本發(fā)明涉及一種新型DNA穩(wěn)定溶液，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

DNA是染色體的重要組成充分，是真核生物的遺傳基本物質(zhì)，含有物種個體的遺傳信息，可用于構(gòu)建基因組文庫、分離所需的基因和檢測相關(guān)的分子標(biāo)記等。由于DNA所含的遺傳信息量大，并且容易獲取，具有極其穩(wěn)定的化學(xué)性質(zhì)，是目前種質(zhì)資源和遺傳資源收集和保存的主要內(nèi)容之一。

DNA分子的序列結(jié)構(gòu)具有三個重要特性：(1)不同個體序列不一樣；(2)終生不變；(3)同一人體各不同部位細(xì)胞中的DNA序列相同。因此DNA分子本身具備檔案的特性，即具有長期穩(wěn)定性、信息屬性、個體特異性和可以備查的屬性。

實際上，在疾病基因組學(xué)、藥物基因組學(xué)、群體遺傳學(xué)和進(jìn)化等研究領(lǐng)域，DNA是最可靠的證據(jù)和研究過程的基本材料，被廣泛應(yīng)用。同時生命科學(xué)研究者日益認(rèn)識到保存DNA對于今后系統(tǒng)生物醫(yī)學(xué)的發(fā)展的重要性，各國紛紛開始保存DNA。

DNA是由許多脫氧核苷酸殘基按一定順序彼此用3’，5’-磷酸二酯鍵相連構(gòu)成的長鏈，形成鏈的作用力是磷酸二酯鍵，易被酸水解；另外，大多數(shù)DNA含有兩條這樣的長鏈，兩條鏈間以氫鍵相連接，氫鍵在酸性環(huán)境內(nèi)易開鍵，也會造成DNA的降解。

為了維持DNA結(jié)構(gòu)的完整性，避免DNA大規(guī)模斷裂和降解，DNA最佳保存方法是干粉-80℃或者液氮低溫保存，但要制成干粉則需要大量的DNA，取材困難，在實際DNA樣本資源收集中不具有操作性。而用無水乙醇保存DNA，雖然可以事先分裝保存，但也存在反復(fù)凍融問題。而固相DNA保存技術(shù)是最近提出的新概念，適用于永久保存，并且這種方法的保存基質(zhì)是否影響DNA后續(xù)實驗、保存具體效果，目前無這方面的任何數(shù)據(jù)，尚有待時間考驗。并且對于保存期間需要多次使用的樣本，需要重新提取DNA，操作復(fù)雜，并且容易導(dǎo)致DNA斷裂，將導(dǎo)致一些對DNA質(zhì)量要求高的檢測實驗無法進(jìn)行。

現(xiàn)有的許多DNA保存的方法是溶解在TE緩沖液或者雙蒸水中，在-20℃或-80℃下長期保存，這兩種保存方法隨著時間的推移，DNA會有降解。

現(xiàn)有技術(shù)中，中國專利申請CN 102559654A公開了一種DNA保存溶劑，該DNA保存溶劑的組分包括：甘油、TE緩沖液、1-羧基-N，N，N-三甲基乙內(nèi)酯，其中，甘油的終體積為25％～80％，TE緩沖液的終濃度為1×TE～5×TE，1-羧基-N，N，N-三甲基乙內(nèi)酯的終濃度為1～6mol/L。這種DNA保存溶液，組分較多，溶液配置復(fù)雜，成本較高。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述不足，而提供一種轉(zhuǎn)染融合度高，成分簡單，DNA結(jié)構(gòu)保持穩(wěn)定，不易降解的新型DNA穩(wěn)定溶液。

本發(fā)明解決上述問題所采用的技術(shù)方案是：該新型DNA穩(wěn)定溶液，其特征在于，由以下成分配比組成：

磷酸鉀 0.1M，

葡萄糖 10mM，

乙二胺四乙酸二鈉 10mM，

其溶劑為水。

本發(fā)明所述DNA保存溫度為-20℃或-80℃。

一所述新型DNA穩(wěn)定溶液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：將磷酸鉀、葡萄糖、乙二胺四乙酸二鈉按比例加入水中，并混合均勻。

本發(fā)明的優(yōu)點為：溶解在這種新型溶液中的血液基因組、質(zhì)粒DNA以及植物基因組，在-20℃或-80℃下保存三年不降解。但是同樣的DNA溶解在TE緩沖液中會部分降解，本發(fā)明可以很好的使DNA保持穩(wěn)定，解決了被降解的弊端。具體優(yōu)點為：

1、磷酸鉀用于緩沖系統(tǒng)符合細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的生理范圍(pKa＝7.2)，可以保持DNA的穩(wěn)定；

