本發(fā)明涉及釀酒技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種具有啤酒風(fēng)味的蜂蜜精釀含汽發(fā)酵酒及其制備方法。
背景技術(shù)：
GB4927-2008國(guó)家啤酒標(biāo)準(zhǔn)將特種啤酒定義為：由于原輔料工藝的改變，使之具有特殊風(fēng)味的啤酒。我國(guó)幅員遼闊，地理位置有其特性，物產(chǎn)豐富。因此不能將啤酒釀造局限于國(guó)外的傳統(tǒng)方式上，目前歐美一些國(guó)家也在大力提倡和推廣有其獨(dú)特性和典型性的精釀啤酒，美國(guó)規(guī)定精釀啤酒大部分啤酒風(fēng)味都必須從傳統(tǒng)或創(chuàng)新的原料與發(fā)酵工藝中獲得。甚至有以葡萄汁代替大麥芽汁的精釀啤酒，并出口到我國(guó)。目前我國(guó)啤酒百分之七十以上的產(chǎn)品還是低檔產(chǎn)品，特種啤酒的種類(lèi)缺乏。
蜂蜜是昆蟲(chóng)蜜蜂從開(kāi)花植物的花中采得的花蜜在蜂巢中釀制的蜜，被譽(yù)為“大自然中最完美的營(yíng)養(yǎng)食品”，中國(guó)人從古代就開(kāi)始人工養(yǎng)蜂采蜜，蜂蜜既是良藥，又是上等飲料，可延年益壽。蜂蜜的主要成分為糖類(lèi)，其中60％～80％是葡萄糖和果糖，可以很容易地被人體直接吸收，而不需要酶的分解；對(duì)婦、幼特別是老人有更好的保健作用，因而被稱為“老人的牛奶”。據(jù)分析，蜂蜜含有與人體血清濃度相近的多種無(wú)機(jī)鹽和維生素、鐵、鈣、銅、錳、鉀、磷等多種有機(jī)酸和有益人體健康的微量元素，以及淀粉酶、氧化酶、還原酶等，具有滋養(yǎng)、潤(rùn)燥、解毒、美白養(yǎng)顏、潤(rùn)腸通便之功效，對(duì)少年兒童咳嗽治療也有很好的效果。此外，據(jù)報(bào)道，蜂蜜能改進(jìn)血液的成分，改善心腦血管的供血，因而常常被心血管患者服用；蜂蜜對(duì)肝臟有保護(hù)作用，能促進(jìn)肝細(xì)胞再生，對(duì)脂肪肝的形成有一定的抑制效果；食用蜂蜜能有效改善腸胃病、呼吸道疾病，鎮(zhèn)定安神，緩解肺燥、心臟病等慢性病對(duì)人體的侵蝕。據(jù)《中國(guó)蜜蜂學(xué)》記載，蜂產(chǎn)品的生物學(xué)功能為①調(diào)節(jié)免疫機(jī)能；②抗菌消炎作用；③抗氧化作用；④調(diào)節(jié)物質(zhì)代謝作用；⑤促進(jìn)組織再生作用；⑥抗腫瘤作用；⑦美容美顏；⑧強(qiáng)身健體，延年益壽；⑨抗輻射、抗化學(xué)毒物。尤其對(duì)食品安全，健康要求越來(lái)越高的今天，蜂蜜是大自然的恩賜，是不可多得的既有使用價(jià)值又有保健功能的物質(zhì)。
目前，我國(guó)每年可產(chǎn)蜂蜜四十萬(wàn)噸以上，而由于生活習(xí)性等影響，年消費(fèi)蜂蜜十萬(wàn)噸左右(含出口)，因此有約三十萬(wàn)噸蜂蜜得不到利用，造成很大的浪費(fèi)，特別是養(yǎng)蜂作為一種空中農(nóng)業(yè)，既不占用土地，也不污染環(huán)境，還能因?yàn)槊鄯浠顒?dòng)異花傳粉，使農(nóng)業(yè)豐收，何樂(lè)而不為。更重要的是蜂蜜作為一種保健食品，已經(jīng)人人皆知，對(duì)人體的健康促進(jìn)作用不言而喻。因此，其開(kāi)發(fā)前景巨大，其中有三十余種蜂蜜年產(chǎn)量很大。因此將其應(yīng)用替代全部或部分大麥釀造精釀啤酒，是很有潛力的，也是促進(jìn)啤酒消費(fèi)者身心健康的，符合二十一世紀(jì)養(yǎng)生理念，達(dá)到未病先防、防患于未然，符合當(dāng)今國(guó)家健康發(fā)展戰(zhàn)略，達(dá)到“治未病”的理念。
目前，水果的加工利用還停留在初級(jí)階段，加強(qiáng)水果功能與保健價(jià)值研究，開(kāi)發(fā)有機(jī)水果系列保健食品，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。其中，將其制備成發(fā)酵酒不僅是解決水果成熟期短、保鮮困難、嫩果纖維化等問(wèn)題的有效手段之一，而且可以得到保健功能較好的飲用酒。目前蜂蜜、水果的生產(chǎn)實(shí)際應(yīng)用，是以這二者分別為原料，輔以白酒浸泡、過(guò)濾、澄清等工藝生產(chǎn)，其酒度高，生產(chǎn)方式粗放，酒中缺乏營(yíng)養(yǎng)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
基于此，有必要針對(duì)特種啤酒的不足、蜂蜜得不到有效利用的問(wèn)題，提供一種具有啤酒風(fēng)味的蜂蜜精釀含汽發(fā)酵酒的制備方法。用該方法制得的具有啤酒風(fēng)味的蜂蜜精釀含汽發(fā)酵酒營(yíng)養(yǎng)豐富、具有啤酒風(fēng)味、口感柔和，富含黃酮類(lèi)化合物，具有護(hù)肝作用。
具體技術(shù)方案如下：
一種具有啤酒風(fēng)味的蜂蜜精釀含汽發(fā)酵酒的制備方法，包括以下步驟：
原料處理：將原料用水稀釋至糖度為8-18度，調(diào)節(jié)pH為4-5，過(guò)濾，加入助劑，經(jīng)加熱煮沸后，冷卻，得待發(fā)酵液；
所述原料包括以下質(zhì)量百分比的組分：蜂蜜51％-100％、果汁0-25％、麥芽汁0-49％；所述助劑為啤酒花，其加入量為所述原料總重量的0.6‰-2‰；
有氧發(fā)酵：將待發(fā)酵液抽入發(fā)酵罐中，添加酵母溶液，在18-28℃的溫度下進(jìn)行有氧發(fā)酵60-112小時(shí)；
厭氧發(fā)酵：待有氧發(fā)酵至發(fā)酵液的糖度降至4-5度時(shí)密閉發(fā)酵罐，進(jìn)行厭氧發(fā)酵，待發(fā)酵罐內(nèi)的二氧化碳?xì)鈮哼_(dá)到0.08-0.12個(gè)大氣壓時(shí)，逐步降溫至10-14℃，恒溫恒壓發(fā)酵70-74小時(shí)；再逐步降溫至0-4℃，恒溫、恒氣壓陳釀10-15天，即得。
