專(zhuān)利名稱(chēng):具有抗腫瘤活性的香菇多糖的七糖重復(fù)單元的合成的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明是關(guān)于有生物活性的、特別是涉及可用作抗腫瘤藥的香菇多糖的七糖重復(fù)單元的合成。
香菇多糖是由食用菌香菇的子實(shí)體中提取出的多糖,具有抗腫瘤活性,臨床上與化療藥物并用,對(duì)肺癌、消化系統(tǒng)器官的癌癥很有效(宋炳生 楊玉龍,《中草藥》1998年29卷第7期492-495頁(yè)),但由于香菇多糖分子量高(50萬(wàn)-100多萬(wàn))結(jié)構(gòu)不均一,有時(shí)療效不夠明確,有時(shí)有副作用,我們認(rèn)為,香菇多糖的關(guān)鍵活性部位就是它的重復(fù)單元-一個(gè)葡萄七糖,合成這個(gè)七糖不僅能夠研究結(jié)構(gòu)與活性的關(guān)系,而且能將這個(gè)七糖發(fā)展為新的、更好的抗癌藥物。這個(gè)七糖有如下的結(jié)構(gòu) 我們?cè)谇皟蓚€(gè)專(zhuān)利中(99126224.7及00107835.6)中描述了兩種簡(jiǎn)易的方法,它們都是采用先合成帶有支鏈的三糖的策略,本發(fā)明再揭示一種實(shí)用的方法,即先構(gòu)筑1-3連接的五糖主鏈,最后再加上兩個(gè)1-6連接的側(cè)鏈的方法。
本發(fā)明的合成方法在于2-O-苯甲?;?4,6-O-芐叉基-α-D-葡萄糖-烯丙基苷1首先在3位氯乙?;玫?,2脫掉4,6位的芐叉基得到2-O-苯甲?;?3-O-氯乙?;?α-D-葡萄糖-烯丙基苷3,3乙?;蟮玫?,4脫掉3位氯乙酰基得到單糖受體5,如下圖所示 4脫掉1位烯丙基后得到1位為游離羥基的6,再活化得到單糖供體7,如下圖所示 單糖供體7與單糖受體1在路易斯酸催化下縮合得到雙糖8,將8脫掉烯丙基后得到1位為游離羥基的9,再活化后得到雙糖供體10,如下圖所示 雙糖供體10與另一單糖受體5在路易斯酸催化下縮合得到三糖11,11脫掉氯乙酰基后得到三糖受體12,如下圖所示 雙糖供體10與三糖受體12在路易斯酸催化下縮合得到五糖13,如下圖所示 13脫掉兩個(gè)芐叉基后,得到14,如下圖所示 14與苯甲?;钠咸烟枪w15在路易斯酸催化下縮合,得到七糖16,如下圖所示 16脫掉?;吹玫讲槐Wo(hù)的七糖烯丙基苷17,若先脫掉烯丙基再脫掉?;?,即得到不保護(hù)的七糖,如下圖所示 以上圖中Bz=苯甲酰基 Ac=乙?;?CA=氯乙酰基 All=烯丙基所述的路易斯酸為三甲基硅三氟甲磺酸酯(TMSOTf)或三氟化硼-乙醚絡(luò)和物(BF3.Et2O)。
以下結(jié)合實(shí)施例進(jìn)行說(shuō)明。
1.單糖2(Allyl 2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidene-3-O-chloroacetyl-α-D-glucopyranoside)的制備化合物1的制備見(jiàn)文獻(xiàn) Pelyvas,I,Lindhorst,T,Tiem,J.Liebigs.Ann.Chem.1990,8,761.將1(10克,24毫克分子)溶于60毫升二氯甲烷中,加入6毫升吡啶,在冰浴冷卻下,滴加氯代乙酰氯2.1毫升在20毫升二氯甲烷中的溶液,在0℃下,反應(yīng)40分鐘,將反應(yīng)液用二氯甲烷稀釋?zhuān)谷氡校袡C(jī)相用1N鹽酸,飽和碳酸氫納溶液,水洗滌,干燥,濃縮,柱層析分離得到化合物2,11.3克,產(chǎn)率95%。[α]D20+105°(c,1.7,CHCl3);1H NMRδ8.04,7.60-7.33,5.87,5.92-5.71,5.54,5.32-5.08,4.38-3.74.
