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一種重組菌催化萊鮑迪甙A制備萊鮑迪甙M2的方法與流程

文檔序號:12644924閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種重組菌催化萊鮑迪甙A制備萊鮑迪甙M2的方法,其特征在于,將重組菌誘導表達后取粗酶液,加入到反應混合物中催化萊鮑迪甙A生成萊鮑迪甙M2,所述反應混合物中包括萊鮑迪甙A、蔗糖和磷酸鈉緩沖液;所述重組菌中同時含有番茄來源糖基轉(zhuǎn)移酶UGTSL2基因和馬鈴薯來源蔗糖合酶StSUS1基因。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種重組菌催化萊鮑迪甙A制備萊鮑迪甙M2的方法,其特征在于,所述番茄來源糖基轉(zhuǎn)移酶UGTSL2基因序列如SEQ.NO.1所示,所述馬鈴薯來源蔗糖合酶StSUS1基因序列如SEQ.NO.2所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種重組菌催化萊鮑迪甙A制備萊鮑迪甙M2的方法,其特征在于,所述反應混合物中萊鮑迪甙A濃度為4~10g/L,蔗糖濃度為30~50g/L,粗酶液濃度為2~10g/L,采用磷酸鈉緩沖液調(diào)節(jié)pH為6.4~8。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種重組菌催化萊鮑迪甙A制備萊鮑迪甙M2的方法,其特征在于,所述反應溫度為20℃~40℃,反應時間為2~36h。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種重組菌催化萊鮑迪甙A制備萊鮑迪甙M2的方法,其特征在于,所述重組菌的誘導表達條件為:將重組菌接種到LB培養(yǎng)基中,于20~37℃、250rpm振蕩培養(yǎng)8h,再將培養(yǎng)菌液按2%接種量接入誘導培養(yǎng)基中,于200rpm, 20~37℃培養(yǎng)2h,待OD600達到0.2左右時轉(zhuǎn)20℃~37℃誘導培養(yǎng)22h,離心收集菌體。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種重組菌催化萊鮑迪甙A制備萊鮑迪甙M2的方法,其特征在于,所述重組菌是將番茄來源糖基轉(zhuǎn)移酶UGTSL2基因克隆到pRSFDuet-1的NdeI與XhoI位點之間,構(gòu)建得到重組質(zhì)粒pRSFDuet-SL2,然后再將馬鈴薯來源蔗糖合酶StSUS1基因克隆到pRSFDuet-SL2的NcoI和EcoRI位點之間,構(gòu)建得到重組質(zhì)粒pRSFDuet-SL2-SUS1,將重組質(zhì)粒pRSFDuet-SL2-SUS1轉(zhuǎn)化到宿主細胞中,得到的重組菌。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種重組菌催化萊鮑迪甙A制備萊鮑迪甙M2的方法,其特征在于,所述反應混合物中萊鮑迪甙A濃度為10g/L,蔗糖濃度為30g/L,粗酶液濃度為8g/L,采用磷酸鈉緩沖液調(diào)節(jié)pH為7.2。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種重組菌催化萊鮑迪甙A制備萊鮑迪甙M2的方法,其特征在于,所述LB培養(yǎng)基配方為0.5g/L酵母粉、0.5g/L氯化鈉、1g/L胰蛋白胨、0.05g/L卡納霉素。

9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種重組菌催化萊鮑迪甙A制備萊鮑迪甙M2的方法,其特征在于,所述誘導培養(yǎng)基配方為25g/L酵母粉、15g/L胰蛋白胨、10g/L氯化鈉、2g/L葡萄糖、0.05~0.9g/L乳糖、0.05g/L卡納霉素。

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