在其中一些實(shí)施例中，所述原料包括以下質(zhì)量百分比的組分：蜂蜜75-85％、果汁15-25％。
在其中一些實(shí)施例中，所述原料包括以下質(zhì)量百分比的組分：蜂蜜80-85％、果汁20-25％。
在其中一些實(shí)施例中，所述果汁由以下水果制備得到：藍(lán)莓、黑莓、桑葚、楊梅、火龍果。
在其中一些實(shí)施例中，所述原料總重量與所述酵母溶液的質(zhì)量比900-1100：1。
在其中一些實(shí)施例中，所述酵母在用于發(fā)酵前先用糖度為3—5度的蜂蜜液對(duì)其進(jìn)行活化，得所述酵母溶液，活化溫度為32-34℃，活化時(shí)間為25-35分鐘，所述蜂蜜液與酵母的質(zhì)量比為90:110:1。
在其中一些實(shí)施例中，所述逐步降溫至10-14℃的過(guò)程為：分3-4次降溫，每次降低2-5℃，每次間隔3-4小時(shí)；所述逐步降溫至0-4℃的過(guò)程為：分3-4次降溫，每次降低2-4℃，每次間隔7-9小時(shí)。
在其中一些實(shí)施例中，所述厭氧發(fā)酵的步驟包括：待有氧發(fā)酵至發(fā)酵液的糖度降至4-5度時(shí)密閉發(fā)酵罐，進(jìn)行厭氧發(fā)酵，待發(fā)酵罐內(nèi)的二氧化碳?xì)鈮哼_(dá)到0.09-0.11個(gè)大氣壓時(shí)，分3次逐步降溫至12-14℃，每次降低2-5℃，每次間隔3-4小時(shí)，恒溫發(fā)酵70-74小時(shí)；再分3次逐步降溫至2-3℃，每次降低2-4℃，每次間隔7-8小時(shí)，恒溫、恒氣壓陳釀12-13天。
本發(fā)明還提供了一種具有啤酒風(fēng)味的蜂蜜精釀含汽發(fā)酵酒。
具體技術(shù)方案如下：
一種具有啤酒風(fēng)味的蜂蜜精釀含汽發(fā)酵酒，由上述的制備方法制備而成。
本發(fā)明的具有啤酒風(fēng)味的蜂蜜精釀含汽發(fā)酵酒及其制備方法具有以下優(yōu)點(diǎn)和有益效果：
本發(fā)明采用蜂蜜為主要原料，或以蜂蜜與水果為原料，通過(guò)優(yōu)化組合發(fā)酵過(guò)程中的各參數(shù)，嚴(yán)格控制各參數(shù)的范圍，使制備得到的具有啤酒風(fēng)味的蜂蜜精釀含汽發(fā)酵酒安全性高，營(yíng)養(yǎng)豐富，富含黃酮類(lèi)化合物、原花青素、氨基酸、維生素、微量元素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，充分發(fā)揮了蜂蜜或蜂蜜加水果汁的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，使蜂蜜得到了更有效的利用。該蜂蜜精釀含汽發(fā)酵酒保健效果非常好，具有抗氧化作用，有利于人類(lèi)健康。通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明的蜂蜜精釀含汽發(fā)酵酒具有明顯的護(hù)肝作用。
本發(fā)明的蜂蜜精釀含汽發(fā)酵酒風(fēng)味獨(dú)特，口感柔和，具有啤酒風(fēng)味，為人們提供了一種高品質(zhì)特種啤酒的新品種。
本發(fā)明的蜂蜜含汽精釀發(fā)酵酒的制備方法，減化了傳統(tǒng)方法的蒸煮、糖化釀造等工藝，本發(fā)明的方法工藝簡(jiǎn)單，適合規(guī)?；a(chǎn)。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明所用的蜂蜜主要有以下品種：
荔枝蜜：荔枝盛產(chǎn)南方，被譽(yù)為“果中之王”。荔枝蜂蜜是我國(guó)南方地區(qū)生產(chǎn)的上等蜂蜜，顏色為琥珀色，芳香馥郁，帶有濃烈的荔枝花香味。主要分布于我國(guó)華南地區(qū)，如廣東、福建、廣西等省。荔枝蜂蜜采用荔枝之花蜜，氣息芳香馥郁，味甘甜，微帶荔枝果酸味，既有蜂蜜之清潤(rùn)，卻因?yàn)槊鄯溽劽蹠r(shí)添加了各種蜜蜂自己特有的成分，故無(wú)荔枝之燥熱，但其特殊的生津、益血、理氣、之功效，是嶺南特有的蜜種，饋贈(zèng)遠(yuǎn)方親友，“不辭長(zhǎng)作嶺南人”的特等蜂蜜。
益母草蜜：婦科良藥，是蜜蜂采自益母草花而來(lái)，含有多種維他命、氨基酸、天然葡萄糖及天然果糖，常飲有活血袪風(fēng)，滋潤(rùn)養(yǎng)顏的功效。喉痛、聲沙可直接含服，每天兩次效果佳。益母草蜜來(lái)自我國(guó)西南高原無(wú)污染藥用益母草產(chǎn)區(qū)。本品有去瘀生新、調(diào)經(jīng)活血等作用，適合月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)血過(guò)多，產(chǎn)前產(chǎn)后女性食用，充分體現(xiàn)出對(duì)女性的呵護(hù)。對(duì)于男性，特別是高血壓、冠心病、腎病等人士來(lái)說(shuō)，益母草蜜同樣是理想的保健和輔助治療的健康食品?？捎门虮疀_飲，或加入其它飲料中飲用。毋須冷藏，存放于室溫及陰涼干爽位置。(如凝結(jié)亦可食用)
柑橘蜜：柑桔蜂蜜是消費(fèi)者喜愛(ài)的蜂蜜品種之一。呈淺琥珀色，味甘甜，微酸，結(jié)晶細(xì)膩，氣味清香，主要分布于長(zhǎng)江以南地區(qū)，如廣東、福建、廣西、四川、浙江等省，柑桔蜂蜜能醒酒利尿、生津、止咳化痰，適用于咳嗽痰多且體偏寒者。
