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包埋型納米鐵/復(fù)合微生物菌劑及其制備方法與流程

文檔序號:12411739閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.包埋型納米鐵/復(fù)合微生物菌劑的制備方法,其特征在于包括如下步驟:

(1)菌體的制備:

分別挑取土壤桿菌(Agrobacterium sp.)、陰溝腸桿菌(Enterobactercloacae.)、桿狀菌(Bacillus sp.)、戈登氏菌(Gordonia sp.)、惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida.)、施氏假單胞菌(Pseudomonas stutzeri.)2環(huán)分別轉(zhuǎn)移到含營養(yǎng)液中,細(xì)菌在35‐37℃的條件下培養(yǎng)1‐3天,以5‐18%的體積比例接種至含增殖培養(yǎng)基的容器中,在35‐37℃的條件下培養(yǎng)1‐3天,離心處理,獲得上述菌體的對數(shù)生長期細(xì)胞;用磷酸鹽緩沖液洗滌1‐2次后;按體積百分比計(jì),分別取5~8%土壤桿菌,4~6%桿狀菌,7~15%陰溝腸桿菌,10~19%戈登氏菌,13~27%惡臭假單胞菌和35~45%施氏假單胞菌混合,獲得用于三氯生降解的菌體A;

(2)納米鐵溶液的制備:

采用液相還原法,在氮?dú)獗Wo(hù)的液相體系中,強(qiáng)還原劑KBH4還原FeSO4·7H2O得到Fe°,用Fe°制備濃度為0.1~0.6g/L的納米鐵溶液,記為溶液B;

(3)包埋劑瓊脂、PVA、SiO2溶液的制備:

將瓊脂、PVA在90‐100℃左右的溫度下加熱完全溶解于清水,得到瓊脂質(zhì)量百分含量為5~9%,PVA質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為7.5~15%的溶液,再加入SiO2,控制SiO2在混合物中質(zhì)量濃度為1~3mg/L,待混合交替冷卻至50℃,記為溶液C;

(4)交聯(lián)劑硫酸鋁飽和硼酸溶液的制備:

將硫酸鋁粉末溶于飽和硼酸溶液中,得到摩爾濃度為0.1~1mol/L的硫酸鋁的飽和硼酸溶液,記為溶液D;

(5)納米鐵/復(fù)合微生物菌劑制備:

在50‐70℃恒溫水浴條件下,按體積比分別取15~18%溶液B,6~15%的菌體A加入到57~66%溶液C中,攪拌混合均勻,在氮?dú)獗Wo(hù)的環(huán)境下滴加至室溫的1‐22%溶液D中,交聯(lián)處理,清洗,保存,得到納米鐵/復(fù)合微生物菌劑。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征在于,所述營養(yǎng)液主要成分為牛肉膏6.0g/L,NaCl5.0g/L,蛋白胨10.0g/L,大豆粉2.0g/L,pH 6.5,其余為水。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征在于,所述增殖培養(yǎng)基主要成分為酪蛋白20.0g/L,磷酸氫鉀3.0g/L,葡萄糖3.0g/L,大豆粉4.0g/L,氯化鈉5.0g/L,其余為水。

4.據(jù)權(quán)利要求1所述的其制備方法,其特征在于,按體積百分比計(jì),所述磷酸鹽緩沖液的成分為氯化鈉9.0g/L,氯化鉀0.3g/L,磷酸氫二鉀1.2g/L和磷酸二氫鉀0.3g/L,其余為水。

5.據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征在于,所述的保存是指在無菌生理鹽水中浸泡并放置冰箱中4℃下保存。

6.據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征在于,所述土壤桿菌(Agrobacterium sp.)、陰溝腸桿菌(Enterobactercloacae.)、桿狀菌(Bacillus sp.)、戈登氏菌(Gordonia sp.)、惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida.)、施氏假單胞菌(Pseudomonas stutzeri.)2環(huán)分別轉(zhuǎn)移到含30‐40mL營養(yǎng)液中。

7.據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征在于,所述交聯(lián)處理是指4‐6℃條件下交聯(lián)10~36h。

8.據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征在于,步驟1)所述的離心處理是指以4000‐5000rpm的速度離心15‐30min。

9.據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征在于,所述的清洗是用0.8‐1.2%的NaCl溶液洗滌。

10.一種用于降解三氯生的包埋型納米鐵/復(fù)合微生物菌劑,其特征在于其由權(quán)利要求1‐9任一項(xiàng)所述制備方法制得。

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