用飽和食鹽水萃取，洗去DMF,干燥，減壓回收乙酸乙酯，濃縮至油狀后，加水，析出黃色固體，依次用甲醇、二氯甲烷重結(jié)晶，得到白色晶體，產(chǎn)率68％，

化合物3的化學(xué)式如下：

實(shí)施例二：化合物5a的合成

化合物3(3.72g，10mmol)，溶于乙醇中，滴加10％NaOH，調(diào)PH至12到13左右，反應(yīng)2h，加稀鹽酸調(diào)PH至2到3左右，終止反應(yīng)，加水析出，抽濾得粗制淡黃色固體化合物4。取化合物4的粗制品0.33g，溶于氯仿，加3倍量的芐胺，加適量HOBT和EDC鹽酸鹽，室溫?cái)嚢柽^夜。停止反應(yīng)，將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至萃取瓶中，調(diào)PH至弱酸，用飽和食鹽水洗滌(40mL×3)，有機(jī)相用無水氯化鈣干燥，過濾，濾液減壓蒸餾的淺黃色油狀物。用硅膠柱層析[V(三氯甲烷)：V(石油醚)＝3：1]得白色固體5a。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ11.97(s,1H,5-OH),7.37–7.27(m,5H,Ar-H),7.02(d,J＝2.0Hz,1H,2’-H),6.92(dd,J＝8.4,1.9Hz,1H,5’-H),6.88(d,J＝8.3Hz,1H,4’-H),6.74(t,J＝5.0Hz,1H,NH),6.07(d,J＝2.4Hz,1H,8-H),6.05(d,J＝2.4Hz,1H,6-H),5.33(dd,J＝12.8,3.1Hz,1H,2-H),4.54(d,J＝5.1Hz,2H,NCH₂),4.54(s,2H,C＝OCH₂O),3.92(s,3H,OCH₃),3.08(dd,J＝17.2,12.8Hz,1H,3-H),2.81(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H).TOF-HRMS m/z:472.1236[M+Na]⁺，

化合物5a的化學(xué)式如下：

實(shí)施例三：化合物5b的合成

方法同實(shí)施例二，所不同的是用對氯芐胺代替芐胺，得白色固體化合物5b。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ11.98(s,5-OH),7.33–7.28(m,2H,Ar-H),7.25–7.20(m,2H,Ar-H),7.03(d,J＝2.0Hz,1H,2’-H),6.92(dd,J＝8.4,1.9Hz,1H,5’-H),6.88(d,J＝8.3Hz,1H,4’-H),6.74(t,J＝5.7Hz,1H,NH),6.07(d,J＝2.4Hz,1H,8-H),6.04(d,J＝2.4Hz,1H,6-H),5.34(dd,J＝12.8,3.1Hz,1H,2-H),4.53(s,2H,C＝OCH₂O),4.50(d,J＝6.1Hz,2H,NCH₂),3.92(s,3H,OCH₃),3.09(dd,J＝17.2,12.8Hz,1H,3-H),2.82(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H).TOF-HRMS m/z:509.0977[M+Na]⁺，

化合物5b的化學(xué)式如下：

實(shí)施例四：化合物5c的合成

方法同實(shí)施例二，所不同的是用對氟芐胺代替芐胺，得白色固體5c。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ11.98(s,1H,5-OH),7.29–7.23(m,2H,Ar-H),7.06–6.98(m,3H,Ar-H,2’-H),6.91(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H,5’-H),6.88(d,J＝8.3Hz,1H,4’-H),6.74(t,J＝5.0Hz,1H,NH),6.07(d,J＝2.4Hz,1H,8-H),6.04(d,J＝2.4Hz,1H,6-H),5.33(dd,J＝12.8,3.1Hz,1H,2-H),4.53(s,2H,C＝OCH₂O),4.50(d,J＝6.0Hz,2H,Ar-CH₂N),3.92(s,3H,OCH₃),3.08(dd,J＝17.2,12.8Hz,1H,3-H),2.81(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H).TOF-HRMS m/z:490.1273[M+Na]⁺，

