本發(fā)明涉及化學(xué)合成領(lǐng)域，尤其涉及一種羥基吡啶酮配體及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
隨著核電工業(yè)的發(fā)展，核安全得到人們的高度重視。2011年3月11日的日本福島核電站核泄漏事故被認(rèn)為是自1986年烏克蘭切爾克貝利核泄漏以來(lái)最嚴(yán)重的核災(zāi)難。福島核電站爆炸導(dǎo)致核泄漏，這些放射性的核素通過(guò)各種途徑在環(huán)境中擴(kuò)散轉(zhuǎn)移，有一些長(zhǎng)壽命高放射性的核素，如釷，鈾和钚等錒系元素有可能通過(guò)皮膚，呼吸和食物等途徑進(jìn)入人體，這類(lèi)核素尤其钚、镅等高放射性核素不僅放射性強(qiáng)，化學(xué)毒性也很高，進(jìn)入體內(nèi)后會(huì)造成強(qiáng)內(nèi)照射，極有可能致癌，甚至致死。因此研究低毒、高效的核素阻吸劑或促排劑，加速錒系元素的排出，減少內(nèi)照射劑量，是必須做好放射突發(fā)事件的首要核輻射損傷防護(hù)工作。
目前dtpa-cana3是目前市面上唯一可售的促排劑，研究發(fā)現(xiàn)dtpa-cana3對(duì)錒系元素钚、镅有較好的促排效果。但是dtpa-cana3有很多局限和不足：首先，dtpa-cana3僅對(duì)钚、镅有較好的促排效果，對(duì)鈾、釷等接觸幾率較大的核素幾乎沒(méi)有促排效果，而且dtpa-cana3不能通過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，核素一旦沉積和細(xì)胞內(nèi)的蛋白結(jié)合，dtpa-cana3不能將其排出；其次，作為核應(yīng)急藥物，dtpa-cana3僅是注射促排效果較好，幾乎沒(méi)有口服效果，為核事故應(yīng)急帶來(lái)不便；此外現(xiàn)dtpa-cana3很難去除沉積在骨骼中的核素，而且為去除體內(nèi)最大量的核素，需多次注射dtpa-cana3，副作用較大。
除此之外，鑭錒系等重金屬元素，很容易與o、n、f等較硬的元素去絡(luò)合，研究發(fā)現(xiàn)羥基吡啶酮對(duì)重金屬有較好的絡(luò)合效果，在此基礎(chǔ)上，一系列以羥基吡啶酮為單體的多齒化合物被合成出來(lái)，其中，八齒配體3,4,3-li(1,2-hopo)和四齒配體5-lio(me-3,2-hopo)對(duì)錒系元素钚、镅、镎、鈾等有很好的促排效果。但是合成過(guò)程中涉及高溫高壓反應(yīng)，合成成本高；且3,4,3-li(1,2-hopo)合成難度高，產(chǎn)率低，毒性較大，不可大量使用；而5-lio(me-3,2-hopo)雖具有很好的廣譜促排效果，但口服效果較差。在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)明人發(fā)現(xiàn)羥基吡啶酮類(lèi)的配體與放射性元素或重金屬元素絡(luò)合能力強(qiáng)，且生物相容性好，比目前市面上售賣(mài)的dtpa的促排效果要好很多。因此，發(fā)明人設(shè)計(jì)合成了一系列羥基吡啶酮類(lèi)的配體，研究其性能及應(yīng)用。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種羥基吡啶酮配體及應(yīng)用，該類(lèi)配體合成條件溫和、安全、產(chǎn)率高；成本低；促排效果好。
在一方面，本發(fā)明提供了一種羥基吡啶酮配體，結(jié)構(gòu)式為：
其中，r為
r1為氫、c2-c4烷基、鹵素、羥基或羧基；
m，n，p獨(dú)立地選自1,2或3；
r為1或2。
在另一方面，本發(fā)明還提供了一種上述羥基吡啶酮配體的制備方法，包括以下步驟：
(1)將式(1)所示的化合物溶于有機(jī)溶劑，然后與端氨基化合物在催化劑的作用下在25-35℃下發(fā)生反應(yīng)，式(1)所示的化合物中的羧基與端氨基化合物中的氨基反應(yīng)生成酰胺鍵，得到中間體化合物；
