本發(fā)明涉及活性蛋白提取技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種提取紅豆活性蛋白的方法。
背景技術(shù)：
紅豆即海紅豆(學(xué)名:Adenanthera pavonina Linn. var. microsperma)豆科海紅豆屬，喬木，羽裝復(fù)葉，小葉長橢圓，圓錐花序，花白色，莢果扁平，種子鮮紅色，心材暗褐色，質(zhì)堅而耐腐，可為支柱、船舶、建筑用材和箱板，種子鮮紅色而光亮，甚為美麗，可作裝飾品，紅豆養(yǎng)心，自古就認為如果心火過旺，則很有可能會引發(fā)口瘡癤腫、頭暈、心悸、煩躁等不適癥狀。而紅豆則具有清熱去濕、消腫解毒、補血安神的功效，因此夏天的時候人們都會煮紅豆或者綠豆湯來解暑，也就是這個原因了，薏米紅豆粥也有有止血調(diào)理、清熱解毒的功能。
在現(xiàn)有蛋白質(zhì)提取技術(shù)中，例如一種提取綠豆活性蛋白的方法，CN102860406A，其包括：將綠豆浸泡、凍結(jié)與脫皮后與水按照質(zhì)量比1:2-3 的比例充分混合，然后將其進行充分研磨得到綠豆?jié){；將所述綠豆?jié){冷卻至0℃-4℃，然后將其加入膠體磨內(nèi)充分研磨八至十個循環(huán)得到料漿；將所述料漿在常溫下靜置后進行離心分離、低溫濃縮與干燥濃縮后，制得淡黃色的綠豆活性蛋白質(zhì)粉末，該發(fā)明通過脫皮、研磨、離心、溶出等物理提取方法，將蛋白與淀粉分離，提高了綠豆活性蛋白的制得率，該方法提取的活性蛋白的得率可高達86.7%，純度高達93.2%，在提取過程無需添加化學(xué)試劑，使該發(fā)明產(chǎn)品綠色環(huán)保，無污染。
該發(fā)明的提取活性蛋白步驟中，尚未去除蛋白質(zhì)中的色素，制備相對簡單，提取的活性蛋白純度相對較低。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種提取純度較高，蛋白含量優(yōu)質(zhì)，制備簡便的一種提取紅豆活性蛋白的方法。
為解決上述現(xiàn)有的技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下方案：一種提取紅豆活性蛋白的方法，包括以下提取步驟：
1）選取新鮮紅豆，將新鮮紅豆置于2-4倍的清水中浸泡，研磨粉碎至150-240目，得紅豆?jié){；
2）在紅豆?jié){中加入復(fù)合酶，酶解3.6-4.7h后滅酶10-22min，攪拌，回流浸提3-4次，合并得浸提液；
3）在浸提液中加入92-96%的乙醇，攪拌，浸泡14-22h，得沉淀物；
4）將沉淀物置于去離子水中并加入0.02-0.04%的脫色劑溶解，離心，超濾膜過濾，得粗制蛋白液；
5）將粗制蛋白液通過大孔樹脂純化，得洗脫液，干燥，得紅豆活性蛋白。
作為優(yōu)選，提取步驟1~5中溶液均處于低溫狀態(tài)，溫度為1-5℃，其中步驟2中酶解時溫度提升至51-54℃，在低溫中提取可防止蛋白質(zhì)的降解，可提高提取蛋白質(zhì)的純度。
作為優(yōu)選，步驟1中選取的新鮮紅豆均為除去豆皮的新鮮紅豆，浸泡時間為10-18h，去除豆皮便于紅豆與水接觸，提高紅豆有機物的溶解速度。
作為優(yōu)選，步驟2中所加入得復(fù)合酶為：通過纖維素酶和果膠酶按1:2-3.7的比例制備的混合物，按該比例制備的復(fù)合酶更有效的提高酶解效果。
作為優(yōu)選，步驟2中還需加入蛋白酶抑制劑，蛋白酶抑制劑為二異丙基氟磷酸或碘乙酸或亮肽素中的一種或兩種，在加溫酶解時防止蛋白質(zhì)的降解。
作為優(yōu)選，步驟3中乙醇加入量為浸提液得2-4倍，促使易容與乙醇的成分在乙醇中充分溶解，使蛋白質(zhì)等一些不溶于高濃度乙醇的沉淀，起到分離作用。
作為優(yōu)選，步驟4中脫色劑的成分及其重量份為：無水乙醇50-60份，硅藻土15-25份，活性炭15-25份，游離酸1-5份，氰鈷胺0.1-0.2份，硫氰酸胍0.01-0.02份，去除蛋白質(zhì)中含有的色素，提高提取蛋白質(zhì)的純度。
作為優(yōu)選，步驟4中超濾膜過濾采用截留分子量為6000-10000Dal的超濾膜，去除雜質(zhì)，體高純度。
作為優(yōu)選，步驟5中大孔樹脂純化時先用92-95%的乙醇溶液以1-2.2BV/h的洗脫流速進行洗脫，再用84-90%的乙醇溶液以1.3-2.3BV/h的洗脫流速進行洗脫，最后用蒸餾水以1.4-2.7BV/h的洗脫流速進行洗脫，進行梯度洗過，純化濃度更高。
