1.一種菩薩根瘤菌(Rhizobium pusense)CGMCC No.12954。
2.利用菩薩根瘤菌制取β-1,3葡聚糖發(fā)酵液的方法,其特征在于該方法包括如下工藝步驟:
A、將菩薩根瘤菌(Rhizobium pusense)CGMCC No.12954接種到滅菌后且含有碳源、氮源及必要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)液中;
B、進(jìn)行通氣攪拌發(fā)酵;
C、當(dāng)培養(yǎng)液粘度不再增長(zhǎng)或發(fā)酵周期≤48小時(shí)發(fā)酵結(jié)束。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用菩薩根瘤菌制取β-1,3葡聚糖發(fā)酵液的方法,其特征在于所述的步驟A的培養(yǎng)液中的碳源選自葡萄糖、麥芽糖、玉米淀粉水解液、玉米漿粉中的一種或其結(jié)合;氮源選自豆粉、豆油、蛋白胨、酵母膏、硫酸銨中的一種或其結(jié)合。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用菩薩根瘤菌制取β-1,3葡聚糖發(fā)酵液的方法,其特征在于所述的步驟A中按種子液:培養(yǎng)液的體積百分比為12%-18%的接種量將菩薩根瘤菌(Rhizobium pusense)CGMCC No.12954接入發(fā)酵罐中的培養(yǎng)液中。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用菩薩根瘤菌制取β-1,3-葡聚糖發(fā)酵液的方法,其特征在于所述的玉米淀粉水解液采用如下方法制作:將玉米淀粉用自來(lái)水配成質(zhì)量百分比濃度為30%的混合液,升溫至90-95℃,維持40分鐘。
6.根據(jù)權(quán)利要求3或5中任一項(xiàng)所述的利用菩薩根瘤菌制取β-1,3葡聚糖發(fā)酵液的方法,所述的步驟A中培養(yǎng)液由如下質(zhì)量百分含量的組份組成:
玉米淀粉水解液4.0%-4.5%;麥芽糖2.0%-2.5%;豆粉0.3%-0.5%;硫酸鎂0.1%-0.15%;豆油0.05%-0.15%;余量為無(wú)菌水;pH=8.0-8.5。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的利用菩薩根瘤菌制取β-1,3葡聚糖發(fā)酵液的方法,其特征在于所述的步驟A中培養(yǎng)液配制過程如下:將培養(yǎng)液中各組分按比例投入發(fā)酵罐中,加自來(lái)水至規(guī)定計(jì)料體積,攪拌30-40分鐘使之溶解,用氫氧化鈉溶液調(diào)培養(yǎng)液pH=8.0-8.5,攪拌30-40分鐘混合均勻。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用菩薩根瘤菌制取β-1,3葡聚糖發(fā)酵液的方法,其特征在于所述的步驟B包括如下工藝步驟:
10-30小時(shí):溫度30℃-32℃,壓力0.03-0.05MPa,pH=7.0-7.3,通風(fēng)量0.4-0.5vvm;
31小時(shí)-放罐:溫度26℃-29℃、壓力0.03-0.05MPa、pH=7.0-7.3,通風(fēng)量0.4-0.5vvm。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的利用菩薩根瘤菌制取β-1,3葡聚糖發(fā)酵液的方法,其特征在于所述的步驟B中進(jìn)行通氣攪拌發(fā)酵過程中補(bǔ)入雙氧水及微量元素;具體條件如下:
12-15小時(shí):補(bǔ)入微量元素;
23-26小時(shí):補(bǔ)入雙氧水。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的利用菩薩根瘤菌制取β-1,3葡聚糖發(fā)酵液的方法,其特征在于所述的微量元素采用如下方式配制成微量元素溶液:檸檬酸100g,氫氧化鈣5g,氫氧化鎂7g,硫酸錳0.083g,硫酸鋅0.066g,五水硫酸銅0.025g,七水硫酸鈷0.028g,硫酸鎂8.6g,硫酸亞鐵1.8g,硼酸0.006g,加蒸餾水定容至1000ml后滅菌;微量元素溶液的加入量為每1000L培養(yǎng)液加入微量元素溶液1L。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的利用菩薩根瘤菌制取β-1,3葡聚糖發(fā)酵液的方法,其特征在于所述的雙氧水的質(zhì)量百分比濃度為2-3%,加入量為培養(yǎng)液體積的0.05%。