(2)將步驟(1)得到的中間體化合物在有機(jī)溶劑中發(fā)生鈀碳還原反應(yīng)，得到羥基吡啶酮配體；
式(1)所示的化合物的結(jié)構(gòu)式如下：
其中，r1為氫、c2-c4烷基、鹵素、羥基或羧基。
進(jìn)一步地，在步驟(1)中，有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、水和四氫呋喃中的一種或幾種。
進(jìn)一步地，在步驟(2)中，有機(jī)溶劑為甲醇或n,n-二甲基甲酰胺。
進(jìn)一步地，在步驟(1)中，式(1)所示的化合物的制備方法包括以下步驟：
(s1)將式(a1)所示的化合物與鹵代乙酸乙酯在145-150℃下發(fā)生反應(yīng)，得到式(b1)所示的化合物；
(s2)將式(b1)所示的化合物與鹵化芐在堿性條件下于80-90℃下發(fā)生反應(yīng)，得到式(1)所示的化合物；
反應(yīng)路線(xiàn)如下：
其中，x代表溴或氯；
r1為氫、c2-c4烷基、鹵素、羥基或羧基。
進(jìn)一步地，在步驟(s1)中，鹵代乙酸乙酯在145-150℃下，可以將原料溶解，作為該步反應(yīng)的溶劑。
進(jìn)一步地，在步驟(s2)中，反應(yīng)時(shí)使用的溶劑為甲醇和水或乙醇和水。
進(jìn)一步地，在步驟(s2)中，在ph值為12-14的堿性條件下反應(yīng)。該堿性條件為強(qiáng)堿性，使用的堿為氫氧化鈉或氫氧化鉀。
進(jìn)一步地，在步驟(1)中，有機(jī)溶劑為n,n-二甲基甲酰胺或四氫呋喃。
進(jìn)一步地，在步驟(1)中，端氨基化合物為：
其中，m，n，p獨(dú)立地選自1,2或3；
r為1或2。
進(jìn)一步地，在步驟(1)中，端氨基化合物與式(1)所示的化合物的摩爾比為1:1-6:1。
進(jìn)一步地，在步驟(2)中，羥基吡啶酮配體的結(jié)構(gòu)式為：
其中，r為
r1為氫、c2-c4烷基、鹵素、羥基或羧基；
m，n，p獨(dú)立地選自1,2或3；
r為1或2。
在又一方面，本發(fā)明提供了上述羥基吡啶酮配體作為鑭系元素、錒系元素和/或重金屬元素促排劑的應(yīng)用。
進(jìn)一步地，錒系元素為u、th、np、pu或am；鑭系元素為eu、ce、pr、nd、la、lu或gd；重金屬元素為pb或hg。
進(jìn)一步地，本發(fā)明還要求保護(hù)羥基吡啶酮配體作為核廢料中的元素促排劑的應(yīng)用，其中，核廢料中的元素為sr、cs、tc或i。
借由上述方案，本發(fā)明至少具有以下優(yōu)點(diǎn)：
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明在吡啶環(huán)1位氮上引入羧基比在4位上要簡(jiǎn)單，不涉及高溫高壓反應(yīng)，合成路線(xiàn)更安全，成本更低；在配體結(jié)構(gòu)方面，現(xiàn)有技術(shù)中以1-甲基-3-羥基-2-吡啶酮(me-3,2-hopo)為單體合成的配體，在吡啶環(huán)4位上引入羧基后酰胺化，酰胺鍵中的氫原子與吡啶環(huán)上羥基中的氧原子形成氫鍵，但該氧原子因氫鍵作用，在與金屬絡(luò)合時(shí)會(huì)受到限制，本發(fā)明在1位氮上引入羧基得到的配體分子內(nèi)不存在氫鍵，更容易與金屬配體絡(luò)合；在促排效果方面，以3,2-hopo(3-羥基-2-吡啶酮)為單體合成的配體對(duì)錒系元素促排有很好的效果，且毒性小。
上述說(shuō)明僅是本發(fā)明技術(shù)方案的概述，為了能夠更清楚了解本發(fā)明的技術(shù)手段，并可依照說(shuō)明書(shū)的內(nèi)容予以實(shí)施，以下以本發(fā)明的較佳實(shí)施例并配合詳細(xì)說(shuō)明如下。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式作進(jìn)一步詳細(xì)描述。以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例11,3-雙[(3-羥基-2-吡啶酮)-1-乙基]乙酰胺基-丙二氨(3,2-hopo-3c)的合成