洋槐蜜：又名刺槐蜂蜜、槐花蜂蜜，是我國(guó)出口創(chuàng)匯的上等蜂蜜，其特點(diǎn)為顏色淺、味鮮潔、甜而不膩、有洋槐特有的清香味，不易結(jié)晶，主要分布于黃河和長(zhǎng)江中下游地區(qū)，如山東、河南、河北、安徽、陜西、甘肅等地為多。洋槐蜂蜜含有刺槐苷和揮發(fā)油，其性清涼，有舒張血管、改善血液循環(huán)、防止血管硬化、降低血壓等作用，臨睡前服用能起到催眠作用，常服本品能改善人的情緒，達(dá)到寧心安神效果。它芳香而透明，其性清涼，口感清香和淡，有舒張血管、改善血液循環(huán)、防止血管硬化、降低血壓、潤(rùn)腸、殺菌等作用。臨睡前服用能降低中樞神經(jīng)的興奮性，有利入睡。常服能改善人的情緒，達(dá)到寧心安神的效果。益于心煩、熱燥腫痛、咳血痔血、心悶心慌等患者服用或調(diào)理。
椴樹(shù)蜜：采自長(zhǎng)白山深山，特點(diǎn)：無(wú)污染，口感特佳，俗話說(shuō)：“南方荔枝，北方椴樹(shù)”，具有清火、解毒、抑菌、助消化、養(yǎng)容駐顏、護(hù)肝、護(hù)腎、軟化心腦血管、延緩衰老等保健功能，有潤(rùn)肺、化痰、理氣、消滯、增加呼吸道粘膜分泌、促進(jìn)胃液分泌等效果，可潤(rùn)腸，防便秘、防腸癌。生性涼、益于血壓偏高；熟性溫，益于全身腫脹等患者服用或調(diào)理。
荊條蜜：荊條屬于馬鞭草科,我國(guó)北方地區(qū)廣為分布，荊條蜜特淺唬珀色，新鮮蜜色較淺，漸向橙紅色轉(zhuǎn)變，味稍帶荊花芳香，不易結(jié)晶，結(jié)晶粒細(xì)膩、較白。潤(rùn)腸潤(rùn)肺，止咳平喘。
龍眼蜜：益心脾、補(bǔ)氣血、安心神。龍眼蜜又稱桂園蜂蜜，是蜂蜜中上品，主要分布于我國(guó)華南地區(qū)，如廣東、廣西、福建等省，蜜色呈琥珀色，食味甘甜，不易結(jié)晶，有濃烈的龍眼的香氣，其蛋白質(zhì)含量為眾蜜之冠，有養(yǎng)血安神、開(kāi)胃益脾、養(yǎng)顏、清熱潤(rùn)燥、補(bǔ)中益氣之功效，對(duì)心脾血虛引起的心悸不安、失眠和記憶力減退有輔助療效。特別適合女性適用。
黨參蜜：蜜蜂采自名貴中藥材——黨參花蜜釀造而成，味甘平，色澤呈琥珀色。其除有蜂蜜之特性外，更益于補(bǔ)中、益氣生津，對(duì)脾胃虛弱、氣血兩虧、體倦無(wú)力、婦女血崩、貧血有輔助療效，適于體虛、胃冷、慢性胃炎、貧血者的保健食用。
枸杞蜜：枸杞性甘、平、滋腎潤(rùn)肺、清肝明目。該蜜深琥珀色，清香馥郁，含枸杞之精華，具補(bǔ)氣、滋腎、潤(rùn)肺、壯陽(yáng)之功效。枸杞蜜來(lái)自我國(guó)名貴中藥——枸杞子主產(chǎn)區(qū)，是蜜蜂采集枸杞花蜜釀造而成，本產(chǎn)品既有蜂蜜傳統(tǒng)的營(yíng)養(yǎng)保健價(jià)值、更因它是枸杞的精華，具有補(bǔ)腎益精，養(yǎng)肝明目，潤(rùn)肺止咳之功效。本品適合血?dú)鈨商?、高血壓、體質(zhì)虛弱、視力下降、貧血、慢性肝炎，中毒性或代謝肝病及膽道系統(tǒng)引起的肝功能障礙等的人士服用。特別適應(yīng)于腎虛腰痛、遺精滑精、工作繁忙的男性食用。
黃蓮蜜：清熱解毒、消炎滅菌、瀉火化痰。該蜜晶瑩透亮，清香宜人，甜中帶苦，食而不膩。古為皇家貢品，今有民間珍饈。藥書(shū)記載：黃連性苦寒，清熱燥濕，爽心除煩，瀉火解毒，其蜜與之同功，治療痢疾、毒瘡皆有良效，老少皆宜。采自我國(guó)中草藥自然保護(hù)區(qū)中黃連的花蜜，它繼承了黃連的藥性及蜂蜜的特點(diǎn)，不僅有天然蜂蜜的保健營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，尤其具有這種名貴中藥的醫(yī)療效果，黃連蜜色澤微黃，香味特別，甜中微苦，甜而不膩，真可謂良藥并不苦口，療效卻依然。本產(chǎn)品特有清熱祛濕、瀉火解毒、抗菌消炎之功效，有鎮(zhèn)靜、降溫、去火的效果，特別適用于平時(shí)煙酒過(guò)多，心火旺盛，心情煩燥之人士的食療保健食用。
黃芪蜜：黃芪是治療氣虛不可缺少的藥物之一。黃芪蜂蜜采用自天然黃芪花花蜜，屬稀有蜜種，呈淺琥珀色，甘甜不膩，氣味清香，不易結(jié)晶。主要產(chǎn)區(qū)有山西、甘肅、內(nèi)蒙，常服此蜂蜜，能增強(qiáng)人體特異性和非特異性免疫功能，提高體質(zhì)，對(duì)心血管系統(tǒng)疾病，如強(qiáng)心、改善血液循環(huán)方面有輔助療效，具有排膿托毒、止痛補(bǔ)虛之功效。益于補(bǔ)氣升陽(yáng)、固表止汗、利水退腫、益于腎炎等患者服用或調(diào)理。
枇杷蜜：枇杷蜂蜜是蜜蜂采集開(kāi)化的枇杷花蜜，經(jīng)蜜蜂釀造而成。甘甜上口，堪稱蜜中佳品，主要產(chǎn)地為南方各省，如福建、浙江等省，屬稀有蜜種。具有枇杷“主治肺熱喘咳、胃熱口渴”的藥效，有清肺、泄熱、化痰、止咳平喘等保健功效，是作風(fēng)感冒、咳嗽痰患?jí)j理想選擇。其性甘涼，具有滋陰潤(rùn)肺、利尿降水作用，能止渴、止咳下氣，用于輔助治療呼吸道病變、慢性支氣管炎引起的咳嗽痰多、咳血咯血等癥。益于化痰止咳、咽喉腫痛、防治感冒、收鼻水等患者服用或調(diào)理。
五味子蜜：為蜜蜂采集木蘭科植物北五味子的花蜜釀制而成，五味子為落葉木質(zhì)藤本，花白色至淺紅色，花期6～7月，西北地區(qū)為其主要分布地。五味子蜜為淺琥珀色，香味純厚，特殊味濃，冬季易結(jié)晶。味辛平，有補(bǔ)肺腎、益精氣、開(kāi)胃生津之效。能治肺虛咳嗽、盜汗、遺精等癥，對(duì)久瀉不止、內(nèi)熱消渴、心悸失眠、耳源性眩暈有較好療效。男士服用五味子蜜更為適宜。
百花蜜：采于百花叢中，匯百花之精華，集百花之大全。清香甜潤(rùn)，營(yíng)養(yǎng)滋補(bǔ)，具蜂蜜之清熱、補(bǔ)中，解毒、潤(rùn)燥、收斂等功效，是傳統(tǒng)蜂蜜品種。含有大量人體所需的氨基酸、維生素A、B群和人體所需的鈣、磷、鐵、鋅等微量元素，長(zhǎng)期食用可健身增智、駐顏美容、養(yǎng)肝護(hù)脾增強(qiáng)免疫、促進(jìn)兒童生長(zhǎng)發(fā)育。
