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一種NK細胞培養(yǎng)基及體外擴增NK細胞的方法與流程

文檔序號:12411444閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種NK細胞培養(yǎng)基,其特征在于,包括基礎培養(yǎng)基和添加物,所述添加物各組分及濃度為:8-12g/L人血清白蛋白、2.5-7.5mmol/L尼克酰胺、0.5-2.0μmol/L來那度胺、8-16mmol/L HEPES。

2.根據(jù)權利要求1所述的NK細胞培養(yǎng)基,其特征在于,所述基礎培養(yǎng)基為MEM-alpha培養(yǎng)基。

3.根據(jù)權利要求2所述的NK細胞培養(yǎng)基,其特征在于,所述添加物各組分及濃度為:9-11g/L人血清白蛋白、3.5-6.5mmol/L尼克酰胺、0.8-1.5μmol/L來那度胺、9-15mmol/L HEPES。

4.根據(jù)權利要求3所述的NK細胞培養(yǎng)基,其特征在于,所述添加物各組分及濃度為:10g/L人血清白蛋白、5mmol/L尼克酰胺、1.0μmol/L來那度胺、10mmol/L HEPES。

5.一種體外擴增NK細胞的方法,其特征在于,包括以下步驟:

將制備的NK細胞懸于NK細胞培養(yǎng)基中,并將懸有NK細胞的培養(yǎng)基轉移至細胞培養(yǎng)瓶中,NK細胞的密度為4.5×106-5.5×106個/20ml;

在所述細胞培養(yǎng)瓶中加入體積比為15%-25%的自體血漿及5-15μg/ml抗Her-2單克隆抗體、950-1050U/ml重組人IL-2、25-35ng/ml重組人IL-15、5-15ng/ml重組人IL-21,并將所述細胞培養(yǎng)瓶置于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

間隔預定時間補加所述NK細胞培養(yǎng)基及950-1050U/ml重組人IL-2、25-35ng/ml重組人IL-15、5-15ng/ml重組人IL-21,當培養(yǎng)體系為90-110ml時,將細胞懸液轉移至細胞培養(yǎng)袋中培養(yǎng);

培養(yǎng)預定天數(shù)后,獲得擴增的NK細胞;

其中,所述NK細胞培養(yǎng)基包括基礎培養(yǎng)基和添加物,所述添加物各組分及濃度為:8-12g/L人血清白蛋白、2.5-7.5mmol/L尼克酰胺、0.5-2.0μmol/L來那度胺、8-16mmol/L HEPES。

6.根據(jù)權利要求5所述的體外擴增NK細胞的方法,其特征在于,初始懸于NK細胞培養(yǎng)基中的NK細胞的密度為5×106個/20ml。

7.根據(jù)權利要求6所述的體外擴增NK細胞的方法,其特征在于,所述自體血漿的濃度為體積比20%,所述抗Her-2單克隆抗體的濃度為10μg/ml,所述重組人IL-2的濃度為1000U/ml,所述重組人IL-15的濃度為30ng/ml,所述重組人IL-21的濃度為10ng/ml。

8.根據(jù)權利要求7所述的體外擴增NK細胞的方法,其特征在于,所述基礎培養(yǎng)基為MEM-alpha培養(yǎng)基。

9.根據(jù)權利要求8所述的體外擴增NK細胞的方法,其特征在于,所述添加物各組分及濃度為:10g/L人血清白蛋白、5mmol/L尼克酰胺、1.0μmol/L來那度胺、10mmol/L HEPES。

10.根據(jù)權利要求8所述的體外擴增NK細胞的方法,其特征在于,所述細胞培養(yǎng)袋為透氣細胞培養(yǎng)袋。

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