化合物5c的化學(xué)式如下：

實(shí)施例五：化合物5d的合成

方法同實(shí)施例二，所不同的是用對溴芐氨代替芐胺，得白色固體5d。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ11.98(s,1H,5-OH),7.48–7.43(m,2H,Ar-H),7.16(d,J＝8.3Hz,2H,Ar-H),7.03(d,J＝1.9Hz,1H,2’-H),6.92(dd,J＝8.3,2.0Hz,1H,5’-H),6.88(d,J＝8.3Hz,1H,4’-H),6.76(t,J＝5.6Hz,1H,NH),6.07(d,J＝2.3Hz,1H,8-H),6.04(d,J＝2.2Hz,1H,6-H),5.33(dd,J＝12.8,3.0Hz,1H,2-H),4.53(s,2H,C＝OCH₂O),4.48(d,J＝6.1Hz,2H,NCH₂),3.92(s,3H,OCH3),3.08(dd,J＝17.2,12.8Hz,1H,3-H),2.81(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H).TOF-HRMS m/z:550.0725[M+Na]⁺，

化合物5d的化學(xué)式如下：

實(shí)施例六：化合物5e的合成

方法同實(shí)施例二，所不同的是用對甲氧基芐胺代替芐氨，得白色固體5e。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ11.97(s,1H,5-OH),7.24–7.19(m,2H,Ar-H),7.02(d,J＝1.9Hz,1H,2’-H),6.91(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H,5’-H),6.88(d,J＝8.4Hz,1H,4’-H),6.88–6.85(m,2H,Ar-H),6.67(t,J＝4.7Hz,1H,NH),6.06(d,J＝2.3Hz,1H,8-H),6.03(d,J＝2.3Hz,1H,6-H),5.33(dd,J＝12.8,3.0Hz,1H,2-H),4.51(s,2H,C＝OCH₂O),4.47(d,J＝5.8Hz,2H,Ar-CH₂N),3.92(s,3H,OCH₃),3.80(s,3H,OCH₃),3.08(dd,J＝17.2,12.9Hz,1H,3-H),2.80(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H).TOF-HRMS m/z:502.1472[M+Na]⁺，

化合物5e的化學(xué)式如下：

實(shí)施例七：化合物5f的合成

方法同實(shí)施例二，所不同的是用4-三氟甲基芐氨代替芐氨，得白色固體5f。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ12.07(s,1H,5-OH),9.08(s,1H,3’-OH),8.77(t,J＝6.1Hz,1H,NH),7.66(d,J＝8.1Hz,2H,Ar-H),7.47(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),6.94(m,2H,2’-H,4’-H),6.88(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H,5’-H),6.14(d,J＝2.3Hz,1H,8-H),6.12(d,J＝2.3Hz,1H,6-H),5.50(dd,J＝12.4,3.0Hz,1H,2-H),4.65(s,2H,C＝OCH₂O),4.42(d,J＝6.0Hz,2H,Ar-CH₂N),3.78(s,3H,OCH₃),3.27(dd,J＝17.2,12.5Hz,1H,3-H),2.77(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H).TOF-HRMS m/z:540.1348[M+Na]⁺，

化合物5f的化學(xué)式如下：

實(shí)施例八：化合物5g的合成

方法同實(shí)施例二，所不同的是用鄰氯芐氨代替芐氨，得白色固體5g。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ11.97(s,1H,5-OH),7.34(td,J＝7.4,1.5Hz,1H,Ar-H),7.31–7.25(m,2H,Ar-H),7.11(td,J＝7.5,1.1Hz,1H,Ar-H),7.09–7.03(m,1H,Ar-H),7.03(d,J＝2.0Hz,1H,2’-H),6.92(dd,J＝8.4,1.9Hz,1H,5’-H),6.88(d,J＝8.3Hz,1H,4’-H),6.81(t,J＝5.5Hz,1H,NH),6.08(d,J＝2.4Hz,1H,8-H),6.05(d,J＝2.4Hz,1H,6-H),5.33(dd,J＝12.8,3.0Hz,1H,2-H),4.59(d,J＝6.1Hz,2H,NCH₂),4.51(s,2H,C＝OCH₂O),3.92(s,3H,OCH₃),3.08(dd,J＝17.2,12.9Hz,1H,3-H),2.81(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H).TOF-HRMS m/z:506.1123[M+Na]⁺，

