本發(fā)明屬于精細(xì)化學(xué)品合成領(lǐng)域，尤其是涉及一種6-蝶呤基葉酸的合成方法。

背景技術(shù)：

葉酸又名碟酰谷氨酸，b族維生素之一，是氨基酸、嘧啶和嘌呤代謝中單碳轉(zhuǎn)移的載體，對(duì)核蛋白的合成起輔酶作用；同時(shí)，葉酸也是許多細(xì)胞內(nèi)酶反應(yīng)的輔酶；葉酸的缺乏，會(huì)導(dǎo)致dtmp的合成受到限制，使dna合成受阻，而產(chǎn)生巨幼細(xì)胞貧血。目前的研究已經(jīng)證實(shí)，婦女孕前或妊娠早期缺乏葉酸是神經(jīng)管畸形發(fā)生的重要病因之一。葉酸與同型半胱氨酸代謝關(guān)系密切，對(duì)預(yù)防心腦血管疾病的發(fā)生具有重要的生物學(xué)意義。而且，也有研究表明，葉酸與許多癌癥的發(fā)生、預(yù)防以及治療相關(guān)。

植物和微生物可在體內(nèi)從頭合成葉酸，而動(dòng)物則不能，對(duì)人類(lèi)而言，植物是人類(lèi)最主要的葉酸來(lái)源。研究表明，世界上大多數(shù)國(guó)家的人群葉酸的攝入量都不理想，因此，利用基因工程改造植物，使其體內(nèi)葉酸含量顯著提高，就成為解決世界范圍內(nèi)葉酸缺乏癥的最新選擇。

四氫葉酸(thf)及其衍生物通常都稱為葉酸，葉酸分子由喋呤、對(duì)氨基苯甲酸(paba)和谷氨酸三部分組成。在不同的氧化條件下一碳單位連接于喋呤的n-5位置或是對(duì)氨基苯甲酸的n-10位置,或是連接在二者之間。通常人們所說(shuō)的葉酸為l-構(gòu)型(l-folicacid)，葉酸雜質(zhì)包括d-葉酸(d-folicacid)、葉酸雜質(zhì)-e(6-蝶呤基葉酸，6-pterinylfolicacid)、高葉酸(homofolicacid)、異高葉酸(isohomofolicacid)等，在檢測(cè)葉酸時(shí)要確定含有哪些雜質(zhì)，以及準(zhǔn)確的測(cè)量出葉酸中的雜質(zhì)和每種雜質(zhì)的含量，因此，必須要提供雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明旨在提出一種6-蝶呤基葉酸的合成方法，制得一種葉酸雜質(zhì)的高純度標(biāo)準(zhǔn)品，以便準(zhǔn)確、有效的檢測(cè)出葉酸中該種雜質(zhì)的含量。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：

一種6-蝶呤基葉酸的合成方法，包括如下步驟：

(1)將化合物1蝶酸與化合物2谷氨酸二叔丁酯鹽酸鹽加入到二甲基甲酰胺(dmf)中，加入縮合劑和輔助試劑，在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，將反應(yīng)液倒入蒸餾水中，析出的固體經(jīng)過(guò)濾，用蒸餾水洗滌，得到固體粗品，濾液用乙酸乙酯萃取，干燥，除去溶劑，得到固體粗品，將兩部分固體合并，真空干燥，得粗品化合物3；

(2)將所述的粗品化合物3加入到二甲基甲酰胺(dmf)和n-甲基吡咯烷酮(nmp)的混合液中，然后加入化合物4蝶呤甲基溴化物，混合物于室溫至60℃攪拌4-48小時(shí)，反應(yīng)液冷卻至室溫后倒入蒸餾水中，析出的固體經(jīng)過(guò)濾，蒸餾水洗滌，干燥得棕色固體化合物5；

(3)將所述的棕色固體化合物5溶于三氟乙酸(tfa)和二氯甲烷(dcm)的混合溶劑中，混合物于室溫?cái)嚢?-12小時(shí)，脫去叔丁基保護(hù)基團(tuán)，將溶劑濃縮至約5ml，在攪拌下緩慢加入蒸餾水，析出棕色固體，固體經(jīng)過(guò)濾，蒸餾水洗滌，真空干燥后重新溶解于三氟乙酸中，再次加入蒸餾水，析出的固體經(jīng)過(guò)濾、蒸餾水洗滌，真空干燥后得到棕色固體6-蝶呤基葉酸；

其化學(xué)方程式為：

進(jìn)一步，所述的步驟(1)中的縮合劑為o-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(hbtu)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(hatu)，6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(hctu)、二環(huán)己基碳二亞胺(dcc)、n,n'-二異丙基碳二亞胺(dic)或(1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亞胺)(edci)中的至少一種。

