1.辣木葉黃酮提取物的降糖、胰島保護(hù)活性試驗方法,其特征在于,它包含以下步驟:
S1、黃酮提取物的制備:稱取辣木葉黃酮粉末80-100mg,定容至1mL,混勻,經(jīng)0.22um濾器濾過,分裝成5個等量樣品,待用;
S2、葡萄糖攝取試驗:將試驗用HepG2細(xì)胞溶液用0.25%胰蛋白酶液消化后,接種于培養(yǎng)板中,然后一起置于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),其中,HepG2細(xì)胞溶液的細(xì)胞濃度為0.8-1.5×105個/mL,待細(xì)胞貼壁后,棄去原培養(yǎng)液,用葡萄糖試劑盒測定各孔培養(yǎng)液中初始葡萄糖的濃度,計為G1,換無血清培養(yǎng)液,饑餓10-12h,加入DMEM高糖培養(yǎng)液160-200μL,再分別加入20-50μL樣品,孵育24-28h后用葡萄糖試劑盒測定各孔培養(yǎng)液中葡萄糖的濃度,計為G2,采用以下公式計算葡萄糖的消耗量GC,其中,n為培養(yǎng)板中試驗的孔數(shù),根據(jù)葡萄糖攝取活性系數(shù)K,判斷樣品葡萄糖攝取活性,G0為同體積的異槲皮苷試驗樣品進(jìn)行葡萄糖攝取試驗得到的葡萄糖消耗量,異槲皮苷試驗樣品中異槲皮苷的含量為0.0156mg/mL;
S3、糖脂代謝活性試驗:取用人工誘導(dǎo)2型糖尿病大鼠模型樣品組和對照組各10只,其中,人工誘導(dǎo)2型糖尿病大鼠模型的標(biāo)準(zhǔn)為空腹血糖大于7.8mmol/L或餐后2h血糖大于11.1mmol/L,樣品組和對照組按樣品組的劑量給予等量的生理鹽水,于確定大鼠成模當(dāng)天統(tǒng)一開始灌胃給藥,連續(xù)灌胃21天,每天8:00AM-9:00AM定時空腹給藥一次,灌胃后再給予等量的飼料與飲水,21天后取分別取各組大鼠的血糖變化率,大鼠血脂指標(biāo)含量,大鼠血清SOD與MDA含量的測定以及胰島素指數(shù)的計算;
S4、胰島保護(hù)活性試驗:將糖脂代謝活性試驗中樣品組和對照組的大鼠胰臟用波恩氏液固定,經(jīng)過脫水、透明、浸蠟后,用石蠟包埋,切片,厚度為4.5-5.5μm,30-45℃烘箱加熱固定,對胰腺切片進(jìn)行HE染色和醛復(fù)紅染色,脫水,透明,封片,于顯微鏡下觀察,并拍照記錄,根據(jù)HE染色的胰腺切片中胰島細(xì)胞的數(shù)量A2與對照組中胰島細(xì)胞數(shù)量A1,計算胰島細(xì)胞數(shù)量變化率M,其中A2、A1分別為樣品組合對照組中HE染色的切片下的10只大鼠胰臟細(xì)胞數(shù)量的平均值,根據(jù)醛復(fù)紅染色胰島β細(xì)胞所代表的紅色區(qū)域面積計算胰島β細(xì)胞增長率N,其中,B2、B1分別為樣品組合對照組中醛復(fù)紅染色的切片下10只大鼠胰島β細(xì)胞數(shù)量所代表的紅色區(qū)域面積的平均值。
2.如權(quán)利要求1所述的辣木葉黃酮提取物的降糖、胰島保護(hù)活性試驗方法,其特征在于:所述的辣木葉黃酮粉末由以下方法制得:取辣木葉粉以50-60%v/v乙醇為溶劑,料液比為1:50-60g/ml,進(jìn)行微波萃取,收集提取液,其中,微波功率為300-400W,提取時間為6-10min,然后提取液濾過,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮,回收乙醇至干,無水乙醇復(fù)溶后靜置12小時濾過,除去水溶性雜質(zhì),濾液再經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮,除去乙醇,以蒸餾水稀釋,高濃度黃酮溶液分裝為2mL/管于15mL螺口帶蓋離心管,置于真空超低溫冷凍干燥儀48h,黃酮完全凍干為粉末,取出后,密封,避光,-80℃保存。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的辣木葉黃酮提取物的降糖、胰島保護(hù)活性試驗方法,其特征在于:所述的葡萄糖攝取試驗步驟中培養(yǎng)板的孔數(shù)為96孔。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的辣木葉黃酮提取物的降糖、胰島保護(hù)活性試驗方法,其特征在于:所述的試驗用HepG2細(xì)胞溶液是由以下方法制得:將HepG2細(xì)胞接種于細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,加入1640培養(yǎng)液,置于37℃、飽和濕度的5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每隔2d更換1次培養(yǎng)液,3d后傳代,傳代數(shù)1:4,取對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行試驗。
5.如權(quán)利要求1-4任一所述的辣木葉黃酮提取物,其特征在于:所述的辣木葉黃酮提取物用于降低血糖、修復(fù)胰腺β細(xì)胞分泌胰島素功能的藥物及醫(yī)藥產(chǎn)品。