本實(shí)施例的合成路線(xiàn)如下：
具體包括以下步驟：
稱(chēng)取2,3-二羥基吡啶11.1g(上圖中(1)，0.1mol)于反應(yīng)燒瓶中，加入83.5g溴乙酸乙酯(0.5mol)后，將n2通到反應(yīng)液面以下攪拌1h，然后在n2保護(hù)，150℃下回流反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)瓶從油浴移出，冷卻至室溫，析出固體，然后過(guò)濾反應(yīng)液，將固體用丙酮洗3-5次后，用乙醇重結(jié)晶。在真空干燥箱中干燥24h后得到米白色產(chǎn)物(2)，產(chǎn)量為13.7g，產(chǎn)率70％。其核磁和質(zhì)譜測(cè)試結(jié)果如下：
1hnmr(400mhz,dmso)δ7.43-7.36(m,2h),7.34-7.21(m,3h),6.87(dd,j＝6.9,1.6hz,1h),6.64(dd,j＝7.4,1.6hz,1h),5.99(dd,j＝7.4,6.9hz,1h),5.04(s,2h),4.62(s,2h),4.18(q,j＝7.1hz,2h),1.23(t,j＝7.1hz,3h)；lc-ms[m+h+]m/z:198.07。
取上述產(chǎn)物(2)10g(0.05mol)溶于300ml的90％甲醇水溶液中，然后用naoh水溶液將溶液ph調(diào)至12左右，然后加入25g(0.2mol)芐基氯，在ph＝12的條件下，80℃回流反應(yīng)8h。反應(yīng)過(guò)程中溶液由無(wú)色慢慢變成紅褐色。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)降至室溫，旋蒸掉反應(yīng)液中的甲醇。向剩余反應(yīng)液中加100mlh2o，用二氯甲烷萃取水溶液每次使用50ml，萃取兩次，用稀鹽酸將反應(yīng)液調(diào)至ph＝1直至沉淀生成。過(guò)濾沉淀后在真空干燥箱中干燥24h。用甲醇重結(jié)晶后烘干，得到白色針狀晶體(3)(10.8g,83％)。其核磁和質(zhì)譜測(cè)試結(jié)果如下：
1hnmr(400mhz,dmso)δ7.44-7.39(m,2h),7.39-7.32(m,3h),7.26(d,j＝6.4hz,1h),6.92(d,j＝7.2hz,1h),6.15(t,j＝7.2hz,1h),5.01(s,2h),4.61(s,2h)；lc-ms[m+h+]m/z:260.09。
稱(chēng)取產(chǎn)物(3)5g(0.019mol)于圓底燒瓶中，加入100mldmf置于冰浴中攪拌溶解后，稱(chēng)取n-羥基琥珀酰亞胺(nhs,2.3g,0.02mol)加入反應(yīng)瓶中攪拌溶解；加入(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽)(edc,3.82g,0.02mol)攪拌溶解后，將反應(yīng)移至室溫?cái)嚢?h，將(3)中的羧基活化。然后取1,3-丙二胺0.62g(0.0083mol)加入反應(yīng)液中，室溫下攪拌過(guò)夜。反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸去掉dmf后，加入50ml水后有白色固體析出，攪拌均勻后過(guò)濾，得到白色固體，真空干燥得到產(chǎn)物(4)(4.05g,80％)。
稱(chēng)取產(chǎn)物(4)3.78g(0.0068mol)于圓底燒瓶中，加入100ml甲醇攪拌溶解后，稱(chēng)取一定量的5％的pd/c慢慢加入反應(yīng)液中，通入h2攪拌4h，反應(yīng)過(guò)程中黑色的混合液慢慢變成灰白色混合液，證明有產(chǎn)物析出，反應(yīng)4h后停止通h2。反應(yīng)結(jié)束后，過(guò)濾得到固體，固體為pd/c和產(chǎn)物混合物，加入50mldmf后在80℃下加熱攪拌，直至溶液變成黑色懸浮液，證明只剩pd/c，過(guò)濾后濾液旋蒸，得到暗紅色固體，真空干燥得到產(chǎn)物(5)(2.30g,90％)，即為3,2-hopo-3c。該產(chǎn)物核磁結(jié)果如下：
