本發(fā)明涉及香菇多糖加工領(lǐng)域，特別涉及一種香菇多糖的制備方法。

背景技術(shù)：

香菇,又名花菇、香蕈、香信、香菌、冬菇、香菰，為側(cè)耳科植物香蕈的子實體。香菇是世界第二大食用菌，也是我國特產(chǎn)之一，在民間素有“山珍”之稱。香菇味道鮮美，香氣沁人，營養(yǎng)豐富。富含維生素B群、鐵、鉀、維生素D原(經(jīng)日曬后轉(zhuǎn)成維生素D)、味甘，性平。主治食欲減退，少氣乏力。香菇素有山珍之王之稱，是高蛋白、低脂肪的營養(yǎng)保健食品。中國歷代醫(yī)學(xué)家對香菇均有著名論述?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)和營養(yǎng)學(xué)不斷深入研究，香菇的藥用價值也不斷被發(fā)掘。香菇中麥角甾醇含量很高，對防治佝僂病有效；香菇多糖能增強(qiáng)細(xì)胞免疫能力，從而抑制癌細(xì)胞的生長；臨床與藥理研究表明，香菇多糖還具有抗病毒、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫功能和刺激干擾素形成等作用。香菇多糖是從優(yōu)質(zhì)香菇子實體中提取的有效活性成分，香菇多糖中的活性成分是具有分支的的葡聚糖，主鏈由葡萄糖基組成，沿主鏈隨機(jī)分布著由β-(1-6)連接的葡萄糖基，呈梳狀結(jié)構(gòu)。

多糖的生物活性倍受關(guān)注,其提取方法及工藝已成為目前研究焦點之一。在食用菌多糖提取的研究中采用了許多不同的方法,包括溶劑提取法、酸提法、堿提法、酶解法、超濾法、超聲波強(qiáng)化法、微波法。傳統(tǒng)的香菇多糖提取的方法為熱水浸提法，該提取法多糖得率不高。為強(qiáng)化提取過程，一些研究者采用微波強(qiáng)化和超聲強(qiáng)化方法增加得率，但超聲和微波處理容易引起多糖的活性發(fā)生改變，酶法提取過程中纖維素酶有可能改變多糖的分子結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)，進(jìn)一步影響多糖的藥理功能。近年來，超高壓提取技術(shù)在植物活性成分提取上得到應(yīng)用，其提取時間短，提取得率高，活性成分破壞少，目前，采用超高壓提取香菇多糖還未見報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為：

一種香菇多糖的制備方法，包括如下步驟：

步驟一、鮮香菇清洗干凈，采用刀片式粉碎機(jī)粉碎成顆粒，加入鮮菇10倍質(zhì)量的純凈水，加熱到50℃后進(jìn)入超高壓處理階段；

步驟二、加熱好的料液采用超高壓處理機(jī)進(jìn)行處理，超高壓力為380～400MPa,保壓時間3.7～4.3min；

步驟三、超高壓處理好的料液中加入鮮香菇質(zhì)量0.1％的復(fù)合酶進(jìn)行酶解，酶解溫度50～55℃、酶解pH值5～5.5、酶解后采用濾袋離心機(jī)離心分離，濾袋孔徑≤0.1mm，收集濾液備用，濾渣進(jìn)行進(jìn)一步提??；

步驟四、亞臨界水提取:將步驟三中的濾渣，加入濾渣兩倍質(zhì)量的水進(jìn)一步采用亞臨界水系統(tǒng)進(jìn)行提取；提取結(jié)束后，采用濾袋離心機(jī)離心分離，濾袋孔徑≤0.1mm，收集濾液備用；

步驟五、合并步驟3中和步驟4中的提取液，進(jìn)行膜處理，首先采用陶瓷膜進(jìn)行處理，收集濾過液，然后采用膜孔截留分子量為800000u的微濾膜過濾，進(jìn)一步收集濾液，經(jīng)過陶瓷膜和800000u的微濾膜過濾的濾液進(jìn)一步采用截留分子量為100000u的膜過濾，收集截留物，經(jīng)冷凍干燥后即可獲得香菇多糖。

進(jìn)一步的，所述步驟一中，粉碎的顆粒粒徑為1mm≤直徑≤0.25cm。

進(jìn)一步的，所述步驟三中，復(fù)合酶具體為：木瓜蛋白酶、果膠酶酶活均≥15 000U/g，胰蛋白酶酶活≥10 000U/g、三種食品級酶按照質(zhì)量比8:1:9的比例混合后即為復(fù)合酶。