棗花蜜：棗花蜂蜜是我國(guó)傳統(tǒng)的滋補(bǔ)佳品，顏色呈琥珀色，有棗花的香味，味甘甜，不易結(jié)晶，主要產(chǎn)區(qū)在河南、山東、河北、陜西、寧夏等省。棗花蜜性甘平偏溫、維生素C含量較高，營(yíng)養(yǎng)豐富，是滋補(bǔ)首選蜜種。具有護(hù)脾養(yǎng)胃、潤(rùn)肺補(bǔ)虛、和陰陽(yáng)、調(diào)營(yíng)衛(wèi)之功效，長(zhǎng)于補(bǔ)血，是調(diào)制中藥的上等蜂蜜，也是婦女、兒童、老年人和體弱患者的理想蜂蜜。益于健脾養(yǎng)胃，補(bǔ)血安神，適用于頭昏目眩，乏力，消化不良，食欲不振等。
苕子蜜：又稱雪脂蓮蜜，因其結(jié)晶時(shí)宛如雪、脂而得名，是主產(chǎn)于云南的珍貴蜜種，生于云南高原，開(kāi)花時(shí)，值百花蕭殺，唯其獨(dú)芳，吸日月之精華，沐四季之雨露，故其蜜晶瑩剔透，清涼皎潔，結(jié)晶細(xì)膩如脂，令人望而生津。既有普通蜂蜜的解毒潤(rùn)燥作用，又有苕子清涼養(yǎng)顏、滋潤(rùn)肌膚的獨(dú)特功能。
紫云英蜜：紫云英蜂蜜又名紅花草蜂蜜或草子蜂蜜，是我國(guó)南方春季主要蜜種。具有大自然清閑宜人的草香味，甜而不膩，鮮潔清甜，色澤為淺琥珀色。主要分布于長(zhǎng)江流域，如安徽、浙江、江蘇等省。本品除有一般蜂蜜的清熱解毒的補(bǔ)中、潤(rùn)澡、之功效，還能祛風(fēng)明目、消腫利尿，對(duì)風(fēng)痰咳嗽、喉痛、火眼痔瘡等有一定的輔助療效。是虛火旺盛人士之保健佳品。紫云英蜂蜜性甘平，有益于消化系統(tǒng)病變及食欲不佳者，幫助食物消化與促進(jìn)潰瘍的愈合，宜空腹服用。
菜花蜜：淺唬拍色，略混濁，有油菜花的香氣，略具辛辣味，貯放日久辣味減輕，味道甜潤(rùn)，極易結(jié)晶，結(jié)晶后呈乳白色，晶體呈細(xì)?；蛴椭瑺睿恍詼?，有行血破氣，消腫散結(jié)的功能，和血補(bǔ)身。
野桂花蜜：野桂花也叫山桂花，正名是柃(音Lin)，屬山茶科柃木屬，常綠灌木，分布在長(zhǎng)江流域及以南各省廣大丘陵山區(qū)，野桂花和我們常說(shuō)的桂花是不同的，是稀有而且珍貴的冬季蜜源植物，花期自10月下旬至次年3月。野桂花蜜(在很多地方又稱冬蜜)有柃木花的特殊芳香氣味，清亮透明，甜潤(rùn)可口，少許結(jié)晶或不結(jié)晶，口感特佳，為一等蜜，被譽(yù)為“蜜中之王”。具有清熱、解毒、潤(rùn)燥、補(bǔ)中的滋補(bǔ)效果。
茴香蜜：深琥珀色或琥珀色，少許結(jié)晶或不結(jié)晶。性溫：調(diào)中散寒、理氣開(kāi)胃、益于腹痛脹痛、腸胃不好、類(lèi)風(fēng)濕、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
蘋(píng)果蜜：淺琥珀色，易結(jié)晶，氣味香郁，具有蘋(píng)果的芬芳味，提高心臟收縮能力，抗腦中風(fēng)和心肌梗塞。
桔梗蜜：桔梗是治療咽喉腫痛的主要藥，有宣肺散邪、祛痰排膿的功效。來(lái)自于天然桔?；?，既具蜂蜜之清熱、補(bǔ)中、潤(rùn)燥的功效，更是適用于外感性的咳嗽、胸悶、痰多者食療保健佳品。
紫花蜜：又名紅花草蜜或草子蜜，是我國(guó)南方春季主要蜜種。具有大自然清新宜人的草香味，甜而不膩，鮮潔清甜，色澤為淺琥珀色。本品除有一般蜂蜜的清熱解毒的補(bǔ)中、潤(rùn)澡、之功效，還能祛風(fēng)明目、消腫利尿，對(duì)風(fēng)痰咳嗽、喉痛、火眼痔瘡等有一定的輔助療效。是虛火旺盛人士之保健佳品。
山花蜜：具有多種蜂蜜的藥效，清咽潤(rùn)喉、利尿通便、排毒養(yǎng)顏、調(diào)節(jié)胃腸道菌群、對(duì)心腦血管有輔助療效，男女老少都可食用，成為中老年人保健蜜。
橙花蜜：具有濃郁的橙花香氣，味甘甜微酸，鮮潔爽口，本產(chǎn)品具有柑之生津止渴，醒酒利尿的功效，食之下氣，利腸胃中熱毒，除煩醒酒。同時(shí)還有養(yǎng)白養(yǎng)顏、正氣、化痰、消滯、補(bǔ)中，潤(rùn)燥之功效。
山楂蜜：含多種有機(jī)酸,維生素C、胡菌卜素、鈣、齊墩果酸、鳥(niǎo)素酸、山楂素等三萜類(lèi)烯酸和黃酮類(lèi)等有益成分。山楂蜜有治療內(nèi)積不化、飽脹腹痛之功效。
紫荊花蜜：除具有普通蜂蜜補(bǔ)中、解毒、潤(rùn)燥的天然保健作用外，還具有清熱涼血、祛風(fēng)除濕、活血通絡(luò)、消腫止痛的功效，可用于風(fēng)濕骨痛、跌打損傷、風(fēng)寒濕痹、閉經(jīng)、蛇蟲(chóng)咬傷等病癥的輔助治療。
鴨腳木蜜：源于中藥樹(shù)種鴨腳木花蜜，是嶺南特有冬季蜜種。故俗稱“冬蜜”。色澤為淺琥珀色，較易結(jié)晶，質(zhì)地優(yōu)良，味甘而略帶特有苦味。除具有蜂蜜之清熱、補(bǔ)中、解毒、潤(rùn)燥等功效外，還有發(fā)汗解表，能祛風(fēng)除濕之功效，對(duì)感冒發(fā)熱，咽喉腫痛，風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛，心臟病、肝臟病、高血壓、胃及十二指腸潰瘍、關(guān)節(jié)炎、神經(jīng)系統(tǒng)疾病有較好輔助療效。是帶有中藥特色的蜂蜜品種，深受東南亞地區(qū)人們喜愛(ài)。
烏桕蜜：顏色呈琥珀色，有輕微的酵酸味，結(jié)晶顆粒較粗。據(jù)安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)對(duì)600多種植物所做研究表明，烏桕清除自由基的能力，在所有蜜源植物中僅次于杜英。而蜂蜜的功效主要取決于蜜源植物，因此，烏桕蜜在清除自由基，抗輻射、抗氧化、防衰老方面僅次于杜英蜜。
本發(fā)明所用的水果主要有以下品種：
香蕉：香蕉含有的維生素A能增強(qiáng)對(duì)疾病的抵抗力，維持正常的生殖力和視力所需要；硫胺素能抗腳氣病，促進(jìn)食欲、助消化，保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)；核黃素能促進(jìn)人體正常生長(zhǎng)和發(fā)育。