2·單糖3(Allyl 2-O-benzoyl-3-O-chloroacetyl-α-D-glucopyranoside)的制備將2(11克,22毫克分子)溶于50毫升1,4-dioxane中,加入1M的硫酸10毫升,在80℃下反應(yīng)一小時(shí)后,濃縮,倒入冰水中,用30毫升二氯甲烷萃取,有機(jī)相先后用飽和碳酸氫鈉及水洗滌,干燥,濃縮,柱層析分離,得到化合物3 8.84克,產(chǎn)率98%;[α]D20+137°(c,1.9,CHCl3)3·單糖4(Allyl 4,6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-3-O-chloroacetyl-α-D-glucopyranoside)的制備3(8.5克,21.2毫克分子)溶于60毫升二氯甲烷和5毫升吡啶中,在0℃下加入乙酸酐4.5毫升,在室溫反應(yīng)三小時(shí)后,薄層色譜分析表明反應(yīng)完成。將反應(yīng)液倒入冰水中,用二氯甲烷萃取,用1N鹽酸,飽和碳酸氫納溶液及水先后洗滌,棄去水相,有機(jī)相在真空下抽干,得到的粗產(chǎn)物用硅膠柱層析法精制,用乙酸乙酯/石油醚(1/3)作為淋洗液淋洗,收集相應(yīng)組分,得到純的三糖410.1克,產(chǎn)率98%;[α]D20+113°(c,1.5,CHCl3);1H NMRδ8.01,7.60-7.43,5.81-5.76,5.78,5.30,5.30-5.13,5.19,5.13,4.34-4.02,3.96,3.93,2.10,2.06.
4·單糖5(Allyl 4,6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-α-D-glucopyranoside)的制備將4(3克,6.19毫克分子)溶于50毫升二氯甲烷中,加入35毫升甲醇,再加入硫脲2.36克(31.1毫克分子),加入2,4-lutidine 11毫升,回餾16小時(shí)后將反應(yīng)物濃縮,用二氯甲烷萃取,用1N鹽酸,飽和碳酸氫納溶液及水先后洗滌,棄去水相,有機(jī)相在真空下抽干,得到的粗產(chǎn)物用硅膠柱層析法精制,用乙酸乙酯/石油醚(1/3)作為淋洗液淋洗,收集相應(yīng)組分,得到純的5 2.32克,產(chǎn)率92%;[α]D20+133°(c,1.4,CHCl3);5·單糖6(4,6-Di-O-acetyl-2-O-benzoyl-3-O-chloroacetyl-D-glucopyranose)的制備將4(6500毫克,13.4毫克分子)溶于100毫升甲醇中,加入300毫克PdCl2,室溫反應(yīng)八小時(shí),過(guò)濾,濃縮,柱層析分離,得到化合物6,5130毫克,主要由α異構(gòu)體組成,產(chǎn)率86%。[α]D20+86°(c,1.7,CHCl3);熔點(diǎn)120-121℃;6·單糖供體7(4,6-Di-O-acetyl-2-O-benzoyl-3-O-chloroacetyl-D-glucopyranosyltrichloroacetimidate)的制備將6(4500毫克,10.5毫克分子)溶于100毫升二氯甲烷中,然后加三氯乙睛(3毫升,30毫克分子),再加DBU 200微升,反應(yīng)混合物在攪拌下、室溫反應(yīng)二小時(shí)后,將反應(yīng)混合物在真空下抽干,用硅膠柱層析法精制,用乙酸乙酯/石油醚(1/2)作為淋洗液淋洗,收集相應(yīng)組分,得到單糖供體7,5120毫克,產(chǎn)率86%。[α]D20+103°(c,1.5,CHCl3);1H NMRδ8.65,7.97,7.59-7.41,6.73,5.84,5.40,5.34,4.35-4.17,3.96,3.94,2.10,2.09.
7.雙糖8(Allyl 4,6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-3-O-chloroacetyl-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidene-α-D-glucopyranoside)的制備7(2克,3.4毫克分子)與1(1540毫克,3.74毫克分子)溶于20毫升干燥二氯甲烷中,加入1克4A分子篩,在-15℃攪拌下,加入TMSOTf(80微升),繼續(xù)反應(yīng)1小時(shí),加入三乙胺終止反應(yīng),過(guò)濾反應(yīng)物,用飽和碳酸氫納水溶液及水洗滌,濃縮,柱層析分離得到82.4克,產(chǎn)率80%。[α]D20+72°(c,1.6,CHCl3);1H NMRδ7.79,7.60-7.14,5.76-5.69,5.61,5.32,5.27,5.16,5.12,5.21-5.06,5.00,4.95,4.43,4.26-3.65,3.83,3.76,2.01,2.00).
