1.一種鑒定腸膜明串珠菌腸膜亞種的引物,其特征在于,該引物如序列表SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒定腸膜明串珠菌腸膜亞種的引物,其特征在于,該引物是通過GH70糖基轉(zhuǎn)移酶編碼基因設(shè)計得到的。
3.一種鑒定腸膜明串珠菌腸膜亞種的方法,其特征在于,該方法包括以下步驟:
(1)提取待測菌株樣品的基因組DNA;
(2)以菌株樣品的基因組DNA為模板,采用SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示的引物,進(jìn)行PCR擴(kuò)增,得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;
(3)對PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行雙向測序,獲得整個擴(kuò)增片段的序列;
(4)對擴(kuò)增片段的序列進(jìn)行Blastn分析,通過比對得到相似度最高的序列所對應(yīng)的物種,從而判斷待測菌株為哪種腸膜明串珠菌腸膜亞種。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的腸膜明串珠菌腸膜亞種的鑒定方法,其特征在于,步驟(2)中,PCR擴(kuò)增的反應(yīng)體系為:2ng/μl DNA模板2μl、0.5μmol/L引物1μl、0.2mmol/L dNTP 2μl、1.5mmol/L的MgSO41μl、10×PCR反應(yīng)緩沖液2μl、5U/μl rTaq DNA聚合酶0.5μl,加水至20μl。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的腸膜明串珠菌腸膜亞種的鑒定方法,其特征在于,步驟(2)中,PCR擴(kuò)增的反應(yīng)程序為:95℃預(yù)變性10min;95℃變性30s、48℃退火30s、72℃延伸120s,35個循環(huán);72℃延伸10min。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的腸膜明串珠菌腸膜亞種的鑒定方法,其特征在于,步驟(2)中,將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳以確定待測菌株是否為腸膜明串珠菌腸膜亞種。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的腸膜明串珠菌腸膜亞種的鑒定方法,其特征在于,步驟(2)中,取PCR擴(kuò)增產(chǎn)物5μL在1%瓊脂糖凝膠中以5V/cm的電壓,電泳20-30min,使用EB染色,電泳結(jié)果在紫外凝膠成像系統(tǒng)上拍照。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的腸膜明串珠菌腸膜亞種的鑒定方法,其特征在于,步驟(3)中,雙向測序所用的引物序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示。
9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的腸膜明串珠菌腸膜亞種的鑒定方法,其特征在于,步驟(3)中,將兩條引物測序結(jié)果進(jìn)行拼接后,獲得整個擴(kuò)增片段的序列。
10.權(quán)利要求1所述的引物在鑒定腸膜明串珠菌腸膜亞種中的應(yīng)用。