有益效果：本發(fā)明提供的這種提取紅豆活性蛋白的方法，去除了活性蛋白質(zhì)內(nèi)的色素，提高了活性蛋白質(zhì)的純度，提取步驟簡單，操作方便。氰鈷胺和硫氰酸胍通過活性炭具有促進色素脫除的作用，從而使蛋白純度更高，本發(fā)明采用了上述技術(shù)方案提供一種提取紅豆活性蛋白的方法，彌補了現(xiàn)有技術(shù)的不足，設(shè)計合理，操作方便。
具體實施方式
以下實施例作進一步詳細描述：
實施例1：
一種提取紅豆活性蛋白的方法，包括以下提取步驟：
1）選取新鮮紅豆，將新鮮紅豆置于4倍的清水中浸泡，研磨粉碎至180目，得紅豆?jié){；
2）在紅豆?jié){中加入復(fù)合酶，酶解4.7h后滅酶22min，攪拌，回流浸提4次，合并得浸提液；
3）在浸提液中加入96%的乙醇，攪拌，浸泡22h，得沉淀物；
4）將沉淀物置于去離子水中并加入0.04%的脫色劑溶解，離心，超濾膜過濾，得粗制蛋白液；
5）將粗制蛋白液通過大孔樹脂純化，得洗脫液，干燥，得紅豆活性蛋白。
提取步驟1~5中溶液均處于低溫狀態(tài)，溫度為3℃，其中步驟2中酶解時溫度提升至51℃，在低溫中提取可防止蛋白質(zhì)的降解，可提高提取蛋白質(zhì)的純度。
步驟1中選取的新鮮紅豆均為除去豆皮的新鮮紅豆，浸泡時間為18h，去除豆皮便于紅豆與水接觸，提高紅豆有機物的溶解速度。
步驟2中所加入得復(fù)合酶為：通過纖維素酶和果膠酶按1:3.7的比例制備的混合物，按該比例制備的復(fù)合酶更有效的提高酶解效果。
步驟2中還需加入蛋白酶抑制劑，蛋白酶抑制劑為二異丙基氟磷酸或碘乙酸或亮肽素中的一種或兩種，在加溫酶解時防止蛋白質(zhì)的降解。
步驟3中乙醇加入量為浸提液得4倍，促使易容與乙醇的成分在乙醇中充分溶解，使蛋白質(zhì)等一些不溶于高濃度乙醇的沉淀，起到分離作用。
步驟4中脫色劑的成分及其重量份為：無水乙醇50份，硅藻土25份，活性炭15份，游離酸1份，氰鈷胺0.1份，硫氰酸胍0.02份，去除蛋白質(zhì)中含有的色素，提高提取蛋白質(zhì)的純度。
步驟4中超濾膜過濾采用截留分子量為8000Dal的超濾膜，去除雜質(zhì)，體高純度。
步驟5中大孔樹脂純化時先用95%的乙醇溶液以2.2BV/h的洗脫流速進行洗脫，再用90%的乙醇溶液以2.3BV/h的洗脫流速進行洗脫，最后用蒸餾水以2.7BV/h的洗脫流速進行洗脫，進行梯度洗過，純化濃度更高。
步驟1~5中的常規(guī)技術(shù)為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知曉的現(xiàn)有技術(shù)，在此不作詳細敘述。
實施例2：
一種提取紅豆活性蛋白的方法，1）選取新鮮紅豆，其中選取的新鮮紅豆均為除去豆皮的新鮮紅豆，去除豆皮便于紅豆與水接觸，提高紅豆有機物的溶解速度，將新鮮紅豆置于3倍的清水中浸泡，浸泡時間為15h，研磨粉碎至240目，得紅豆?jié){；2）在紅豆?jié){中加入復(fù)合酶，加溫至53℃增強酶的活性，提高酶解，酶解4.2h后滅酶19min，酶解過程中還需加入0.3%的蛋白酶抑制劑，蛋白酶抑制劑為二異丙基氟磷酸或碘乙酸或亮肽素中的一種或兩種，在加溫酶解時防止蛋白質(zhì)的降解，攪拌，回流浸提4次，每次浸提的時間為16h，合并得浸提液，其中復(fù)合酶為：通過纖維素酶和果膠酶按1:2.9的比例制備的混合物，按該比例制備的復(fù)合酶更有效的提高酶解效果；3）在浸提液中加入96%的乙醇，乙醇加入量為浸提液得3倍，攪拌，浸泡22h，得沉淀物，促使易容與乙醇的成分在乙醇中充分溶解，使蛋白質(zhì)等一些不溶于高濃度乙醇的沉淀，起到分離作用；4）將沉淀物置于去離子水中并加入0.04%的脫色劑溶解，離心，超濾膜過濾時采用截留分子量為8000Dal的超濾膜，去除雜質(zhì)，體高純度，得粗制蛋白液；5）將粗制蛋白液通過大孔樹脂純化，得洗脫液，干燥，得紅豆活性蛋白，大孔樹脂純化時先用93%的乙醇溶液以2.1BV/h的洗脫流速進行洗脫，再用85%的乙醇溶液以2.3BV/h的洗脫流速進行洗脫，最后用蒸餾水以2.5BV/h的洗脫流速進行洗脫，進行梯度洗過，純化濃度更高。
本文中所描述的具體實施例僅僅是對本發(fā)明作舉例說明。本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員可以對所描述的具體實施例做各種各樣的修改或補充或采用類似的方式替代，但并不會偏離本發(fā)明的或者超越所附權(quán)利要求書所定義的范圍。