1hnmr(400mhz,dmso)δ8.97(s,1h),8.23-8.20(t,j＝6.8hz,1h),7.07-7.06(d,j＝6.8hz,1h),7.07-7.06(d,j＝6.8hz,1h),6.08-6.05(t,j＝6.8,7.2hz,1h),4.51(s,2h),3.07-3.04(t,j＝5.6,5.2hz,2h),2.46-2.43(dd,j＝4.8hz,2h)。
實(shí)施例22,2'-氧雙[(3-羥基-2-吡啶酮)-1-乙基]乙酰胺基-乙胺(3,2-hopo-2no)的合成
本實(shí)施例的合成路線(xiàn)如下：
具體包括以下步驟：
稱(chēng)取2,3-羥基吡啶11.1g(上圖中(1)，0.1mol)于反應(yīng)燒瓶中，加入83.5g溴乙酸乙酯(0.5mol)后，將n2通到反應(yīng)液面以下攪拌1h，然后在n2保護(hù)，150℃下回流反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)瓶從油浴移出，冷卻至室溫，析出固體，然后過(guò)濾反應(yīng)液，將固體用丙酮洗3-5次后，用乙醇重結(jié)晶。在真空干燥箱中干燥24h后得到米白色產(chǎn)物(2)，產(chǎn)量為13.7g，產(chǎn)率70％。
取上述產(chǎn)物(2)10g(0.05mol)溶于300ml的90％甲醇水溶液中，然后用naoh水溶液將溶液ph調(diào)至12左右，然后加入25g(0.2mol)芐基氯，在ph＝12的條件下，80℃回流反應(yīng)8h。反應(yīng)過(guò)程中溶液由無(wú)色慢慢變成紅褐色。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)降至室溫，旋蒸掉反應(yīng)液中的甲醇。向剩余反應(yīng)液中加100mlh2o，用二氯甲烷萃取水溶液每次使用50ml，萃取兩次，用稀鹽酸將反應(yīng)液調(diào)至ph＝1直至沉淀生成。過(guò)濾沉淀后在真空干燥箱中干燥24h。用甲醇重結(jié)晶后烘干，得到白色針狀晶體(3)(10.8g,83％)。
稱(chēng)取產(chǎn)物(3)5g(0.019mol)于圓底燒瓶中，加入100mldmf置于冰浴中攪拌溶解后，稱(chēng)取n-羥基琥珀酰亞胺(nhs,2.3g,0.02mol)加入反應(yīng)瓶中攪拌溶解；加入(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽)(edc,3.82g,0.02mol)攪拌溶解后，將反應(yīng)移至室溫?cái)嚢?h，將(3)中的羧基活化。然后取2,2'-氧雙(乙胺)(0.88g,0.008mol)加入反應(yīng)液中，室溫下攪拌過(guò)夜。反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸去掉dmf后，加入50ml水后有白色固體析出，攪拌均勻后過(guò)濾，得到白色固體，真空干燥得到產(chǎn)物(4)(4.37g,82％)。其核磁和質(zhì)譜測(cè)試結(jié)果如下：
1hnmr(400mhz,dmso)δ8.23-8.20(t,j＝6.8hz,1h),7.44-7.39(m,2h),7.39-7.32(m,3h),7.07-7.06(d,j＝6.8hz,1h),7.07-7.06(d,j＝6.8hz,1h),6.08-7.05(t,j＝6.8,7.2hz,1h),5.01(s,2h),4.57(s,2h),3.45-3.42(t,j＝5.6,5.2hz,2h),3.28-3.24(dd,j＝4.8hz,2h)；lc-ms[m+h+]m/z:643.25。
