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幾丁質(zhì)脫乙?;负图{米幾丁質(zhì)的制備和應(yīng)用的制作方法

文檔序號:12097290閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種幾丁質(zhì)脫乙酰基酶,其特征在于,所述幾丁質(zhì)脫乙?;傅陌被嵝蛄袨镾EQ ID NO.2所示,或者在SEQ ID NO.2中限定的氨基酸序列中經(jīng)過取代、缺失或者添加一個或幾個氨基酸且具有幾丁質(zhì)脫乙?;富钚缘挠蒘EQ ID NO.2衍生的蛋白質(zhì)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的幾丁質(zhì)脫乙酰基酶,其特征在于,所述幾丁質(zhì)脫乙?;妇幋a的基因核苷酸序列為SEQ ID NO.1。

3.權(quán)利要求1或2所述的幾丁質(zhì)脫乙酰基酶的構(gòu)建方法,其特征在于,包括如下步驟:

(1):構(gòu)建幾丁質(zhì)脫乙酰酶重組表達(dá)載體質(zhì)粒;

(2):將步驟(1)所得的重組表達(dá)載體質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌宿主細(xì)胞,誘導(dǎo)表達(dá),獲得表達(dá)產(chǎn)物;

(3):分離純化步驟(2)所得到的重組蛋白,即SEQ ID NO.2中氨基酸所示的幾丁質(zhì)脫乙酰酶;或者在SEQ ID NO.2中限定的氨基酸序列中經(jīng)過取代、缺失或添加一個或者幾個氨基酸且具有幾丁質(zhì)脫乙?;富钚缘挠蒘EQ ID NO.2衍生的蛋白質(zhì)。

4.權(quán)利要求1或2所述的幾丁質(zhì)脫乙酰基酶在制備納米幾丁質(zhì)領(lǐng)域中的應(yīng)用。

5.一種納米幾丁質(zhì)的制備方法,其特征在于,包括如下步驟:

(1)在酸的作用下,水解含有幾丁質(zhì)的原料,然后去除酸,加入溶劑后得到預(yù)制備的納米幾丁質(zhì)懸浮液;

(2)向納米幾丁質(zhì)懸浮液中加入幾丁質(zhì)脫乙?;?,脫乙酰得到納米幾丁質(zhì);

優(yōu)選地,步驟(1)中,水解溫度為70-90℃,優(yōu)選為70-85℃,水解時間為2-4h,優(yōu)選為2-3h;

更進(jìn)一步優(yōu)選,步驟(1)中所述酸選自鹽酸、硫酸、硝酸中的一種,優(yōu)選為鹽酸,所述鹽酸的濃度優(yōu)選為3M-5M。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法,其特征在于,步驟(1)加入溶劑后還包括超聲破碎的步驟,得到預(yù)制備的納米幾丁質(zhì)懸浮液,所述溶劑優(yōu)選為去離子水。

7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的制備方法,其特征在于,步驟(2)中,脫乙酰溫度為50-60℃,反應(yīng)時間為30-60min;

優(yōu)選地,步驟(2)中幾丁質(zhì)脫乙酰酶與步驟(1)中的納米幾丁質(zhì)懸浮液的比例為(1-10):(3000-5000)(wt/wt)。

8.根據(jù)權(quán)利要求5-7中任一項(xiàng)所述的制備方法,其特征在于,步驟(2)中加入催化劑進(jìn)行脫乙酰反應(yīng),所述催化劑優(yōu)選為氯化鈷。

9.一種納米幾丁質(zhì),其采用權(quán)利要求5-8中任一項(xiàng)所述的制備方法制備得到。

10.權(quán)利要求9所述的納米幾丁質(zhì)在廢水處理、食品和飼料、制藥和農(nóng)藥制劑、肥料及植物生長調(diào)節(jié)劑領(lǐng)域中的應(yīng)用。

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