進(jìn)一步，所述的步驟(1)中的輔助試劑為1-羥基苯并三唑(hobt)、二異丙基乙基胺(dipea)、三乙胺(tea)或4-二甲氨基吡啶(dmap)中的至少一種

進(jìn)一步，所述的縮合劑為hbtu，所述的輔助試劑為dipea與hobt的混合物；其中，所述的hbtu的用量為1-10當(dāng)量，所述的hobt的用量為1-10當(dāng)量，所述的dipea用量為1-50當(dāng)量。

進(jìn)一步，所述的步驟(1)中化合物1與化合物2的摩爾比為1：(1-10)；所述的二甲基甲酰胺的用量為每毫摩爾化合物1加二甲基甲酰胺1-100ml。

進(jìn)一步，所述的步驟(2)中化合物3與dmf和nmp的質(zhì)量體積比為1g:(1-100)ml；其中，所述的混合液中dmf和nmp的體積比為100：(1-100)。

進(jìn)一步，所述的步驟(3)中化合物5與三氟乙酸和二氯甲烷的混合溶劑的質(zhì)量比為1：(1-100)；其中，所述的混合溶劑中三氟乙酸的體積含量為20-100％。

進(jìn)一步，所述的步驟(3)中得到的棕色固體6-蝶呤基葉酸的純度為70-80％。

所述的合成方法制備得到的6-蝶呤基葉酸的用途，所述的6-蝶呤基葉酸用于葉酸的質(zhì)譜檢測(cè)雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品。

相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明所述的6-蝶呤基葉酸的合成方法具有以下優(yōu)勢(shì)：

本發(fā)明所述的6-蝶呤基葉酸的合成方法可用于大量制備葉酸雜質(zhì)6-蝶呤基葉酸的標(biāo)準(zhǔn)品，純度可達(dá)70-80％；該方法簡(jiǎn)單，可準(zhǔn)確、有效的檢測(cè)出葉酸中雜質(zhì)6-蝶呤基葉酸的含量。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明實(shí)施例所述的6-蝶呤基葉酸的制備路線。

具體實(shí)施方式

除有定義外，以下實(shí)施例中所用的技術(shù)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人員普遍理解的相同含義。以下實(shí)施例中所用的試驗(yàn)試劑，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)生化試劑；所述實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。

下面結(jié)合實(shí)施例及附圖來(lái)詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明。

實(shí)施例1

一種6-蝶呤基葉酸的合成方法，包括如下步驟：

(1)化合物3的合成：將化合物1蝶酸(4g，12.8mmol)和化合物2谷氨酸二叔丁酯鹽酸鹽(4.9g，16.6mmol)，加入到二甲基甲酰胺(100-200ml)中，加入hbtu(7.3g，19.2mmol)、hobt(2.6g，19.2mmol)和二異丙基乙基胺(6.5g，50mmol)，該混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，將反應(yīng)液倒入蒸餾水中(1000ml)，析出固體，經(jīng)過(guò)濾、用蒸餾水洗滌，得到固體粗品。濾液用乙酸乙酯萃取，干燥，除去溶劑，得到固體粗品，將兩部分固體合并，真空干燥，得粗品化合物3(5g)，收率70.5％；

(2)化合物5的合成：將化合物3(2.6g，4.7mmol)加入到dmf(40ml)和nmp(5ml)混合液中，然后加入蝶呤甲基溴化物(3.2g，9.4mmol)，混合物于室溫至60℃攪拌24小時(shí)，反應(yīng)液冷卻至室溫后倒入蒸餾水中，析出固體，經(jīng)過(guò)濾，蒸餾水洗，干燥得棕色固體化合物5，3.2g；

(3)化合物6的合成：將化合物5溶于三氟乙酸(30ml)和二氯甲烷(15ml)的混合溶劑中，混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)，將溶劑濃縮至約5ml，攪拌下慢慢加入蒸餾水(50ml)，析出棕色固體，固體過(guò)濾，蒸餾水洗滌，真空干燥后重新溶解于三氟乙酸中(5ml)，再次加入蒸餾水，析出的固體經(jīng)過(guò)濾、蒸餾水洗滌，真空干燥后的得棕色固體6-蝶呤基葉酸化合物，157mg，收率5.4％。質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果顯示分子離子峰[m+h]+＝617，純度約70-80％。該產(chǎn)品溶解性極差，經(jīng)過(guò)酸堿處理和hplc純化均不能得到更高純度的產(chǎn)品。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。