稱(chēng)取產(chǎn)物(4)3.78g(0.0068mol)于圓底燒瓶中，加入100ml甲醇攪拌溶解后，稱(chēng)取一定量的5％的pd/c慢慢加入反應(yīng)液中，通入h2攪拌4h，反應(yīng)過(guò)程中黑色的混合液慢慢變成灰白色混合液，證明有產(chǎn)物析出，反應(yīng)4h后停止通h2。反應(yīng)結(jié)束后，過(guò)濾得到固體，固體為pd/c和產(chǎn)物混合物，加入50mldmf后在80℃下加熱攪拌，直至溶液變成黑色懸浮液，證明只剩pd/c，過(guò)濾后濾液旋蒸，得到米白色色固體，真空干燥得到產(chǎn)物(5)(1.5g，90％)，即為3,2-hopo-2no。其核磁和質(zhì)譜測(cè)試結(jié)果如下：
1hnmr(400mhz,dmso)δ8.97(s,1h),8.23-8.20(t,j＝6.8hz,1h),7.07-7.06(d,j＝6.8hz,1h),7.07-7.06(d,j＝6.8hz,1h),6.08-7.05(t,j＝6.8,7.2hz,1h),4.57(s,2h),3.45-3.42(t,j＝5.6,5.2hz,2h),3.28-3.24(dd,j＝4.8hz,2h)；lc-ms[m+h+]m/z:407.15。
實(shí)施例33,3'-氧雙[(3-羥基-2-吡啶酮)-1-乙基]乙酰胺基-丙胺(3,2-hopo-3no)的合成
本實(shí)施例的合成路線(xiàn)如下：
具體包括以下步驟：
稱(chēng)取2,3-羥基吡啶11.1g(上圖中(1)，0.1mol)于反應(yīng)燒瓶中，加入83.5g溴乙酸乙酯(0.5mol)后，將n2通到反應(yīng)液面以下攪拌1h，然后在n2保護(hù)，150℃下回流反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)瓶從油浴移出，冷卻至室溫，析出固體，然后過(guò)濾反應(yīng)液，將固體用丙酮洗3-5次后，用乙醇重結(jié)晶。在真空干燥箱中干燥24h后得到米白色產(chǎn)物(2)，產(chǎn)量為13.7g，產(chǎn)率70％。
取上述產(chǎn)物(2)10g(0.05mol)溶于300ml的90％甲醇水溶液中，然后用naoh水溶液將溶液ph調(diào)至12左右，然后加入25g(0.2mol)芐基氯，在ph＝12的條件下，80℃回流反應(yīng)8h。反應(yīng)過(guò)程中溶液由無(wú)色慢慢變成紅褐色。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)降至室溫，旋蒸掉反應(yīng)液中的甲醇。向剩余反應(yīng)液中加100mlh2o，用二氯甲烷萃取水溶液每次使用50ml，萃取兩次，用稀鹽酸將反應(yīng)液調(diào)至ph＝1直至沉淀生成。過(guò)濾沉淀后在真空干燥箱中干燥24h。用甲醇重結(jié)晶后烘干，得到白色針狀晶體(3)(10.8g,83％)。
稱(chēng)取產(chǎn)物(3)5g(0.019mol)于圓底燒瓶中，加入100mldmf置于冰浴中攪拌溶解后，稱(chēng)取n-羥基琥珀酰亞胺(nhs,2.3g,0.02mol)加入反應(yīng)瓶中攪拌溶解；加入(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽)(edc,3.82g,0.02mol)攪拌溶解后，將反應(yīng)移至室溫?cái)嚢?h，將(3)中的羧基活化。然后取3,3'-氧三(乙胺)(0.92g,0.008mol)加入反應(yīng)液中，室溫下攪拌過(guò)夜。反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸去掉dmf后，加入50ml水后有白色固體析出，攪拌均勻后過(guò)濾，得到白色固體，真空干燥得到產(chǎn)物(4)(4.8g,85％)。