8.雙糖9(4,6-Di-O-acetyl-2-O-benzoyl-3-O-chloroacetyl-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidene-D-glucopyranose)的制備8(4克,4.77毫克分子)溶于5毫升THF,加入10毫升75%醋酸及1.56克醋酸鈉(19.1毫克分子),再加入1.7克PdCl2(9.54毫克分子),室溫反應(yīng)過(guò)夜,過(guò)濾,用二氯甲烷萃取,飽和碳酸氫納水溶液及水洗滌,濃縮,柱層析分離得到9 2.57克,產(chǎn)率67%。[α]D20+29°(c,1.7,CHCl3)9.雙糖供體10(4,6-Di-O-acetyl-2-O-benzoyl-3-O-chloroacetyl-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidene-α-D-glucopyranosyltrichloroacetimidate)的制備9(2.2克,2.76毫克分子)溶于40毫升二氯甲烷,加入三氯乙睛826微升(8.26毫克分子),DBU 70微升,室溫反應(yīng)二小時(shí),濃縮,柱層析分離,得到10 1.04克,產(chǎn)率40%。[α]D20+37°(c,1.4,CHCl3);1H NMRδ8.51,7.71-7.18,6.52,5.64,5.33-5.14,4.97,4.47,4.35-3.68,3.81,3.76,2.03,2.0010.三糖11(Allyl 4,6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-3-O-chloroacetyl-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidene-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-4,6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-α-D-glucopyranoside)的制備10(600毫克,636微克分子)及5(286毫克,700微克分子)溶于干燥二氯甲烷30毫升,加入分子篩500毫克,在-15℃,氮?dú)獗Wo(hù)下,加入TMSOTf15微升,反應(yīng)1小時(shí)后加三乙胺終止,過(guò)濾,飽和碳酸氫納水溶液及水洗滌,濃縮,柱層析分離得到11649毫克,產(chǎn)率62%;[α]D20+43°(c,1.7,CHCl3);1H NMRδ7.82-6.96,5.76-5.62,5.57,5.18-4.68,4.93,4.69,4.43-3.36,2.10,2.03,2.02,1.9911.三糖受體12(Allyl 4,6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidene-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-4,6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-α-D-glucopyranoside)的制備11(360毫克,303微克分子)溶于6毫升甲醇及4毫升二氯甲烷中,加入硫脲115毫克(1.51毫克分子)及2,4-lutidine 36微升,回餾過(guò)夜,濃縮,二氯甲烷萃取,先后用1N鹽酸,飽和碳酸氫納水溶液,水洗,干燥,濃縮,柱層析分離得到12 249毫克,產(chǎn)率74%;[α]D20+43°(c,1.7,CHCl3);1H NMRδ7.82-6.96,5.76-5.62,5.57,5.18-4.68,4.93,4.69,4.43-3.36,2.10,2.03,2.02,1.9912.五糖13(Allyl 4,6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-3-O-chloroacetyl-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidene-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-4,6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-2-O-benzoyl-4,6-O-benzylidene-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-4,6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-α-D-glucopyranoside)的制備12(180毫克,162微克分子)及10(168毫克,178微克分子)溶于30毫升干燥二氯甲烷中,加入300毫克4A分子篩,在-15℃,氮?dú)獗Wo(hù)下,加入TMSOTf8微升,反應(yīng)1小時(shí)后加三乙胺終止,過(guò)濾,飽和碳酸氫納水溶液及水洗滌,濃縮,柱層析分離得到13 147毫克,產(chǎn)率48%;[α]D20+86°(c,1.6,CHCl3);1H NMRδ7.74-6.97,5.73-5.62,5.47,5.45,5.11-4.62,4.83,4.72,4.53,4.48,4.38-3.24,3.79,3.72,2.10,2.01,1.96,1.93,1.93,1.8413.五糖受體14(Allyl 4,6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-3-O-chloroacetyl-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-2-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-4,6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-2-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-4,6-di-O-acetyl--2-O-benzoyl-α-D-glucopyranoside)的制備13(100毫克,53微克分子)溶于二氯甲烷3毫升,加入乙酰氯的甲醇溶液(0.25M)3毫升,室溫下反應(yīng)2小時(shí),三乙胺中和,濃縮,柱層析分離得到14 71毫克,產(chǎn)率78%;[α]D20+40°(c,1.7,CHCl3);1H NMRδ7.81-6.92,5.74-5.64,5.28-4.71,4.91,4.66,4.50,4.49,4.36-3.25,3.76,3.66,2.09,2.09,2.08,2.01,1.95,1.8214.