本發(fā)明涉及生物細(xì)胞領(lǐng)域，涉及一種豬胚成纖維細(xì)胞的制備方法。

背景技術(shù)：

成纖維細(xì)胞(fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細(xì)胞(mesenchymal cell)分化而來。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。根據(jù)不同功能活動狀態(tài)，可將細(xì)胞劃分成成纖維細(xì)胞和纖維細(xì)胞，成纖維細(xì)胞功能活動旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化。成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損以及骨創(chuàng)傷的修復(fù)有著十分重要的作用。豬胚成纖維細(xì)胞是成纖維細(xì)胞重要的一種，有很高的醫(yī)用價值，因此，需要對其進(jìn)行制備以滿足現(xiàn)今的需要。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明提供一種解決或部分解決上述問題的豬胚成纖維細(xì)胞的制備方法。

為達(dá)到上述技術(shù)方案的效果，本發(fā)明的技術(shù)方案為：一種豬胚成纖維細(xì)胞的制備方法，其特征在于，包含以下步驟：

取38℃孵化至1-2年的豬胚，碘酒消毒8分鐘，酒精脫碘后，無菌操作分離胚體，用無菌的D-Hank’s液輕輕洗滌8次，加入3～8ml的0.28％胰酶，于37℃的溫度下，消化20～30分鐘，消化過程中輕輕吹打數(shù)次，以使消化后的胚體盡量地分散單個細(xì)胞，然后用臺盼藍(lán)進(jìn)行活細(xì)胞計數(shù)，按照480～500萬細(xì)胞/瓶的濃度分裝于100ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，置于37℃的8％濃度的二氧化碳培養(yǎng)箱中，待細(xì)胞長成單層后以備接種，所述豬胚的細(xì)胞生長液為含5％犢牛血清、3ul/ml兩性霉素、青霉素和鏈霉素混合而成。

本發(fā)明的有益成果是：本發(fā)明擴(kuò)增了豬胚成纖維細(xì)胞，通過完善的實驗步驟對整個制備過程進(jìn)行限定，并嚴(yán)格規(guī)定其中的參數(shù)，使制備方法的結(jié)果更加完善。

具體實施方式

為了使本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題、技術(shù)方案及有益效果更加清楚明白，以下結(jié)合實施例，對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說明。應(yīng)當(dāng)說明的是，此處所描述的具體實施例僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明，能實現(xiàn)同樣功能的產(chǎn)品屬于等同替換和改進(jìn)，均包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。具體方法如下：

成纖維細(xì)胞(fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細(xì)胞(mesenchymal cell)分化而來。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。根據(jù)不同功能活動狀態(tài)，可將細(xì)胞劃分成成纖維細(xì)胞和纖維細(xì)胞，成纖維細(xì)胞功能活動旺盛，細(xì)胞質(zhì)弱嗜堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化。成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損以及骨創(chuàng)傷的修復(fù)有著十分重要的作用。

在胚胎發(fā)育中，成纖維細(xì)胞和其他的結(jié)締組織一樣來源于中胚層。

分泌細(xì)胞外間質(zhì)的前體，以維持結(jié)締組織結(jié)構(gòu)的完整性。成纖維細(xì)胞分泌各類基質(zhì)和多種纖維?；|(zhì)的組成決定結(jié)締組織的物理特性。

在形態(tài)學(xué)上，成纖維細(xì)胞具多樣性，其形態(tài)取決于其所處的位置和活動性。與上皮細(xì)胞不同，成纖維細(xì)胞不形成細(xì)胞單層。還可以緩慢地遷移。

成纖維細(xì)胞是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。

根據(jù)不同功能活動狀態(tài)，可將細(xì)胞劃分成成纖維細(xì)胞和纖維細(xì)胞，成纖維細(xì)胞功能活動旺盛，細(xì)胞質(zhì)弱嗜堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化。成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損以及骨創(chuàng)傷的修復(fù)有著十分重要的作用。

以上所述僅為本發(fā)明之較佳實施例，并非用以限定本發(fā)明的權(quán)利要求保護(hù)范圍。同時以上說明，對于相關(guān)技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)可以理解及實施，因此其他基于本發(fā)明所揭示內(nèi)容所完成的等同改變，均應(yīng)包含在本權(quán)利要求書的涵蓋范圍內(nèi)。

本發(fā)明的有益成果是：本發(fā)明擴(kuò)增了豬胚成纖維細(xì)胞，通過完善的實驗步驟對整個制備過程進(jìn)行限定，并嚴(yán)格規(guī)定其中的參數(shù)，使制備方法的結(jié)果更加完善。