檸檬：可增強(qiáng)消化、出汗過(guò)多、食欲不振、體力倦怠、減肥解酒、補(bǔ)充維生素C。
橙子：性寒、可解熱、化痰、防便秘、生津止渴、擦皮膚有止痛、消炎之效，美容之效。
菠蘿：菠蘿含有一種叫“菠蘿朊酶”的物質(zhì)，它能分解蛋白質(zhì)，幫助消化，溶解阻塞于組織中的纖維蛋白和血凝塊，改善局部的血液循環(huán)，稀釋血脂，消除炎癥和水腫，能夠促進(jìn)血循環(huán)。尤其是過(guò)食肉類(lèi)及油膩食物之后，吃些菠蘿更為適宜，可以預(yù)防脂肪沉積。
荔枝：補(bǔ)血、健肺、促進(jìn)血液循環(huán)、心臟衰弱者可多食(已燥熱者不宜多吃)。
芒果：可治療暈車(chē)、船、嘔吐。熟果肉可敷火傷、開(kāi)水燙傷，止痛消炎。
葡萄：中醫(yī)認(rèn)為葡萄性平、味甘酸，入肺、脾、腎經(jīng)，有補(bǔ)氣血、益肝腎、生津液、強(qiáng)筋骨、止咳除煩、補(bǔ)益氣血、通利小便的功效。
龍眼：有壯陽(yáng)益氣、補(bǔ)益心脾、養(yǎng)血安神、潤(rùn)膚美容等多種功效，可治療貧血、心悸、失眠、健忘、神經(jīng)衰弱及病后、產(chǎn)后身體虛弱等癥。
柚子：清燥熱、通便、消口臭、解酒。
蘋(píng)果：治下痢、降血脂、滋潤(rùn)皮膚。
火龍果：火龍果果實(shí)汁多味清甜，能夠解毒排毒、保護(hù)胃壁；抗衰老、預(yù)防腦細(xì)胞變性，抑制癡呆癥發(fā)生；美白皮膚、養(yǎng)顏；減肥、降血糖、潤(rùn)腸滑腸、預(yù)防大腸癌發(fā)生。
楊梅：生津解渴，和胃消食。治煩渴，吐瀉，痢疾，腹痛，滌腸胃，解酒。果實(shí)治心胃氣痛，痢疾，吐瀉。
藍(lán)莓：有效降低膽固醇，防止動(dòng)脈粥樣硬化，促進(jìn)心血管健康；有增強(qiáng)心臟功能、預(yù)防癌癥和心臟病的功效，能防止腦神經(jīng)衰老、增強(qiáng)腦力；可以強(qiáng)化視力，減輕眼球疲勞。此外，藍(lán)莓還可以治療一般的傷風(fēng)感冒、咽喉疼痛以及腹瀉等癥。
黑莓：富含人體所必須的各類(lèi)氨基酸和微量元素，具有促進(jìn)血液凝固作用，延緩衰老，提高免疫，促進(jìn)腦代謝，降壓降血脂和抗心律失常等功能。
桑葚：可調(diào)節(jié)消化、治胃病、便秘、老枝煎水飲用可通血?dú)庵雇搭A(yù)防風(fēng)寒病。葉煎水加冰糖或黑糖當(dāng)茶喝，可清肺熱、胃腸、利尿、消腫、除痰。
本發(fā)明采用的原料蜂蜜與水果均來(lái)自于大自然植物，具有天然健康屬性，用其所制備的蜂蜜精釀發(fā)酵酒富含黃酮類(lèi)化合物(二氫黃酮類(lèi)、黃酮醇類(lèi)、花色素類(lèi)、黃烷類(lèi)、橙酮類(lèi)、雙黃酮類(lèi)、異黃酮類(lèi)等)、氨基酸、維生素、微量元素等有益物質(zhì)。尤其是黃酮類(lèi)化合物具有多種功效：防治心腦血管疾病、抗菌及抗病毒、抗腫瘤、抗氧化、抗炎、鎮(zhèn)痛、保肝，此外，大量研究表明黃酮類(lèi)化合物還具有降壓、降血脂、抗衰老、提高機(jī)體免疫力、瀉下、鎮(zhèn)咳、祛痰、解痙及抗變態(tài)等藥理活性。
特別是采用藍(lán)莓、黑莓、桑葚、楊梅、火龍果等水果為原料時(shí)，所制備的蜂蜜精釀發(fā)酵酒含大量原色花青素?；ㄇ嗨匾彩屈S酮類(lèi)化合物中的一種，是純天然的抗衰老的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑，研究證明花青素是當(dāng)今人類(lèi)發(fā)現(xiàn)最有效的抗氧化劑，它的抗氧化性能比維生素E高出五十倍，比維生素C高出二十倍。它對(duì)人體的生物有效性是100％，服用后二十分鐘就能在血液中檢測(cè)到?；ㄇ嗨卦跉W洲，被稱為“口服的皮膚化妝品”，營(yíng)養(yǎng)皮膚，增強(qiáng)皮膚免疫力，應(yīng)對(duì)各種過(guò)敏性癥狀?；ㄇ嗨厥翘烊坏年?yáng)光遮蓋物，能夠防止紫外線侵害皮膚，皮膚屬于結(jié)締組織，其中所含的膠原蛋白和硬性蛋白對(duì)皮膚的整個(gè)結(jié)構(gòu)起重要作用。具體來(lái)說(shuō)，花青素有如下作用：1.有助于預(yù)防多種與自由基有關(guān)的疾病，包括癌癥、心臟病、過(guò)早衰老和關(guān)節(jié)炎；2.通過(guò)防止應(yīng)激反應(yīng)和吸煙引起的血小板凝集來(lái)減少心臟病和中風(fēng)的發(fā)生；3.增強(qiáng)免疫系統(tǒng)能力來(lái)抵御致癌物質(zhì)；4.降低感冒的次數(shù)和縮短持續(xù)時(shí)間；5.具有抗突變的功能從而減少致癌因子的形成；6.具有抗炎功效，因而可以預(yù)防包括關(guān)節(jié)炎和腫脹在內(nèi)的炎癥；7.緩解花粉病和其它過(guò)敏癥；8.增強(qiáng)動(dòng)脈、靜脈和毛細(xì)血管彈性；9.保護(hù)動(dòng)脈血管內(nèi)壁；10.保持血細(xì)胞正常的柔韌性從而幫助血紅細(xì)胞通過(guò)細(xì)小的毛細(xì)血管，因此增強(qiáng)了全身的血液循環(huán)、為身體各個(gè)部分的器官和系統(tǒng)帶來(lái)直接的益處，并增強(qiáng)細(xì)胞活力；11.松弛血管從而促進(jìn)血流和防上高血壓(降血壓功效)；12.防止腎臟釋放出的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶所造成的血壓升高(另一個(gè)降血壓功效)；13.作為保護(hù)腦細(xì)胞的一道屏障，防止淀粉樣β蛋白的形成、谷氨酸鹽的毒性和自由基的攻擊，從而預(yù)防阿爾茨海默氏??；14.通過(guò)對(duì)彈性蛋白酶和膠原蛋白酶的抑制使皮膚變得光滑而富有彈性，從內(nèi)部和外部同時(shí)防止由于過(guò)度日曬所導(dǎo)致的皮膚損傷；15.花青素還具有抗輻射的作用，花青素顏色因pH值不同會(huì)發(fā)生變化，大部分花青素具有良好的光、熱、pH值穩(wěn)定性，對(duì)于白領(lǐng)或是長(zhǎng)期處于日曬、電輻射環(huán)境中的人群，花青素的功效可是不可或缺的；16.花青素可以促進(jìn)視網(wǎng)膜細(xì)胞中的視紫質(zhì)再生，預(yù)防近視，增進(jìn)視力。
