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一種基于混合模式的擴(kuò)張床吸附分離人血白蛋白方法與流程

文檔序號(hào):12399381閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種基于混合模式的擴(kuò)張床吸附分離人血白蛋白方法,其特征在于包括如下步驟:

1)取含有人血白蛋白的酵母發(fā)酵液,調(diào)節(jié)pH至6.0,加入辛酸鈉至5~20mM,68℃加熱30min滅活蛋白酶,得到人血白蛋白粗品溶液;

2)混合模式吸附劑裝填到擴(kuò)張床中,平衡緩沖液預(yù)平衡,達(dá)到1.8~2.5倍膨脹率,保持20分鐘;

3)調(diào)節(jié)人血白蛋白粗品溶液的pH至5.0~6.0,上樣到擴(kuò)張床中,平衡緩沖液沖洗,沖洗緩沖液沖洗,洗脫緩沖液洗脫,收集洗脫峰對(duì)應(yīng)的洗脫緩沖液,得到人血白蛋白溶液;

4)將人血白蛋白溶液脫鹽,冷凍干燥,得到純度大于95%的人血白蛋白;

所述的混合模式吸附劑為添加有增重劑的多孔微球,增重劑為石英砂、鈦白粉或碳化鎢粉末,多孔微球?yàn)榄傊俏⑶颉⒗w維素微球或聚丙烯酰胺微球;

所述的混合模式吸附劑的功能配基為色氨酸及其衍生物,包括L-色氨酸、L-色氨酸甲酯、L-色氨酸乙酯、5-羥基-L-色氨酸、N-乙酰-L-色氨酸、色胺和4-(1H-吲哚-2-基)苯胺;

所述的平衡緩沖液pH值為5.0~6.0;

所述的沖洗緩沖液pH值為7.0~8.0;

所述的洗脫緩沖液pH值為3.5~4.5。

2.如權(quán)利要求1所述的一種基于混合模式的擴(kuò)張床吸附分離人血白蛋白方法,其特征在于所述的含有人血白蛋白的酵母發(fā)酵液為畢赤酵母、漢遜酵母或釀酒酵母表達(dá)重組人血白蛋白的發(fā)酵液。

3.如權(quán)利要求1所述的一種基于混合模式的擴(kuò)張床吸附分離人血白蛋白方法,其特征在于所述的平衡緩沖液為磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液或乙酸-乙酸鈉緩沖液,所述的沖洗緩沖液為磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液或磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液,所述的洗脫緩沖液為乙酸-乙酸鈉緩沖液或檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。

4.如權(quán)利要求1所述的一種基于混合模式的擴(kuò)張床吸附分離人血白蛋白方法,其特征在于所述的步驟3)中的沖洗緩沖液的沖洗體積為5-20倍柱體積。

5.如權(quán)利要求1所述的一種基于混合模式的擴(kuò)張床吸附分離人血白蛋白方法,其特征在于所述的步驟1)中酵母發(fā)酵液pH值和步驟3)人血白蛋白粗品溶液的pH調(diào)節(jié)所用酸溶液為乙酸或檸檬酸,所用堿溶液為氫氧化鈉溶液。

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