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一種構(gòu)建多樣品全長轉(zhuǎn)錄組混合文庫的方法與流程

文檔序號(hào):12411769閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種構(gòu)建多樣品全長轉(zhuǎn)錄組混合文庫的方法,其特征在于,在逆轉(zhuǎn)錄過程中使用帶有鑒別標(biāo)簽的引物分別對不同樣品中的mRNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,合成cDNA,然后將所述來自不同樣品中的cDNA混合并進(jìn)行處理得到所述文庫。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述帶有鑒別標(biāo)簽的引物按5’-3’的順序包括以下區(qū)段:擴(kuò)增區(qū)序列、標(biāo)簽區(qū)序列和Poly(A)錨定區(qū)序列,所述Poly(A)錨定區(qū)序列包括多個(gè)胸苷,所述標(biāo)簽區(qū)序列為區(qū)別來自不同樣品的cDNA的特異性序列,所述擴(kuò)增區(qū)序列為用于PCR擴(kuò)增的序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于,所述帶有鑒別標(biāo)簽的引物的3’末端還依次包含核苷酸V和N,其中,V表示A、C或G,所述N表示A、T、C或G,并且所述帶有鑒別標(biāo)簽的引物為滿足V和N的條件的所有序列的混合物。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于,所述標(biāo)簽區(qū)序列的長度為10-18nt。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于,包括以下步驟:

S1:使用所述帶有鑒別標(biāo)簽的引物分別對不同樣品中的mRNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,合成cDNA;

S2:取來自各樣品的cDNA等量混合;

S3:按片段大小篩選片段;

S4:PCR擴(kuò)增所篩選的片段;

S5:向S4擴(kuò)增的片段添加接頭;

S6:用核酸外切酶消化S5得到的片段,消化后純化DNA片段即得到所述文庫。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法,其特征在于,S3篩選的片段的大小為0.5-10KB。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法,其特征在于,S4PCR擴(kuò)增時(shí)所用的混合cDNA的總量為0.1-10μg。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法,其特征在于,在S4PCR擴(kuò)增后,S5添加測序接頭之前,還包括以下步驟:

S7:DNA損傷修復(fù);

S8:末端修復(fù)。

9.根據(jù)權(quán)利要求5-8中任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,在S6后還包括S9:文庫質(zhì)檢,確定文庫大小。

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