本發(fā)明的蜂蜜精釀發(fā)酵酒的制備原料還可以包括大麥芽、麥芽等傳統(tǒng)啤酒原料(質(zhì)量為數(shù)為百分之四十九以下)。
本發(fā)明是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中特種啤酒不足的問(wèn)題，提供一種以蜂蜜代替全部或大部分麥芽汁或以蜂蜜與水果為主要原料制備蜂蜜精釀發(fā)酵酒(手工啤酒)及其制備方法。用該方法制得的蜂蜜精釀發(fā)酵酒營(yíng)養(yǎng)豐富、具有啤酒風(fēng)味、口感柔和，富含黃酮類(lèi)化合物，保健效果好。
以下通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的蜂蜜精釀發(fā)酵酒及其制備方法做進(jìn)一步說(shuō)明。
以下實(shí)施例中的果汁是由水果通過(guò)以下方法制備得到：
1、清洗：將水果用純凈水沖洗3次，去掉泥土、沙子、蟲(chóng)果、壞果、果籽、樹(shù)葉等雜質(zhì)。
2、機(jī)械破碎、除梗籽：將水果機(jī)械破碎，要求果破裂，而果籽不破碎，破碎后將果肉與果籽分離，同時(shí)收集破碎后不加壓自行流出的汁液，冷藏保存，盡量新鮮使用。
3、機(jī)械壓榨果肉：將破碎后的果肉進(jìn)行機(jī)械壓榨、粉碎，收集流出的汁液，步驟2的汁液合并，得到果汁。
以下實(shí)施例中的酵母在用于發(fā)酵前先用糖度為4度的蜂蜜液對(duì)其進(jìn)行活化，得到活化后的酵母溶液，活化溫度為32—34℃，活化時(shí)間為30分鐘，蜂蜜液與酵母的質(zhì)量比為100:1。
實(shí)施例1
本實(shí)施例提供一種蜂蜜精釀發(fā)酵酒，其制備方法包括以下步驟：
(1)原料處理：將槐花蜂蜜用水稀釋至糖度為12度，調(diào)節(jié)pH為4，過(guò)濾后，再調(diào)整其糖度為10度，加入蜂蜜質(zhì)量的0.1％的啤酒花，經(jīng)加熱煮沸后，冷卻，得待發(fā)酵液；
(2)有氧發(fā)酵：將待發(fā)酵液抽入發(fā)酵罐中，添加活化后的酵母溶液，在22℃進(jìn)行有氧發(fā)酵84小時(shí)；本實(shí)施例中的酵母采用自分離于蜂蜜中的發(fā)酵酵母；槐花蜂蜜與活化后的酵母溶液的質(zhì)量比1000：1；
(3)厭氧發(fā)酵：待有氧發(fā)酵至發(fā)酵液的糖度降至4-5時(shí)密閉發(fā)酵罐，進(jìn)行厭氧發(fā)酵，待發(fā)酵罐內(nèi)二氧化碳?xì)鈮哼_(dá)到0.1個(gè)氣壓時(shí)，分3次逐步降低發(fā)酵罐內(nèi)的溫度，每次降低3-4℃，每次間隔4小時(shí)，逐步降至12℃，后恒溫發(fā)酵72小時(shí)；再分3次逐步降低發(fā)酵罐內(nèi)的溫度，前2次每次降低4℃，每次間隔8小時(shí)，降至4℃后再間隔8小時(shí)繼續(xù)降至2℃，保持氣壓，陳釀12天，即得蜂蜜精釀發(fā)酵酒(鮮啤、生啤)。
(4)步驟(3)得到的鮮啤可以在恒溫保持二氧化碳?xì)鈮旱那闆r下，現(xiàn)時(shí)飲用，也可經(jīng)過(guò)過(guò)濾、殺菌、充二氧化碳?xì)怏w、裝瓶、再殺菌，在一定保質(zhì)期內(nèi)瓶裝飲用。
實(shí)施例2
本實(shí)施例提供一種蜂蜜精釀發(fā)酵酒，其制備方法包括以下步驟：
(1)原料處理：將椴樹(shù)蜂蜜用水稀釋至糖度為12度，調(diào)節(jié)pH為4，過(guò)濾后，再調(diào)整其糖度為10度，加入蜂蜜質(zhì)量的1‰的啤酒花，經(jīng)加熱煮沸后，冷卻，得待發(fā)酵液。
其它步驟同實(shí)施例1。本實(shí)施例中的酵母采用自分離于蜂蜜中的發(fā)酵酵母，椴樹(shù)蜂蜜與活化后的酵母溶液的質(zhì)量比1000：1。
實(shí)施例3
本實(shí)施例提供一種蜂蜜精釀發(fā)酵酒，其制備方法包括以下步驟：
(1)原料處理：將椴樹(shù)蜂蜜用水稀釋后，加入藍(lán)莓果汁，得蜂蜜與果汁的混合物(蜂蜜的質(zhì)量百分比為75％)，稀釋?zhuān)⒄{(diào)節(jié)pH為4.5，過(guò)濾后，再調(diào)整其糖度為10度，加入蜂蜜與果汁總質(zhì)量的0.6‰的啤酒花，經(jīng)加熱煮沸后，冷卻，得待發(fā)酵液。
其它步驟同實(shí)施例1。本實(shí)施例中的酵母采用自分離于蜂蜜中的發(fā)酵酵母與果酒酵母混合使用，分離于蜂蜜中的發(fā)酵酵母與果酒酵母的質(zhì)量比為75:25，蜂蜜與果汁的總質(zhì)量與活化后的酵母溶液的質(zhì)量比1000：1。
實(shí)施例4
本實(shí)施例提供一種蜂蜜精釀發(fā)酵酒，其制備方法包括以下步驟：
(1)原料處理：將椴樹(shù)蜂蜜用水稀釋后，加入桑葚果汁，得蜂蜜與果汁的混合物(蜂蜜的質(zhì)量百分比為85％)，稀釋?zhuān)⒄{(diào)節(jié)pH為5，過(guò)濾后，再調(diào)整其糖度為10度，加入蜂蜜與果汁總質(zhì)量的0.6‰的啤酒花，經(jīng)加熱煮沸后，冷卻，得待發(fā)酵液。
其它步驟同實(shí)施例1。本實(shí)施例中的酵母采用自分離于蜂蜜中的發(fā)酵酵母與果酒酵母混合使用，分離于蜂蜜中的發(fā)酵酵母與果酒酵母的質(zhì)量比為85:15，蜂蜜與果汁的總質(zhì)量與活化后的酵母溶液的質(zhì)量比1000：1。
實(shí)施例5
本實(shí)施例提供一種蜂蜜精釀發(fā)酵酒，其制備方法包括以下步驟：