化合物5g的化學(xué)式如下：

實(shí)施例九：化合物5h的合成

方法同實(shí)施例二，所不同的是用鄰氟芐氨代替芐氨，得白色固體5h。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ11.97(s,1H,5-OH),7.37–7.27(m,2H,Ar-H),7.11(td,J＝7.5,1.1Hz,2H,Ar-H),7.03(d,J＝2.0Hz,1H,2’-H),6.92(dd,J＝8.3,2.0Hz,1H,5’-H),6.88(d,J＝8.3Hz,1H,4’-H),6.81(t,J＝5.5Hz,1H,NH),6.08(d,J＝2.4Hz,1H,8-H),6.05(d,J＝2.4Hz,1H,6-H),5.33(dd,J＝12.8,3.0Hz,1H,2-H),4.59(d,J＝6.1Hz,2H,NCH₂),4.51(s,2H,C＝OCH₂O),3.92(s,3H,OCH₃),3.08(dd,J＝17.2,12.9Hz,1H,3-H),2.81(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H).TOF-HRMS m/z:468.1453[M+H]⁺，

化合物5h的化學(xué)式如下：

實(shí)施例十：化合物5i的合成

方法同實(shí)施例二，所不同的是用2-甲氧基芐氨代替芐氨，得白色固體5i。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ12.07(s,1H,5-OH),9.09(s,1H,3’-OH),8.43(t,J＝5.9Hz,1H,NH),7.26–7.19(m,1H,Ar-H),7.15–7.10(m,1H,Ar-H),6.99–6.92(m,3H,2’-H,Ar-H),6.87(m,2H,4’-H,5’-H),6.12(d,J＝2.3Hz,1H,8-H),6.11(d,J＝2.3Hz,1H,6-H),5.49(dd,J＝12.5,3.0Hz,1H,2-H),4.64(s,2H,C＝OCH₂O),4.30(d,J＝5.9Hz,2H,Ar-CH₂N),3.79(s,3H,OCH₃),3.78(s,3H,OCH₃),3.27(dd,J＝17.2,12.6Hz,1H,3-H),2.76(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H).TOF-HRMS m/z:480.1653[M+H]⁺，

化合物5i的化學(xué)式如下：

實(shí)施例十一：化合物5j的合成

方法同實(shí)施例二，所不同的是用3-甲氧基芐氨代替芐氨，得白色固體5j。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ11.97(s,1H,5-OH),7.28–7.22(m,1H,Ar-H),7.02(d,J＝2.0Hz,1H,2’-H),6.92(dd,J＝8.3,2.0Hz,1H,5’-H),6.88(d,J＝8.2Hz,1H,4’-H),6.88–6.80(m,3H,Ar-H),6.72(t,J＝5.5Hz,1H,NH),6.07(d,J＝2.4Hz,1H,8-H),6.05(d,J＝2.4Hz,1H,6-H),5.33(dd,J＝12.8,3.0Hz,1H,2-H),4.54(s,2H,C＝OCH₂O),4.51(d,J＝5.9Hz,2H,NCH₂),3.92(s,3H,OCH₃),3.79(s,3H,OCH₃),3.08(dd,J＝17.2,12.9Hz,1H,3-H),2.81(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H).TOF-HRMS m/z:502.1472[M+Na]⁺，

化合物5j的化學(xué)式如下：

實(shí)施例十二：化合物5k的合成

方法同實(shí)施例二，所不同的是用苯乙胺代替芐氨，得白色固體5k。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ11.99(s,1H,5-OH),7.32–7.27(m,2H,Ar-H),7.25–7.21(m,1H,Ar-H),7.19–7.15(m,2H,Ar-H),7.04(d,J＝2.0Hz,1H,2’-H),6.92(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H,5’-H),6.89(d,J＝8.3Hz,1H,4’-H),6.45(t,J＝5.3Hz,1H,NH),6.02(d,J＝2.4Hz,1H,8-H),5.99(d,J＝2.4Hz,1H,6-H),5.34(dd,J＝12.8,3.0Hz,1H,2-H),4.45(s,2H,C＝OCH₂N),3.92(s,3H,OCH₃),3.60(dd,J＝13.0,6.9Hz,2H,NCH₂),3.09(dd,J＝17.2,12.8Hz,1H,3-H),2.88–2.78(m,3H,Ar-CH₂,3-H).TOF-HRMS m/z:486.1523[M+Na]⁺，