12.根據(jù)權(quán)利要求2或3中任一項(xiàng)所述的利用菩薩根瘤菌制取β-1,3葡聚糖發(fā)酵液的方法,其特征在于步驟A是將菩薩根瘤菌(Rhizobium pusense)CGMCC No.12954經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)后,按照種子液:發(fā)酵規(guī)定計(jì)料體積培養(yǎng)液的體積百分比為12%-18%的接種量接種于培養(yǎng)液中。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的利用菩薩根瘤菌制取β-1,3葡聚糖發(fā)酵液的方法,其特征在于所述的擴(kuò)大培養(yǎng)過程包括:
(1)將菩薩根瘤菌(Rhizobium pusense)CGMCC No.12954接種于搖瓶種子培養(yǎng)基表面制成搖瓶種子;
(2)將搖瓶種子經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)后制成種子液;
(3)將制成的種子液按種子液:發(fā)酵規(guī)定計(jì)料體積培養(yǎng)液的體積百分比為12%-18%的接種量接入發(fā)酵罐中的培養(yǎng)液,進(jìn)行發(fā)酵。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的利用菩薩根瘤菌制取β-1,3葡聚糖發(fā)酵液的方法,其特征在于所述的擴(kuò)大培養(yǎng)過程步驟(1)中制備搖瓶種子的工藝條件是:挑取2環(huán)斜面菌種接入滅菌后的搖瓶種子培養(yǎng)基中,經(jīng)振蕩培養(yǎng)制成搖瓶種子,培養(yǎng)溫度為30-32℃,搖床轉(zhuǎn)速為200-220轉(zhuǎn)/分鐘,培養(yǎng)周期為10-14小時(shí);
搖瓶種子培養(yǎng)基由如下質(zhì)量百分含量的組分組成:
葡萄糖2.5%-2.8%;麥芽糖1.5%-2.0%;蛋白胨1.0%-1.5%;玉米漿粉1.0%-1.5%;余量為無(wú)菌水;pH=7.0-7.3。
15.根據(jù)權(quán)利要求11所述的利用菩薩根瘤菌制取β-1,3葡聚糖發(fā)酵液的方法,其特征在于所述的擴(kuò)大培養(yǎng)過程步驟(2)中的擴(kuò)大培養(yǎng)依次包括一級(jí)種子的制備、二級(jí)種子的制備,其中一級(jí)種子培養(yǎng)液由下列質(zhì)量百分含量的組分組成:
葡萄糖2.5%-2.8%;麥芽糖1.5%-2.0%;酵母膏0.4%-0.6%;硫酸銨0.2%-0.3%;余量為無(wú)菌水;pH=7.0-7.3;
接種量為搖瓶種子:一級(jí)種子培養(yǎng)液的體積比=0.8%-1.0%,將搖床種子接入滅菌后的一級(jí)種子培養(yǎng)液經(jīng)過培養(yǎng)制成一級(jí)種子,一級(jí)種子的制備過程中的工藝條件是培養(yǎng)溫度30℃-32℃、通風(fēng)量0.9vvm-1.0vvm、培養(yǎng)周期10-14小時(shí)。
16.根據(jù)權(quán)利要求13所述的利用菩薩根瘤菌制取β-1,3葡聚糖發(fā)酵液的方法,其特征在于所述的二級(jí)種子培養(yǎng)液由如下質(zhì)量百分含量的組份組成:
葡萄糖2.5%-2.8%;麥芽糖1.5%-2.0%;豆粉0.8%-1.0%;硫酸銨0.2%-0.3%;余量為無(wú)菌水;pH=7.0-7.3;
接種量為一級(jí)種子:二級(jí)種子培養(yǎng)液的體積比=12%-18%,將一級(jí)種子接入滅菌后的二級(jí)種子培養(yǎng)液經(jīng)過培養(yǎng)制成二級(jí)種子,二級(jí)種子的制備過程中的工藝條件是培養(yǎng)溫度30℃-32℃、通風(fēng)量0.9vvm-1.0vvm、培養(yǎng)周期8-10小時(shí)。
17.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用菩薩根瘤菌制取β-1,3葡聚糖發(fā)酵液的方法,其特征在于所述的步驟C中培養(yǎng)液的粘度測(cè)定方法如下:選用上海天平儀器廠的NDJ-1RotationalViscometer,步驟為取培養(yǎng)液500ml置于燒杯內(nèi),用Rotor為3,RPM為6測(cè)定,讀出表盤示數(shù)乘以系數(shù)即得粘度值。