(1)原料處理：將椴樹(shù)蜂蜜用水稀釋后，加入麥芽汁，得蜂蜜與麥芽汁的混合物(蜂蜜的質(zhì)量百分比為70％)，稀釋?zhuān)⒄{(diào)節(jié)pH為5，過(guò)濾后，再調(diào)整其糖度為10度，加入蜂蜜與麥芽汁總質(zhì)量的1‰的啤酒花，經(jīng)加熱煮沸后，得待發(fā)酵液。
其它步驟同實(shí)施例1。本實(shí)施例中的酵母采用自分離于蜂蜜中的發(fā)酵酵母與啤酒酵母混合使用，分離于蜂蜜中的發(fā)酵酵母與啤酒酵母的質(zhì)量比為70:30，蜂蜜與麥芽汁的總質(zhì)量與活化后的酵母溶液的質(zhì)量比1000：1。
本發(fā)明的蜂蜜精釀發(fā)酵酒的制備中，啤酒花或麥芽汁可加可不加，添加的目的是使蜂蜜精釀發(fā)酵酒更具傳統(tǒng)手工啤酒風(fēng)味和典型性，不添加則是一種與品種香更貼近的精釀發(fā)酵酒風(fēng)格，其典型性風(fēng)格仍然具有啤酒風(fēng)味。
本發(fā)明的蜂蜜精釀發(fā)酵酒釀造過(guò)程中的關(guān)鍵控制點(diǎn)如下：
1、對(duì)蜂蜜、蜂蜜與水果或麥芽汁進(jìn)行稀釋時(shí)，其糖度應(yīng)與想要獲得的目標(biāo)成品酒的酒精濃度相匹配，成品酒的酒精濃度高則所需發(fā)酵液的糖度高，反之則低。
2、發(fā)酵酵母需要先在糖度為3—5度的蜂蜜液中進(jìn)行活化，活化的溫度為32—34℃，時(shí)間為25-35分鐘，蜂蜜液與酵母的體積比為80-120:1。
3、第一次在發(fā)酵罐中恒溫發(fā)酵，必須是有氧發(fā)酵，恒定溫度采用中低溫以18—22℃發(fā)酵，待發(fā)酵液中殘?zhí)沁_(dá)到4—5度時(shí)，立即封閉呼吸閥，不同規(guī)定溫度恒溫，漸進(jìn)式發(fā)酵降溫，最后低溫陳釀。
4、需要注意發(fā)酵液在發(fā)酵罐中的液面高度，由于蜂蜜的泡沫豐富，大約是麥汁的兩倍，在發(fā)酵過(guò)程中液面不能太高，若發(fā)酵液液面過(guò)高，則需安裝消泡裝置。
5、在蜂蜜與果汁混合發(fā)酵時(shí)要根據(jù)所需風(fēng)味調(diào)整好蜂蜜與水果的比例，以蜂蜜為主(質(zhì)量百分比占75％以上)，水果為輔。
6、發(fā)酵過(guò)程中所用容器要注意清潔，不能感染雜菌。
7、用于鮮飲以蜂蜜為主的精釀發(fā)酵酒應(yīng)控制發(fā)酵罐內(nèi)二氧化碳的氣壓，盡量使容器內(nèi)二氧化碳保留充足。
實(shí)驗(yàn)例1
觀察實(shí)施例1-5制備得到的蜂蜜精釀發(fā)酵酒的感官特征，如表1所示；檢測(cè)實(shí)施例1-5制備得到的蜂蜜精釀發(fā)酵酒的理化性質(zhì)(參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB4927-2008以及GB-2758發(fā)酵酒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求檢測(cè))，檢測(cè)結(jié)果如表2所示。
表1實(shí)施例1-5的蜂蜜精釀發(fā)酵酒的感官特征
表2實(shí)施例1-5的蜂蜜精釀發(fā)酵酒的理化性質(zhì)的檢測(cè)結(jié)果
實(shí)驗(yàn)例2
本發(fā)明的蜂蜜精釀發(fā)酵酒中富含的營(yíng)養(yǎng)保健成分高于傳統(tǒng)啤酒，尤其是黃酮類(lèi)化合物，將實(shí)施例1-5制備得到的蜂蜜精釀發(fā)酵酒中的黃酮類(lèi)化合物進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)方法：衛(wèi)生部《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》2003年版二十四，保健食品中總黃酮的測(cè)定。結(jié)果如表3所示。
表3實(shí)施例1-5的蜂蜜精釀發(fā)酵酒中的黃酮類(lèi)化合物含量
實(shí)驗(yàn)例3
本發(fā)明的蜂蜜精釀發(fā)酵酒中富含黃酮類(lèi)化合物，具有護(hù)肝的作用。對(duì)實(shí)施例3制備得到的蜂蜜精釀發(fā)酵酒進(jìn)行護(hù)肝作用測(cè)試，測(cè)試其對(duì)H2O2致人肝細(xì)胞(L02)損傷的保護(hù)作用。
對(duì)實(shí)施例3的蜂蜜精釀發(fā)酵酒進(jìn)行如下處理得到含黃酮類(lèi)化合物的蜂蜜精釀發(fā)酵酒固形物：在蜂蜜精釀發(fā)酵酒中加入碳酸鈉，調(diào)節(jié)其pH值在3.5～4之間，然后水浴加熱揮發(fā)除去酒精和水，得到含黃酮類(lèi)化合物的蜂蜜精釀發(fā)酵酒固形物。
1、MTT法檢測(cè)蜂蜜精釀發(fā)酵酒固形物對(duì)H2O2損傷肝細(xì)胞L02的增殖的影響
MTT法檢測(cè)氧化損傷肝細(xì)胞L02的存活率的方法：H2O2造模液的配置：以30％H2O2溶液22μl溶于9.978ml 1640培養(yǎng)液，制成20mmol/L的H2O2造模液。將生長(zhǎng)融合的人肝細(xì)胞(L02)以1×105個(gè)/孔接種于96孔板，待細(xì)胞貼壁后，吸棄培養(yǎng)液，各組分別按相應(yīng)濃度給予含上述蜂蜜精釀發(fā)酵酒固形物的培養(yǎng)液190μl，正常組和模型組給予等量含0.5％DMSO的培養(yǎng)液為對(duì)照，培養(yǎng)24h后，各組給予培養(yǎng)液20μl，造模組給予H2O2造模液20μl(終濃度相當(dāng)于200μmol/L)，作用2h后，各組每孔加MTT20μl，4h后，小心吸棄上清，每孔加DMSO150μl，振搖10min，使沉淀充分溶解，酶標(biāo)儀492nm測(cè)定吸光度(A)值。
