本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體來(lái)講涉及到依諾肝素鈉生產(chǎn)工藝。

背景技術(shù)：

依諾肝素鈉是低分子的鈉鹽，它主要用于血液透析中的預(yù)防凝血和深靜脈血栓的治療、不穩(wěn)定型冠狀動(dòng)脈疾病治療以及預(yù)防與手術(shù)有關(guān)的血栓形成。肝素(heparin)廣泛存在于動(dòng)物器官和小腸粘膜、肺等組織中的一種葡萄糖胺聚糖，具有抗凝、抗炎、抗過(guò)敏、抗病毒、抗癌、調(diào)節(jié)血脂等多種藥理活性。

低分子肝素除具備普通肝素全部藥理作用外，作為抗凝藥使用，通常短期用藥，且治療指數(shù)高。美國(guó)FDA已經(jīng)批準(zhǔn)依諾肝素鈉作為低位肢體置換術(shù)后的預(yù)防用藥。

目前國(guó)內(nèi)生產(chǎn)低分子肝素類的產(chǎn)品降解的方法主要有亞硝酸鈉降解法、過(guò)氧化氫降解法、酶降解法等方法。但過(guò)氧化氫降解可能引入異物，質(zhì)量不容易控制；酶降解產(chǎn)品末端有不飽和基團(tuán)，穩(wěn)定性差，成本高；在除雜脫色方法上，目前國(guó)內(nèi)主要有在不同pH條件下高錳酸鉀和雙氧水二次氧化法或過(guò)氧化氫氧化法。高錳酸鉀和雙氧水二次氧化法的缺點(diǎn)是產(chǎn)生的二氧化錳較難濾出，且二氧化錳對(duì)部分產(chǎn)品有吸附作用，使產(chǎn)品回收率降低；在產(chǎn)品純化技術(shù)上，國(guó)內(nèi)主要有凝膠層析、超濾等方法，盡管凝膠層析得到的產(chǎn)品質(zhì)量較高，但難于規(guī)?；a(chǎn)，且成本較高。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明旨在提供一種依諾肝素鈉生產(chǎn)工藝，以及以此工藝而制備出的依諾肝素及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷。

為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明依諾肝素鈉生產(chǎn)工藝包括下列步驟：

1、制備肝素鈉溶液

在肝素鈉中加入5～7質(zhì)量倍的純化水后，在常溫下攪拌4～5小時(shí)后溶解；

2、制備肝素降解液

用鹽酸調(diào)節(jié)步驟1得到的肝素鈉溶液的pH值2～2.5后，加入重量為肝素鈉1.0%～2.0%的亞硝酸鈉，然后在20～30℃下攪拌反應(yīng)2～3h，再靜置20～24h后得到肝素降解液；

3、制備還原液

用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)上述肝素降解液的pH值9～10后，加入0.8%～1.2%倍肝素鈉重量的的硼氫化鈉還原10～12h，然后再用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值到6.8～7.2，得到還原液；

4、制備還原沉淀物

在上述還原液中加入2～3體積倍量的乙醇，充分?jǐn)嚢韬笫占玫竭€原沉淀物；

5、制備依諾肝素鈉粗品

在收集的還原沉淀物中加入純凈水?dāng)嚢枞芙夂螅尤?.6%～1.0%體積倍量的雙氧水在25～30℃下氧化20～24h，然后再加入2～3體積倍量的乙醇，充分?jǐn)嚢韬笫占恋砦锏玫揭乐Z肝素鈉粗品；

6、制備依諾肝素鈉精品

將上述收集的依諾肝素鈉粗品沉淀加入純化水溶解成1%～2%（w/w）的溶液，分別用分子量截留值為3000和8000的超濾膜進(jìn)行超濾，再經(jīng)除菌過(guò)濾后得到依諾肝素鈉精品溶液；

7、凍干

將上述步驟制得的依諾肝素鈉溶液在25～30℃下凍干，即得到依諾肝素鈉成品。

本發(fā)明取得的技術(shù)進(jìn)步：

1、由于采用本發(fā)明生產(chǎn)工藝，將膜分離技術(shù)應(yīng)用于分離不同分子量段，改變了落后的溶媒分級(jí)沉淀法和昂貴的凝膠分子篩法，得到了抗Xa效價(jià)≥135IU /mg，活性比為2.0～3.0，主要組分的分子量分布為5000～6000D的依諾肝素鈉產(chǎn)品。