化合物5k的化學(xué)式如下：

實(shí)施例十三：化合物5l的合成

方法同實(shí)施例二，所不同的是用對甲氧基苯乙胺代替芐氨，得白色固體5l。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ11.99(s,1H,5-OH),7.10–7.05(m,2H,Ar-H),7.04(d,J＝2.0Hz,1H,2’-H),6.93(dd,J＝8.3,2.0Hz,1H,5’-H),6.89(d,J＝8.3Hz,1H,4’-H),6.86–6.81(m,2H,Ar-H),6.41(t,J＝5.3Hz,1H,NH),6.01(d,J＝2.3Hz,1H,8-H),5.99(d,J＝2.3Hz,1H,8-H),5.35(dd,J＝12.8,3.0Hz,1H,2-H),4.45(s,2H,C＝OCH₂O),3.92(s,3H,OCH₃),3.78(s,3H,OCH₃),3.56(q,J＝6.8Hz,2H,NCH₂),3.10(dd,J＝17.2,12.8Hz,1H,3-H),2.80(dt,J＝10.7,5.0Hz,3H,Ar-CH₂,3-H).TOF-HRMS m/z:516.1629[M+Na]⁺，

化合物5l的化學(xué)式如下：

實(shí)施例十四：化合物5m的合成

方法同實(shí)施例二，所不同的是用對氯苯乙胺代替芐氨，得白色固體5m。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ12.00(s,1H,5-OH),7.26–7.23(m,2H,Ar-H),7.12–7.07(m,2H,Ar-H),7.04(d,J＝2.0Hz,1H,2’-H),6.93(dd,J＝8.4,2.0Hz,2H.5’-H),6.89(d,J＝8.3Hz,1H,4’-H),6.41(t,J＝5.6Hz,1H,NH),6.02(d,J＝2.4Hz,1H,8-H),6.00(d,J＝2.4Hz,1H,6-H),5.35(dd,J＝12.8,3.1Hz,1H,2-H),4.46(s,2H,C＝OCH₂O),3.92(s,3H,OCH₃),3.58(q,J＝6.6Hz,2H,NCH₂),3.10(dd,J＝17.2,12.8Hz,1H,3-H),2.86–2.78(m,3H,Ar-CH₂,3-H).TOF-HRMS m/z:520.1134[M+Na]⁺，

化合物5m的化學(xué)式如下：

實(shí)施例十五：化合物5n的合成

方法同實(shí)施例二，所不同的是用對溴苯乙胺代替芐氨，得白色固體5n。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ12.00(s,1H,5-OH),7.43–7.38(m,2H,Ar-H),7.07–7.01(m,3H,Ar-H,2’-H),6.93(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H,5’-H),6.89(d,J＝8.3Hz,1H,4’-H),6.41(t,J＝5.5Hz,1H,NH),6.03(d,J＝2.4Hz,1H,8-H),6.00(d,J＝2.4Hz,1H,6-H),5.35(dd,J＝12.8,3.1Hz,1H,2-H),4.46(s,2H,C＝OCH₂O),3.92(s,3H,OCH₃),3.57(q,J＝6.3Hz,2H,NCH₂),3.10(dd,J＝17.2,12.8Hz,1H,3-H),2.87–2.78(m,3H,Ar-CH₂,3-H).TOF-HRMS m/z:564.0628[M+Na]⁺，

化合物5n的化學(xué)式如下：

實(shí)施例十六：化合物5o的合成

方法同實(shí)施例二，所不同的是用對氟苯乙胺代替芐氨，得白色固體5o。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ12.00(s,1H,5-OH),7.15–7.09(m,2H,Ar-H),7.04(d,J＝2.0Hz,1H,2’-H),6.97(ddd,J＝10.8,5.8,2.5Hz,2H,Ar-H),6.93(dd,J＝8.5,2.0Hz,1H,5’-H),6.89(d,J＝8.3Hz,1H,4’-H),6.42(t,J＝5.5Hz,1H,NH),6.02(d,J＝2.4Hz,1H,8-H),5.99(d,J＝2.4Hz,1H,6-H),5.34(dd,J＝12.8,3.1Hz,1H,2-H),4.45(s,2H,C＝OCH₂O),3.92(s,3H,OCH₃),3.57(dd,J＝13.2,6.9Hz,2H,NH),3.10(dd,J＝17.2,12.8Hz,1H,3H),2.85–2.79(m,3H,Ar-CH₂,3-H).TOF-HRMS m/z:482.1610[M+H]⁺，