七糖15(Allyl 4,6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-3-O-chloroacetyl-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-2-O-benzoyl-(2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(1→6))-p-D-glucopyranosyl-(1→3)-4,6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-2-O-benzoyl-(2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(1-6))-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-4,6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-α-D-glucopyranoside)的制備14(40毫克,23微克分子)與苯甲?;膯翁枪w15(40毫克,54微克分子)及100毫克4A分子篩,在-15℃,氮?dú)獗Wo(hù)下,加入TMSOTf5微升,反應(yīng)2小時(shí)后加三乙胺終止,過(guò)濾,飽和碳酸氫納水溶液及水洗滌,濃縮,柱層析分離得到1627毫克,產(chǎn)率40%;[α]D20+7.2°(c,0.3,CHCl3);1H NMRδ8.02-6.90,5.91,5.90,5.73,5.69,5.69-5.58,5.51,5.49,5.18-4.49,4.40-3.22,3.74,3.61,2.06,2.06,2.05,2.00,1.98,1.8115.七糖苷17(Allyl β-D-glucopyranosyl-(1→3)-((β-D-glucopyranosyl-(1-6))-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-O-((β-D-glucopyranosyl-(1→6))-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-α-D-glucopyranoside)的制備飽和的甲醇氨溶液(5mL)與16(60毫克,20.7微克分子)的甲醇(4mL)溶液混合,室溫下反應(yīng)48小時(shí),濃縮反應(yīng)物,用Sephadex LH-20精制得到17(23.8mg,96%).[α]D20+10.0°(c,0.3,H2O);1H NMRδ6.00-5.91,5.35,5.24,4.94,4.77,4.73,4.73,4.67,4.49,4.4716.游離七糖18(β-D-glucopyranosyl-(1→3)-((β-D-glucopyranosyl-(1→6))β-D-glucopyranosyl-(1→3)-β-D-glucopyranosyl(1→3)-((β-D-glucopyranosyl-(1→6))-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-D-glucopyranose)的制備按由8制備9的方法,使100毫克16先脫掉烯丙基,然后按由16制備17的方法,脫掉?;玫接坞x七糖31毫克,產(chǎn)率76%。[α]D20+6.0°(c,0.5,H2O);1H NMRδ5.24,4.75,4.72,4.69,4.63,4.50,4.4權(quán)利要求
1.一種可用作抗腫瘤藥的、香菇多糖的七糖重復(fù)單元的合成方法,其特征在于2-O-苯甲?;?4,6-O-芐叉基-α-D-葡萄糖-烯丙基苷1首先在3位氯乙酰化得到2,2脫掉4,6位的芐叉基得到2-O-苯甲?;?3-O-氯乙?;?α-D-葡萄糖-烯丙基苷3,3乙?;蟮玫?,4脫掉3位氯乙酰基得到單糖受體5,如下圖所示 4脫掉1位烯丙基后得到1位為游離羥基的6,再活化得到單糖供體7,如下圖所示 單糖供體7與單糖受體1在路易斯酸催化下縮合得到雙糖8,將8脫掉烯丙基后得到1位為游離羥基的9,再活化后得到雙糖供體10,如下圖所示 雙糖供體10與另一單糖受體5在路易斯酸催化下縮合得到三糖11,11脫掉氯乙?;蟮玫饺鞘荏w12,如下圖所示 雙糖供體10與三糖受體12在路易斯酸催化下縮合得到五糖13,如下圖所示 13脫掉兩個(gè)芐叉基后,得到14,如下圖所示 14與苯甲酰化的葡萄糖供體15在路易斯酸催化下縮合,得到七糖16,如下圖所示 16脫掉?;吹玫讲槐Wo(hù)的七糖烯丙基苷17,若先脫掉烯丙基再脫掉?;?,即得到不保護(hù)的七糖,如下圖所示 以上圖中Bz=苯甲?;?Ac=乙酰基 CA=氯乙?;?All=烯丙基
2.一種可用作抗腫瘤藥的、香菇多糖的七糖重復(fù)單元的合成方法,其特征在于所述的路易斯酸為三甲基硅三氟甲磺酸酯(TMSOTf)或三氟化硼-乙醚絡(luò)和物(BF3.Et2O)。
全文摘要
本發(fā)明是關(guān)于有生物活性的、特別是涉及可用作抗腫瘤藥的香菇多糖的重復(fù)單元的合成。首先制備1-3連接的二糖和三糖,將二者連接得到1-3連接的五糖,將第二和第四糖單元的芐叉基脫掉,選擇性地在兩個(gè)6位與一個(gè)葡萄糖分子偶聯(lián),脫掉保護(hù)即得到香菇多糖的重復(fù)單元七糖。
文檔編號(hào)C08B37/00GK1336387SQ00120948
公開(kāi)日2002年2月20日 申請(qǐng)日期2000年8月2日 優(yōu)先權(quán)日2000年8月2日
發(fā)明者楊廣斌, 孔繁祚 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院生態(tài)環(huán)境研究中心