2、葡萄糖可以增加溶液的粘度，維持滲透壓，防止DNA受機(jī)械剪切力作用而降解；

3、乙二胺四乙酸二鈉又叫做EDTA-2Na，是化學(xué)中一種良好的配合劑，它有六個配位原子，形成的配合物叫做鰲合物，在本體系中它與DNA水解酶的激活因子(Mg²⁺)結(jié)合，從而阻止DNA分子的降解。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動性的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。

圖1是對比實驗1的瓊脂糖凝膠檢測圖。

圖2是對比實驗2的瓊脂糖凝膠檢測圖。

圖3是對比實驗3的瓊脂糖凝膠檢測圖。

圖4是對比實驗4的瓊脂糖凝膠檢測圖。

具體實施方式

下面結(jié)合附圖并通過實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，以下實施例是對本發(fā)明的解釋而本發(fā)明并不局限于以下實施例。

實施例1。

本實施例的新型DNA穩(wěn)定溶液由以下成分配比組成：

磷酸鉀 0.1M，

葡萄糖 10mM，

乙二胺四乙酸二鈉 10mM，

其溶劑為水。

本處的0.1M指的是1升溶液含0.1摩爾溶質(zhì)，10mM指的是1升溶液含10毫摩爾溶質(zhì)。

DNA保存溫度為-20℃或-80℃。

參見圖1，比較實驗1：

將本實施例中的新型DNA穩(wěn)定溶液與TE溶液分別在-20℃下保存DNA一年后的對比。

1％瓊脂糖凝膠上樣5ul如下表

序號1-3為-20℃TE溶液保存DNA一年。

序號4-6為-20℃新型DNA穩(wěn)定溶液保存DNA一年。

通過比較實驗1可看出，-20℃新型DNA穩(wěn)定溶液保存DNA一年后和-20℃TE溶液保存DNA一年后，前者的濃度明顯高于后者，-20℃新型DNA穩(wěn)定溶液保存DNA一年后，基本無降解。

參見圖2，比較實驗2：

將本實施例中的新型DNA穩(wěn)定溶液與TE溶液分別在-20℃下保存DNA兩年后的對比。

1％瓊脂糖凝膠上樣5ul如下表

序號1-3為-20℃TE溶液保存DNA兩年。

序號4-6為-20℃新型DNA穩(wěn)定溶液保存DNA兩年。

通過比較實驗2可看出，-20℃新型DNA穩(wěn)定溶液保存DNA兩年后和-20℃TE溶液保存DNA兩年后，前者的濃度明顯高于后者，-20℃新型DNA穩(wěn)定溶液保存DNA兩年后，基本無降解。

參見圖3，比較實驗3：

將本實施例中的新型DNA穩(wěn)定溶液與TE溶液在-80℃下分別保存DNA三年后的對比。

1％瓊脂糖凝膠上樣5ul

序號1-3為-80℃TE溶液保存DNA三年。

序號4-6為-280℃新型DNA穩(wěn)定溶液保存DNA三年。

通過比較實驗3可看出，-80℃新型DNA穩(wěn)定溶液保存DNA三年后和-80℃TE溶液保存DNA三年后，前者的濃度明顯高于后者，-80℃新型DNA穩(wěn)定溶液保存DNA三年后，基本無降解。

參見圖4，比較實驗4：

序號1-2為-80℃新型DNA穩(wěn)定溶液保存DNA一年。

序號3-4為-20℃新型DNA穩(wěn)定溶液保存DNA一年。

序號5-6為-20℃TE溶液保存一年。

通過比較實驗4可看出，-80℃新型DNA穩(wěn)定溶液保存DNA一年后相比-20℃新型DNA穩(wěn)定溶液保存DNA一年后，前者的核酸濃度稍高，在-80℃下，DNA更穩(wěn)定，但是差別也不大。而-20℃TE溶液保存一年，則濃度明顯降低，發(fā)生了降解。

通過上述比較實驗，本發(fā)明的新型DNA穩(wěn)定溶液，配比簡單，制作方便，DNA在該溶液中保存，使其更加穩(wěn)定，不易降解。

本實施例中比較實驗的表格中，OD260指的是核酸的吸光度，用于反應(yīng)溶液中核酸的濃度。260/280代表核酸的吸光度與蛋白質(zhì)的吸光度的比值，即核酸純度，用于估算核酸的純度。260/230代表核酸的吸光度與樣品中純在的污染物的比值，即去鹽程度。

實施例2。

本實施例的新型DNA穩(wěn)定溶液的制備方法，包括以下步驟：將磷酸鉀、葡萄糖、乙二胺四乙酸二鈉按比例加入水中，并混合均勻。

本說明書中所描述的以上內(nèi)容僅僅是對本發(fā)明所作的舉例說明。本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員可以對所描述的具體實施例做各種各樣的修改或補充或采用類似的方式替代，只要不偏離本發(fā)明說明書的內(nèi)容或者超越本權(quán)利要求書所定義的范圍，均應(yīng)屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。