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一種慶大霉素C1a的制備方法與流程

文檔序號(hào):12109024閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種慶大霉素C1a的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:

步驟(1)、將慶大霉素B產(chǎn)生菌進(jìn)行微波誘變,然后利用化學(xué)誘變劑進(jìn)行化學(xué)誘變得到慶大霉素C1a產(chǎn)生菌;

步驟(2)、挑選穩(wěn)定且相對(duì)高產(chǎn)的慶大霉素C1a產(chǎn)生菌,在35~40℃下斜面培養(yǎng)8~15天;

步驟(3)、挑選成熟的菌種斜面接種于種子培養(yǎng)基,在35~40℃,200~250rpm下在搖床上培養(yǎng)40~60h;然后,接種于一級(jí)種子罐中的一級(jí)種子培養(yǎng)基上,30~40℃下培養(yǎng)40~60h;然后,接種于二級(jí)種子罐中的二級(jí)種子培養(yǎng)基上,30~40℃下培養(yǎng)20~30h;

步驟(4)、接種于發(fā)酵罐內(nèi)的發(fā)酵培養(yǎng)基上,在30~40℃下,發(fā)酵進(jìn)行至110~160h,放罐,得發(fā)酵液;

步驟(5)、對(duì)步驟(4)得到的發(fā)酵液使用微濾膜去除菌絲體及發(fā)酵液殘基;微濾透過(guò)液經(jīng)過(guò)超濾膜去除蛋白質(zhì)、色素和多糖;將收集的超濾透過(guò)液經(jīng)過(guò)納濾膜進(jìn)行常溫脫鹽、富集,脫鹽液經(jīng)濃縮、干燥制得慶大霉素C1a粗品。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法,所述步驟(1)中的微波誘變具體為:吸取2mL孢子液懸于EP管中,將EP管放于冰浴燒杯中,在微波爐中以700W、2450MHz處理10~60s,然后在20~38℃下恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行6~8h;所述化學(xué)誘變劑為濃度為0.4~1.0mg/mL的亞硝基胍。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法,所述步驟(2)中的斜面培養(yǎng)基的組成為:玉米淀粉1.8~2.2g/L,KNO3 0.05~0.15g/L,NaCl0.04~0.06g/L,MgSO4 0.03~0.07g/L,K2HPO40.02~0.04g/L,小麥粉1.8~2.2g/L,碳酸鈣0.09~0.11g/L,瓊脂1.7~2.3g/L,余量為水。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法,所述步驟(3)中的搖瓶培養(yǎng)基的組成為:淀粉1.8~2.2g/L,黃豆餅粉1.8~2.2g/L,葡萄糖0.4~0.6g/L,玉米粉0.3~0.7g/L,蛋白胨0.1~0.3g/L,KNO3 0.04~0.06g/L,K2HPO4 0.01~0.03g/L,碳酸鈣0.3~0.5g/L,余量為水。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法,所述步驟(3)中,搖瓶培養(yǎng)基的接種量為10~15%;

所述一級(jí)種子培養(yǎng)基的組成為:淀粉0.8~1.2g/L,黃豆餅粉1.4~1.6g/L,玉米粉0.8~1.2g/L,KNO3 0.04~0.06g/L,蛋白胨0.1~0.3g/L,泡敵0.03~0.05g/L,碳酸鈣0.3~0.5g/L,余量為水,一級(jí)種子培養(yǎng)基的pH為8.0~8.4;

所述二級(jí)種子培養(yǎng)基的組成為:淀粉1.8~2.2g/L,黃豆餅粉1.4~1.6g/L,玉米粉0.4~0.6g/L,葡萄糖0.4~0.6g/L,蛋白胨0.1~0.3g/L,KNO3 0.05~0.15g/L,泡敵0.03~0.05g/L,余量為水,二級(jí)種子培養(yǎng)基的pH為8.0~8.4。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法,所述步驟(3)中的發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為:淀粉3.8~4.2g/L,黃豆餅粉3.3~3.7g/L,葡萄糖0.4~0.6g/L,玉米粉1.4~1.6g/L,蛋白胨0.1~0.3g/L,KNO3 0.05~0.15g/L,(NH4)2SO4 0.04~0.06g/L,泡敵0.03~0.05g/L,碳酸鈣0.3~0.5g/L,余量為水,發(fā)酵培養(yǎng)基的pH為5.0~5.4。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法,所述步驟(5)中使用微濾膜去除菌絲體及發(fā)酵液殘基的操作壓力為1.0~3.0bar;所述步驟(5)中使用超濾膜去除蛋白質(zhì)、色素和多糖的操作壓力為1.0~6bar;所述步驟(5)中使用納濾膜進(jìn)行常溫脫鹽、富集的操作壓力為6.0~10bar。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法,所述步驟(5)中的微濾膜選用截留分子量為20000~500000的分離膜;所述步驟(5)中的超濾膜選用截留分子量為5000~20000的分離膜;所述步驟(5)中的納濾膜選用截留分子量為200~800的分離膜。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法,所述微濾膜采用的膜材料為陶瓷或者金屬;超濾膜采用的膜材料為聚乙烯、聚偏氟乙烯或者聚氯乙烯;所述納濾膜采用的膜材料為聚乙烯醇、磺化聚砜膜或者醋酸纖維素。

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