2、本發(fā)明生產(chǎn)工藝獲得平均分子量為5000～6000D的依諾肝素鈉產(chǎn)品可有效防止靜脈血栓栓塞，可用于預(yù)防普通外科、矯形外科、神經(jīng)外科的術(shù)前和術(shù)后的血栓形成，可有效防止缺血性中風(fēng)患者的靜脈血栓栓塞癥，可大大降低患中風(fēng)風(fēng)險(xiǎn)，可有效防止血液體外循環(huán)引起的凝固，并能有效防止不穩(wěn)定性冠心病，能有效解決未分級(jí)肝素長(zhǎng)期使用后易出現(xiàn)的出血、骨質(zhì)疏松、誘導(dǎo)血小板減少等，具有廣闊的應(yīng)用前景。

3、本發(fā)明與現(xiàn)有依諾肝素鈉制備工藝比較，產(chǎn)率高達(dá)86%～97%，重均分子量為5000～6000D，峰位分子量為3000～6000，分子量小于3000的組分不大于11%，分子量大于8000的組分不大于13%；抗Xa活性≥135IU/mg，質(zhì)量達(dá)到歐洲藥典規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。產(chǎn)品化合物還原端的結(jié)構(gòu)為脫水的甘露醇，并具有原料來(lái)源豐富、產(chǎn)率高、產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定可靠，純度高，成本低，采用亞硝酸鈉降解使得工藝簡(jiǎn)單，操作方便，生產(chǎn)過(guò)程容易控制，質(zhì)量穩(wěn)定，反應(yīng)溫和，產(chǎn)品色澤較好，無(wú)“三廢”排放等特點(diǎn)。產(chǎn)品依諾肝素鈉具有抗凝血、抗血栓、抗腫瘤、抗炎、抗過(guò)敏等作用和調(diào)節(jié)血脂的功效，療效顯著，使用范圍廣泛，可作為注射劑、膠囊劑、軟膏劑等產(chǎn)品的原料，便于規(guī)模生產(chǎn)。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。

實(shí)施例1：

1、分別稱取3Kg肝素鈉、45g亞硝酸鈉、30g硼氫化鈉后備用；

2、向15～24L純化水反應(yīng)罐中加入3Kg肝素鈉后，在常溫下攪拌4～5小時(shí)后溶解得到肝素鈉溶液；

3、用鹽酸調(diào)節(jié)上述肝素鈉溶液的pH=2～3后，在攪拌狀態(tài)下加入所稱取的45g亞硝酸鈉，然后在20～30℃保溫、攪拌下反應(yīng)2～3h，再靜置20～24h后得到得到肝素降解液；

4、用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)上述肝素降解液的pH值9～10后，加入30g硼氫化鈉還原10～12h，反應(yīng)完畢后再用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值到6.8～7.2，得到還原液；

5、在上述還原液中加入2～3體積倍量的乙醇，充分?jǐn)嚢韬笫占€原沉淀物；

6、在收集的還原沉淀物中加入純凈水?dāng)嚢枞芙夂?，加?.6%～1.0%體積倍的雙氧水在25～30℃下氧化20～24h，氧化完畢后再加入2～3體積倍量的乙醇進(jìn)行沉淀，充分?jǐn)嚢韬笫占玫揭乐Z肝素鈉沉淀物粗品；

7、將上述依諾肝素鈉粗品沉淀加入純凈水150L～200L，溶解成1～2%濃度的溶液后，用分子量截留值分別為3000和8000的超濾膜進(jìn)行超濾，再經(jīng)除菌處理后得到依諾肝素鈉溶液；

8、將上述步驟制得的依諾肝素鈉溶液在25～30℃下凍干后得到依諾肝素鈉成品2.7Kg。

實(shí)施例2：本實(shí)施例與實(shí)施例1不同之處為肝素鈉為10Kg，亞硝酸鈉為150g，硼氫化鈉為100g，凍干后得到依諾肝素鈉成品9Kg。

實(shí)施例3：本實(shí)施例與實(shí)施例1不同之處為肝素鈉為30Kg，亞硝酸鈉為450g，硼氫化鈉為300g，凍干后得到依諾肝素鈉成品27Kg。