進(jìn)一步的，所述步驟四中，亞臨界水提取的具體條件為：亞臨界水溫度130℃,浸提時間為3～4min,提取壓力3～4MPa。

相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果為：

本發(fā)明專利一種香菇多糖的制備方法有機(jī)的將多糖超高壓萃取、復(fù)合酶提取和亞臨界提取技術(shù)有機(jī)的整合，優(yōu)化出一套針對香菇多糖的提取工藝，該工藝有效的避免了纖維素酶、超聲和微波處理提取多糖的局限性。本發(fā)明專利直接采用組合膜分離技術(shù)，將香菇多糖粗提取液中的低分子量片段，小分子組分及大分子物質(zhì)都進(jìn)行了有效的去除，僅保留了分子量在100000～800000u之間的功能性的糖。有效的避免了傳統(tǒng)的醇沉多糖工作過程中有機(jī)溶劑殘留、能耗高、高成本等問題，屬于高效、低能、綠色環(huán)保的集成型香菇多糖提取工藝。具有很好的市場應(yīng)用前景。

附圖說明

圖1為本發(fā)明一種香菇多糖的制備方法的制備工藝流程圖。

具體實施方式

下面結(jié)合附圖和具體實施方式對本發(fā)明技術(shù)方案做進(jìn)一步詳細(xì)描述：

如圖1所示，一種香菇多糖的制備方法，包括如下步驟：

步驟一、鮮香菇清洗干凈，采用刀片式粉碎機(jī)粉碎成1mm≤直徑≤0.25cm的顆粒，加入鮮菇10倍質(zhì)量的純凈水，加熱到50℃后進(jìn)入超高壓處理階段。

步驟二、加熱好的料液采用超高壓處理機(jī)進(jìn)行處理，超高壓力為380～400MPa,保壓時間3.7～4.3min。

步驟三、超高壓處理好的料液中加入鮮香菇質(zhì)量0.1％的復(fù)合酶(木瓜蛋白酶、果膠酶酶活均≥15 000U/g，胰蛋白酶酶活≥10 000U/g、三種食品級酶按照質(zhì)量比8:1:9的比例混合后即為復(fù)合酶)進(jìn)行酶解，酶解溫度50～55℃、酶解pH值5～5.5、酶解后采用濾袋離心機(jī)離心分離，濾袋孔徑≤0.1mm，收集濾液備用，濾渣進(jìn)行進(jìn)一步提取。

步驟四、亞臨界水提取:將步驟3中的濾渣，加入濾渣兩倍質(zhì)量的水進(jìn)一步采用亞臨界水系統(tǒng)進(jìn)行提取，亞臨界水溫度130℃,浸提時間為3～4min,提取壓力3～4MPa。提取結(jié)束后，酶解后采用濾袋離心機(jī)離心分離，濾袋孔徑≤0.1mm，收集濾液備用。

步驟五、合并步驟3中和步驟4中的提取液，進(jìn)行膜處理，首先采用陶瓷膜進(jìn)行處理，收集濾過液，然后采用膜孔截留分子量為800000u的微濾膜過濾，進(jìn)一步收集濾液，經(jīng)過陶瓷膜和800000u的微濾膜過濾采用膜孔截留分子量為100000u的濾液進(jìn)一步過濾，收集截留物，經(jīng)冷凍干燥后即可獲得香菇多糖。

試驗例：

本發(fā)明方法與現(xiàn)有其他工藝的比較如下表：

相較于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明方法在使用復(fù)合酶提取前，先采用超高壓技術(shù)進(jìn)行處理，并對酶解后的濾渣經(jīng)行亞臨界提取，上述幾種技術(shù)有機(jī)的整合，優(yōu)化出一套針對香菇多糖的提取工藝，該工藝不僅提高了多糖的提取效果，而且有效的避免了熱水提取、超聲和微波處理提取多糖的局限性。在后續(xù)純化過程中直接采用組合膜分離技術(shù)，將香菇多糖粗提取液中的低分子量片段，小分子組分及大分子物質(zhì)都進(jìn)行了有效的去除，僅保留了分子量在100000～800000u之間的功能性的糖，不僅使得多糖純度大大的提高、保護(hù)了多糖的天然結(jié)構(gòu)和功能活性，而且有效的避免了傳統(tǒng)的Sevage法除蛋白和醇沉多糖工藝過程中大量使用正丁醇、氯仿和乙醇等有機(jī)溶劑的弊端，同時也解決了有機(jī)溶劑對多糖的破壞和產(chǎn)品有機(jī)溶劑殘留、含大量低分子量雜質(zhì)等問題。屬于高效、低能、綠色環(huán)保的集成型香菇多糖提取工藝，具有很好的市場應(yīng)用前景。

以上所述，僅為本發(fā)明的具體實施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何不經(jīng)過創(chuàng)造性勞動想到的變化或替換，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。因此，本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)該以權(quán)利要求書所限定的保護(hù)范圍為準(zhǔn)。