稱(chēng)取產(chǎn)物(4)3.78g(0.0068mol)于圓底燒瓶中，加入100ml甲醇攪拌溶解后，稱(chēng)取一定量的5％的pd/c慢慢加入反應(yīng)液中，通入h2攪拌4h，反應(yīng)過(guò)程中黑色的混合液慢慢變成灰白色混合液，證明有產(chǎn)物析出，反應(yīng)4h后停止通h2。反應(yīng)結(jié)束后，過(guò)濾得到固體，固體為pd/c和產(chǎn)物混合物，加入50mldmf后在80℃下加熱攪拌，直至溶液變成黑色懸浮液，證明只剩pd/c，過(guò)濾后濾液旋蒸，得到米白色固體，真空干燥得到產(chǎn)物(5)(1.7g，90％)，即為3,2-hopo-3no。其核磁和質(zhì)譜測(cè)試結(jié)果如下：
1hnmr(400mhz,dmso)δ8.97(s,1h),8.23-8.20(t,j＝6.8hz,1h),7.07-7.06(d,j＝6.8hz,1h),7.07-7.06(d,j＝6.8hz,1h),6.08-7.05(t,j＝6.8,7.2hz,1h),4.51(s,2h),3.37-3.38(t,j＝5.6,5.2hz,2h),3.18-3.10(dd,j＝4.8hz,2h),1.62-1.65(dd,j＝5.6hz,2h)；lc-ms[m+h+]m/z:433.18。
實(shí)施例43,2-hopo-2no對(duì)uo2的促排效果
鈾(u)在進(jìn)入人體后，以u(píng)(vi)的形式穩(wěn)定富集在腎臟和骨骼，鈾的腎毒性損傷腎的正常代謝，影響腎的機(jī)能。鈾主要沉積在腎臟的腎小管上皮細(xì)胞中，本發(fā)明采用小鼠的腎小管上皮細(xì)胞nrk研究3,2-hopo-2no對(duì)uo2的促排效果。
(1)cck-8法測(cè)不同濃度鈾染毒的細(xì)胞存活率
取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期nrk細(xì)胞，用含10％gibco胎牛血清的1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為3×104個(gè)/ml，接種于無(wú)菌的96孔培養(yǎng)板中，分為正常對(duì)照組、染毒組和空白組。每組設(shè)6個(gè)平行孔，每孔100μl，置于37℃5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)后，棄去培養(yǎng)液，加入用培養(yǎng)基稀釋的不同濃度的硝酸鈾培養(yǎng)液100μl，染毒組終濃度分別為6.2、12.4、24.8、49.6、89.2μm，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)48h后，實(shí)驗(yàn)終止后每孔加入10μlcck-8，繼續(xù)孵育1-2h，用酶標(biāo)儀于450nm波長(zhǎng)處測(cè)定每孔的光吸收值(od)。按下式計(jì)算細(xì)胞的存活率。細(xì)胞存活率＝(試驗(yàn)組od值-空白組od值)/(對(duì)照組od值-空白組od值)×100％。表1為不同濃度鈾染毒的細(xì)胞存活率測(cè)試結(jié)果：
表1不同濃度鈾染毒的細(xì)胞存活率
如表1所示，隨著鈾酰濃度的升高，細(xì)胞的存活率降低。為保證一定的細(xì)胞存活率，本發(fā)明選用12.4μm的濃度進(jìn)行細(xì)胞的綜合毒性實(shí)驗(yàn)和促排實(shí)驗(yàn)。
(2)cck-8法測(cè)uo2和hopo染毒細(xì)胞的存活率