化合物5o的化學(xué)式如下：

實(shí)施例十七：化合物5p的合成

方法同實(shí)施例二，所不同的是用鄰氯苯乙胺代替芐氨，得白色固體5p。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ11.99(s,1H,5-OH),7.38–7.33(m,1H,Ar-H),7.21–7.16(m,3H,Ar-H),7.04(d,J＝2.0Hz,1H,2’-H),6.92(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H,5’-H),6.89(d,J＝8.3Hz,1H,4’-H),6.51(t,J＝5.5Hz,1H,NH),6.03(d,J＝2.4Hz,1H,8-H),6.01(d,J＝2.4Hz,1H,6-H),5.34(dd,J＝12.8,3.1Hz,1H,2-H),4.45(s,2H,C＝OCH₂O),3.92(s,3H,OCH₃),3.63(dd,J＝12.9,6.8Hz,2H,NCH₂),3.09(dd,J＝17.2,12.8Hz,1H,3-H),3.01(t,J＝6.9Hz,2H,Ar-CH₂),2.82(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H).TOF-HRMS m/z:520.1134[M+Na]⁺，化合物5p的化學(xué)式如下：

實(shí)施例十八：化合物5q的合成

方法同實(shí)施例二，所不同的是用鄰氟苯乙胺代替芐氨，得白色固體5q。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ12.07(s,1H,5-OH),9.09(s,1H,3’-OH),8.22(t,J＝5.7Hz,1H,NH),7.33–7.20(m,3H,Ar-H),7.19–7.04(m,2H,Ar-H,2’-OH),6.98–6.86(m,2H,4’-H,5’-H),6.09–6.07(m,2H,6-H,8-H),5.49(dd,J＝12.4,2.9Hz,1H,2-H),4.52(s,2H,C＝OCH₂O),3.78(s,3H,OCH₃),3.35(dd,J＝13.0,6.8Hz,2H,NCH₂),3.26(dd,J＝17.2,12.3Hz,1H,3-H),2.81–2.73(dd,J＝17.0,3.0Hz,1H,3-H).TOF-HRMS m/z:504.1429[M+Na]⁺，化合物5q的化學(xué)式如下：

實(shí)施例十九：化合物5r的合成

方法同實(shí)施例二，所不同的是用間氯苯乙胺代替芐氨，得白色固體5r。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ11.99(s,1H,5-OH),7.25–7.13(m,2H,Ar-H),7.10–7.00(m,3H,Ar-H,2’-H),6.93(dd,J＝8.3,2.0Hz,1H,5’-H),6.89(d,J＝8.3Hz,1H,4’-H),6.52(t,J＝5.3Hz,1H,NH),6.03(d,J＝2.3Hz,1H,8-H),6.01(d,J＝2.3Hz,1H,6-H),5.34(dd,J＝12.8,3.0Hz,1H,2-H),4.45(s,2H,C＝OCH₂O),3.92(s,3H,OCH₃),3.61(dd,J＝12.9,6.7Hz,2H,NCH₂),3.09(dd,J＝17.2,12.8Hz,1H,3-H),2.91(t,J＝6.8Hz,1H,Ar-CH₂),2.82(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H).TOF-HRMSm/z:520.1134[M+Na]⁺，化合物5r的化學(xué)式如下：

實(shí)施例二十：化合物5s的合成

方法同實(shí)施例二，所不同的是用4-甲氨基吡啶代替芐氨，得白色固體5s。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ12.07(s,1H,5-OH),9.09(s,1H,3’-OH),8.75(t,J＝6.1Hz,1H,NH),8.47(dd,J＝4.4,1.6Hz,2H,Py-H),7.24(d,J＝6.0Hz,2H,Py-H),6.96–6.92(m,2H,2’-H,4’-H),6.91–6.86(m,1H,5’-H),6.14(d,J＝2.3Hz,1H,8-H),6.13(d,J＝2.3Hz,1H,6-H),5.50(dd,J＝12.4,3.0Hz,1H,2-H),4.68(s,2H,C＝OCH₂O),4.36(d,J＝6.1Hz,2H,Py-CH₂),3.78(s,3H,OCH₃),3.27(dd,J＝17.0,12.2Hz,1H,3-H),2.77(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H).TOF-HRMS m/z:451.1500[M+H]⁺，化合物5s的化學(xué)式如下：