肝細(xì)胞存活率與OD值成正比。結(jié)果如表4所示：與正常對(duì)照組相比，肝細(xì)胞損傷模型組OD值明顯下降(P<0.01)；與模型組比較，含黃酮類(lèi)化合物的蜂蜜精釀發(fā)酵酒固形物1×10-4、5×10-5、2.5×10-5，1.25×10-5劑量組OD值均明顯升高(P<0.01，P<0.001)；這表明本發(fā)明制備的蜂蜜精釀發(fā)酵酒對(duì)過(guò)氧化氫導(dǎo)致的肝損傷具有一定的保護(hù)作用。
表4含黃酮類(lèi)化合物的蜂蜜精釀發(fā)酵酒固形物對(duì)H2O2損傷的L02細(xì)胞的增殖影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果(means+S.D,n＝5)
注：與模型組相比,*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001
2、蜂蜜精釀發(fā)酵酒固形物對(duì)H2O2損傷的L02細(xì)胞培養(yǎng)上清液中AST、LDH含量的影響
培養(yǎng)上清液中AST、LDH含量的測(cè)定方法：將生長(zhǎng)融合的人肝細(xì)胞(L02)以1×105個(gè)/孔接種于96孔板，待細(xì)胞貼壁后，吸棄培養(yǎng)液，各組分別按相應(yīng)濃度給予含上述蜂蜜精釀發(fā)酵酒固形物的培養(yǎng)液180μl，正常組和模型組給予等量含0.5％DMSO的培養(yǎng)液為對(duì)照，培養(yǎng)24h后，各組給予培養(yǎng)液20μl，造模組給予H2O2造模液20μl(終濃度相當(dāng)于200μmol/L)，作用2h后，吸取細(xì)胞培養(yǎng)上清液，換新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12小時(shí)，吸取培養(yǎng)液，按試劑盒操作方法測(cè)定上清液中AST、LDH含量。
結(jié)果如表5所示：細(xì)胞培養(yǎng)液中加入H2O2后，肝細(xì)胞出現(xiàn)核溶解，細(xì)胞膜破損，細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清，上清液上有少量脫落細(xì)胞。與正常對(duì)照組相比，肝細(xì)胞損傷模型組培養(yǎng)上清液中AST、LDH明顯升高(P<0.001)；不同劑量含黃酮類(lèi)化合物的蜂蜜精釀發(fā)酵酒固形物組的AST和LDH與模型組相比明顯降低，具有顯著性差異(P<0.05，P<0.01)，且呈一定的劑量依賴性。結(jié)果表明本發(fā)明制備的蜂蜜精釀發(fā)酵酒在體外對(duì)H2O2致肝細(xì)胞損傷具有直接地保護(hù)作用。
表5含黃酮類(lèi)化合物的蜂蜜精釀發(fā)酵酒固形物對(duì)H2O2損傷的L02細(xì)胞生成AST,LDH的影響(means+S.D,n＝5)
注：與模型組相比,*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001
實(shí)驗(yàn)例4
測(cè)試本發(fā)明的蜂蜜精釀發(fā)酵酒(以實(shí)施例3為例)的急性毒性實(shí)驗(yàn)
1.預(yù)試驗(yàn)
選取健康昆明小鼠20只，體重20±2g，雌雄兼用。禁食24h，小鼠一次灌胃給予實(shí)施例3的蜂蜜精釀發(fā)酵酒80ml/kg。連續(xù)觀察7天。每天上午觀察小鼠的一般體征：包括行為活動(dòng)、呼吸、毛色、口、眼、耳、鼻、糞、尿；攝食量、飲水量和死亡情況。小鼠單次給予蜂蜜精釀發(fā)酵酒最大濃度和最大體積的當(dāng)天，小鼠出現(xiàn)俯臥、困倦和昏睡現(xiàn)象，但未見(jiàn)小鼠出現(xiàn)死亡，且小鼠毛色光潔，未引起死亡或異常反應(yīng)。限于給受試樣品濃度和體積不能再增大，故進(jìn)行最大耐受量試驗(yàn)(MTD)
2.最大耐受量試驗(yàn)
另選取健康昆明小鼠20只，體重20±2g，雌雄兼用。禁食24h，分別灌胃給予實(shí)施例3的蜂蜜精釀發(fā)酵酒，每隔2h灌胃一次，共6次，一共160ml/kg。此后連續(xù)觀察7天，此間讓小鼠自由進(jìn)食及飲水。觀察小鼠的一般體征：包括行為活動(dòng)、呼吸、毛色、口、眼、耳、鼻、糞、尿；攝食量、飲水量和死亡情況。連續(xù)觀察一個(gè)星期，亦未見(jiàn)小鼠死亡。
由小鼠單次給酒最大耐受量實(shí)驗(yàn)結(jié)果可得，小鼠一次給予實(shí)施例3的蜂蜜精釀發(fā)酵酒最大體積80ml/kg時(shí)，未見(jiàn)明顯毒性反應(yīng)，相當(dāng)于70kg成人服用實(shí)施例3的蜂蜜精釀發(fā)酵酒5600ml；由多次給酒最大耐受量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可得，小鼠全天共給予實(shí)施例3的蜂蜜精釀發(fā)酵酒的最大劑量為160ml/kg，按體重?fù)Q算相當(dāng)于70kg成人服實(shí)施例3的蜂蜜精釀發(fā)酵酒為12200ml時(shí)，無(wú)毒性反應(yīng)，由此提示，本發(fā)明的蜂蜜精釀發(fā)酵酒是安全的。
以上所述實(shí)施例的各技術(shù)特征可以進(jìn)行任意的組合，為使描述簡(jiǎn)潔，未對(duì)上述實(shí)施例中的各個(gè)技術(shù)特征所有可能的組合都進(jìn)行描述，然而，只要這些技術(shù)特征的組合不存在矛盾，都應(yīng)當(dāng)認(rèn)為是本說(shuō)明書(shū)記載的范圍。
以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)發(fā)明專(zhuān)利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專(zhuān)利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。