細(xì)胞接種方法同上，分為空白組和染毒加藥組(dtpa，3,2-hopo-2no)組。每組設(shè)6個(gè)平行孔，每孔100μl，置于37℃5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)后，棄去培養(yǎng)液，染毒加藥組加入12.4μmuo2和不同濃度的3,2-hopo-2no和dtpa配體，使配體終濃度20、40、80、160、320μm。對(duì)照組加入相同體積的培養(yǎng)基。加藥后置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)48h后，每孔加入10μlcck-8，繼續(xù)孵育1-2h，用酶標(biāo)儀于450nm波長(zhǎng)處測(cè)定每孔的光吸收值(od)。按下式計(jì)算細(xì)胞的存活率。細(xì)胞存活率＝(試驗(yàn)組od值-空白組od值)/(對(duì)照組od值-空白組od值)×100％。表2為兩組實(shí)驗(yàn)測(cè)試結(jié)果：
表2不同對(duì)照組中的細(xì)胞存活率
從表2中可以看出，3,2-hopo-2no和鈾酰的綜合毒性與dtpa和鈾酰的綜合毒性相似，這說(shuō)明該藥物的細(xì)胞毒性是細(xì)胞可以接受的。
(3)細(xì)胞的促排實(shí)驗(yàn)
取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期nrk細(xì)胞，用含10％gibco胎牛血清的1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為1×105個(gè)/ml，接種于無(wú)菌的6孔培養(yǎng)板中，每孔2ml。置于37℃5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)后，棄去培養(yǎng)液，采用6.24μm的硝酸鈾酰染毒nrk細(xì)胞，分別加入含320μm的dtpa-znna3和3,2-hopo-2no的新鮮培養(yǎng)基2ml繼續(xù)培養(yǎng)，以dtpa-cana3為陽(yáng)性對(duì)照組，對(duì)照組只加硝酸鈾酰。鈾染毒48h后，收集細(xì)胞并計(jì)數(shù)，取106個(gè)細(xì)胞，加入王水消解后，采用icp-ms檢測(cè)樣品的鈾含量，再乘以稀釋倍數(shù)和除以細(xì)胞數(shù)，換算成細(xì)胞內(nèi)再乘以稀釋倍數(shù)，得到鈾含量/106個(gè)細(xì)胞，結(jié)果如表3所示：
表3不同對(duì)照組對(duì)鈾元素的促排效果
從表3中可以看出，在細(xì)胞水平上，3,2-hopo-2no可以有效抑制鈾進(jìn)入細(xì)胞及加速細(xì)胞中鈾的排出，而dtpa效果不明顯。
實(shí)施例73,2-hopo-2no對(duì)生物個(gè)體水平促排的效果
取15只sd大鼠，隨機(jī)分為3組，1個(gè)對(duì)照組，2個(gè)給藥組，每組5只。在促排試驗(yàn)中，對(duì)照組和給藥組大鼠分別尾靜脈注射硝酸鈾酰(vi)染毒，染毒劑量為0.50mgu/kg，染毒后立即予以腹腔注射給藥，鈾染毒對(duì)照組腹腔注射相當(dāng)體積生理鹽水。將大鼠置于代謝籠中飼養(yǎng)，收集給藥24h后的糞便和尿液；24h后麻醉處死，取肝、脾、腎和股骨。取部分尿和糞及大鼠組織與器官，加入濃硝酸/高氯酸組成的混合酸，置平板電熱板上消化處理，采用icp-ms測(cè)定各個(gè)樣品中的鈾含量。計(jì)算出尿和糞中鈾排出量以及組織中鈾蓄積量，結(jié)果如表4所示：
表4不同對(duì)照組中各組織中的鈾蓄積量
從表4可以看出，配體3,2-hopo-2no可去除沉積在小鼠腎里67％的鈾，骨骼33％的鈾，效果比dtpa好，從尿液和糞便中的數(shù)據(jù)也可以看出hopo配體促進(jìn)排出的效果要比dtpa好。
以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，并不用于限制本發(fā)明，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明技術(shù)原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和變型，這些改進(jìn)和變型也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。