實(shí)施例二十一：化合物5t的合成

方法同實(shí)施例二，所不同的是用糠胺代替芐氨，得白色固體5t。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ11.98(s,1H,5-oh),7.37(dd,J＝1.8,0.8Hz,1H,Fu-H),7.03(d,J＝2.0Hz,1H,2’-H),6.92(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H,5’-H),6.88(d,J＝8.3Hz,1H,4’-H),6.76(t,J＝4.6Hz,1H,NH),6.33(dd,J＝3.2,1.9Hz,1H,Fu-H),6.26(dd,J＝3.2,0.6Hz,1H,Fu-H),6.08(d,J＝2.4Hz,1H,8-H),6.05(d,J＝2.4Hz,1H,6-H),5.34(dd,J＝12.8,3.0Hz,1H,2-H),4.53(d,J＝5.8Hz,2H,NCH₂),4.51(s,2H,C＝OCH₂O),3.92(s,3H,OCH₃),3.08(dd,J＝17.2,12.8Hz,1H,3-H),2.81(dd,J＝17.2,3.1Hz,1H,3-H).TOF-HRMS m/z:460.1159[M+Na]⁺，

化合物5t的化學(xué)式如下：

實(shí)驗(yàn)測試實(shí)施例制得的化合物對乙酰膽堿酯酶和丁酰膽堿酯酶的抑制作用(Biochemical Pharmacology 1961,7,88-95.)

結(jié)果用IC₅₀值表示，以Tacrine作為陽性對照。所有的測試均在PowerWaveXS2型全波長酶標(biāo)儀上進(jìn)行，在37℃的條件下測定。數(shù)據(jù)分析利用軟件Origin進(jìn)行處理。

實(shí)驗(yàn)步驟：

1)化合物溶液的配制：

將測試化合物配成10mM濃度(溶劑：DMSO)，-20℃低溫冰箱保存，使時(shí)用磷酸鹽緩沖液(0.1mol/L，pH8.0)稀釋至所需濃度。

2)酶儲(chǔ)備液的配制：

從Sigma公司購買乙酰膽堿酯酶(E.C.3.1.1.7,from electric ell.)和丁酰膽堿酯酶(E.C.3.1.1.8,from equine serum)；乙酰膽堿酯酶儲(chǔ)備液配制為0.1mg/ml，丁酰膽堿酯酶儲(chǔ)備液配制為0.2mg/ml。

3)底物儲(chǔ)備液的配制：

從Sigma公司購買硫代乙酰膽堿(Acetylthiocholine，ATC)和硫代丁酰膽堿(Butylthiocholine,BTC)；稱取一定量ATC或BTC，用磷酸鹽緩沖溶液(0.1mol/L，pH8.0)配制成0.01mol/L的溶液，備用。

4)顯色劑儲(chǔ)備液的配制：

從Sigma公司購買的顯色劑5,5-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)用磷酸鹽緩沖溶液(0.1mol/L，pH8.0)配制成0.01mol/L，4℃遮光保存,備用。

5)化合物酶抑制能力檢測：

每一種化合物在96孔板中選取6個(gè)孔測試；分別加入10μL酶溶液；0，5，10，20，35，50μL待測化合物溶液；加入0.1mol/LpH8.0磷酸緩沖溶液使總體積為100μL。

在37℃全波長酶標(biāo)儀中孵育15min，立即加入10μLATC溶液(或BTC)、10μLDTNB溶液及80μL磷酸緩沖溶液的混合液共100μL，在λ＝412nm掃描2min測定吸光度變化。

6)結(jié)果計(jì)算：

IC50值的計(jì)算：以沒有加入抑制劑時(shí)測得的吸光度變化(斜率)為100個(gè)活力單位(Acontrol)，相對酶活力＝(加入抑制劑的吸光度變化/沒有加入抑制劑的吸光度變化)×100，當(dāng)相對酶活力達(dá)到50時(shí)，即為抑制劑的IC₅₀值。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果為三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值。

7)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

表1化合物5a-5t及Tacrine對乙酰膽堿酯酶和丁酰膽堿酯酶抑制作用的IC₅₀值及抑制選擇性

^a對乙酰膽堿酯酶的選擇性＝IC₅₀(丁酰膽堿酯酶)/IC₅₀(乙酰膽堿酯酶)

8)結(jié)論：從表1發(fā)現(xiàn)所有的橙皮素衍生物對乙酰膽堿酯酶均有較好的抑制活性，活性達(dá)到49.2～207.3nM，而對丁酰膽堿酯酶的抑制活性較弱，對乙酰膽堿酯酶的選擇性較高，選擇性范圍達(dá)到135.2～581.8?；衔?f表現(xiàn)出最好的乙酰膽堿酯酶抑制活性(IC50為49.2nM)，同時(shí)具有最好的乙酰膽堿酯酶抑制選擇性(581.8)。