1.一種多孔磁性銅離子金屬螯合載體,其特征在于,所述載體為以殼聚糖粉末為原料,F(xiàn)e3O4作為磁性材料,SiO2為致孔劑,環(huán)氧氯丙烷為交聯(lián)劑進行反應,合成多孔磁性殼聚糖微球;多孔磁性殼聚糖微球以環(huán)氧氯丙烷為活化劑,以亞氨基二乙酸為螯合配基,再與過渡態(tài)的金屬銅離子進行螯合,制備的得到多孔磁性銅離子金屬螯合載體。
2.一種多孔磁性銅離子金屬螯合載體的制備方法,其特征在于,所述方法以殼聚糖粉末為原料,F(xiàn)e3O4作為磁性材料,SiO2為致孔劑,環(huán)氧氯丙烷為交聯(lián)劑進行反應,合成多孔磁性殼聚糖微球;然后,以環(huán)氧氯丙烷為活化劑,以亞氨基二乙酸為螯合配基,再與過渡態(tài)的金屬銅離子進行螯合,制備得到多孔磁性銅離子金屬螯合載體。
3.根據(jù)權利要求2所述的制備方法,其特征在于,所述制備方法包括以下步驟:
步驟a,多孔磁性殼聚糖微球載體的制備,向殼聚糖粉末中,加入乙酸溶液,室溫下緩慢攪拌至殼聚糖完全溶解后;加入納米Fe3O4,攪拌至均勻,加入致孔劑SiO2,攪拌幾分鐘后,加入液體石蠟脫拌后升溫至50℃,滴加Span80作為乳化劑,乳化至形成殼聚糖液滴,隨后升溫70℃至溫度恒定,調(diào)節(jié)溶液pH值為9-11,保持為堿性,緩慢的逐滴滴加環(huán)氧氯丙烷進行反應;反應后對產(chǎn)物進行洗滌,直至pH值為中性,然后加入NaOH的溶液,80℃的水浴鍋加熱2h,停止加熱后,反復使用蒸餾水進行洗滌,再用稀鹽酸洗滌一次,最后蒸餾水洗至中性,得到多孔磁性殼聚糖微球載體,烘干后備用;
步驟b,多孔磁性殼聚糖微球載體的活化,向步驟a中制得的多孔磁性殼聚糖微球中,加入NaOH溶液和環(huán)氧氯丙烷,以及二甲亞砜和硼氫化鈉,在40℃恒溫反應4h;活化反應后,用去離子水洗滌,去除未反應的環(huán)氧氯丙烷和氫氧化鈉;
步驟c,多孔磁性銅離子金屬螯合載體的制備,向活化好的多孔磁性殼聚糖微球載體中,加入Na2CO3溶液,再加入亞氨基二乙酸,40℃恒溫反應10h;然后將反應產(chǎn)物分散于CuCl2溶液中,25℃恒溫反應24h,得到多孔磁性銅離子金屬螯合載體。
4.根據(jù)權利要求3所述的制備方法,其特征在于,步驟a中乙酸溶液的質(zhì)量分數(shù)為4%。
5.根據(jù)權利要求3所述的制備方法,其特征在于,步驟b中二甲基亞砜的體積分數(shù)為6%。
6.根據(jù)權利要求3所述的制備方法,其特征在于,步驟b中氫氧化鈉溶液的濃度為0.6mol/L。
7.根據(jù)權利要求3所述的制備方法,其特征在于,步驟b中環(huán)氧氯丙烷的體積分數(shù)為45%。
8.一種利用如權利要求1所述的多孔磁性銅離子金屬螯合載體固定化木瓜酶的方法,其特征在于,向多孔磁性銅離子金屬螯合載體中,加入木瓜蛋白酶溶液,室溫下振蕩3h,用PBS洗滌數(shù)次至上清中檢測不到酶活,得到固定化的木瓜蛋白酶。
9.一種利用權利要求8所述方法制得的固定化木瓜酶在大豆分離蛋白水解中的應用。
10.根據(jù)權利要求9所述的應用,其特征在于,將大豆分離蛋白溶于水中,形成底物濃度為4%的水分散液,在80℃水浴鍋中保溫20min。迅速冷卻至酶解溫度,攪拌30min,調(diào)節(jié)pH至8,按底物比例加入6000-9000U/g的固定化木瓜蛋白酶,緩慢攪拌反應至少4h。