本發(fā)明屬于藥物化學領域，具體涉及嘧啶并三氮唑類的化合物、它們的制備方法及其在以組蛋白賴氨酸特異性去甲基化酶(以下簡稱LSD1)為靶標抗腫瘤藥物中的應用。

背景技術：

腫瘤是嚴重危害人類健康而又難以克服的疾病，目前已經上市的抗腫瘤藥物也有很多，但這些藥物中還是存在一些問題，比如毒性大、靶向性弱以及容易產生耐藥性等。因此，新型抗腫瘤藥物的研發(fā)顯得尤為重要。

組蛋白共價修飾是一種重要的表觀遺傳模式，包括組蛋白乙?；?、甲基化、磷酸化以及泛素化等，其中乙?；c甲基化是針對組蛋白修飾機制研究中比較多的組蛋白修飾方式。2004年以前組蛋白甲基化被認為是不可逆的，賴氨酸特異性組蛋白去甲基化酶(lysine specific demethylase 1，LSD1)是第一個被發(fā)現的可以催化組蛋白H3K4me1/2和H3K9me1/2去甲基化的特異性去甲基化酶，從而調節(jié)下游靶基因的轉錄。

LSD1在多種腫瘤細胞中的表達量顯著高于正常細胞，如神經母細胞瘤、眼癌、前列腺癌、乳腺癌、肺癌、膀胱癌等。而實驗證明，通過RNAi技術或小分子抑制劑在細胞水平降低LSD1表達量或降低LSD1的活性能抑制細胞增殖并誘導一些細胞分化相關基因的表達；在小分子單胺氧化酶抑制劑PCPA的作用下亦能抑制多種腫瘤細胞和實體瘤的生長。因此，LSD1抑制劑不僅能作為表觀遺傳學的研究工具用于闡述生物學功能，而且能作為表觀遺傳學藥物用于腫瘤的預防和治療，已經引起科研界的廣泛關注，成為當前研究的熱點。

同時，嘧啶類及三氮唑雜環(huán)類化合物具有非常廣泛的生物活性，例如抗病毒、抗菌、抗炎以及抗腫瘤等。但是將嘧啶與三氮唑結構結合的新的化合物與基于LSD1靶點的抗腫瘤作用結合到一起研究的報道較少，因此，本研究具有非常重要的價值。

技術實現要素：

為開發(fā)利用現有的臨床藥物資源，本發(fā)明目的在于提供一類以嘧啶并三氮唑為母核的衍生物，從而為尋找一類新的基于LSD1靶點的抗腫瘤藥物開辟一條新途徑；本發(fā)明另一目的在于提供其制備方法及其在制備抗腫瘤藥物和LSD1抑制劑中的應用。

為實現本發(fā)明目的，本發(fā)明所述的嘧啶并三氮唑類LSD1抑制劑的結構通式如下：

通式I中R₂為C1-5烷基鏈(直鏈，支鏈或者環(huán))，中的任意一個；其中，R為鹵素，H，-OH，-NO₂，-OCH₃，?；龋琻＝1～6。MsO-為甲基磺酸基，TsO-甲苯磺酸基；

R₁為以下幾個基團中的任意一個：其中，R為鹵素，H，-OH，-NO₂，-OCH₃，?；龋琻＝1～6。

R₃為以下基團的任意一個：

其中，R為鹵素，H，-OH，-NO₂，-OCH₃，CF₃，C1-4烷基或酰基等。

Boc-為叔丁氧羰基。

通式I中優(yōu)選：

R₂為C1-5烷基鏈(直鏈，支鏈或者環(huán))，中的任意一個；其中，R為鹵素，H，-OH，-NO₂，-OCH₃，乙?；?，n＝1～2。

R₁為以下幾個基團中的任意一個：

其中，n＝1-2。

R₃為以下基團的任意一個：

其中，R為鹵素，H，-OH，-NO₂，-OCH₃，CF₃，C1-4烷基或乙酰基等。

更優(yōu)選以下化合物之一：

R₂為R₁為時：

8 R₃＝4-Cl-Ph-NH-

9 R₃＝3-Cl-Ph-NH-

10 R₃＝4-Br-Ph-NH-

11 R₃＝4-F-Ph-NH-

12 R₃＝3-CF₃-Ph-NH-

13 R₃＝3,4,5-tri-OMe-Ph-NH-

14 R₃＝4-Ac-Ph-NH-

15 R₃＝Bn-NH-

16 R₃＝4-Me-Bn-NH-

17 R₃＝4-OH-Bn-NH-

18 R₃＝4-OMe-Bn-NH-

19

20

24 R₃＝3-Cl-PhO-

25 R₃＝4-Cl-PhO-

26 R₃＝1-naphthalene-O-

27 R₃＝2-naphthalene-O-

28 R₃＝4-Me-Ph-S-

29 R₃＝4-Cl-Ph-S-

30 R₃＝2-Pyridine-S-；

R₂為Bn-，R₁為時：

21

22

23

36 R₃＝2-Pyridine-S-；

當R₃＝2-Pyridine-S-時，

31 R₁＝Propyl,

32 R₁＝Propyl,

33 R₁＝Propyl,

34 R₁＝Propyl,

35 R₁＝Propyl,R₂＝Bn

37 R₁＝Bn,R₂＝Bn

本發(fā)明所述嘧啶并三氮唑類LSD1抑制劑的制備方法，主要通過以下步驟制得：

1.通式2a～c的制備方法：

溶劑中，將化合物1和溴代烴，在堿性物質作用下，室溫下攪拌反應，反應結束后，過濾，洗滌，干燥，得系列化合物2。本反應中，所用溶劑可以是丙酮、甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、四氫呋喃、乙腈、水、DMF、二氯甲烷、氯仿、二氧六環(huán)中之一或者其中任意或三種的混合物。所用的堿性物質可以是三乙胺、二異丙基乙胺、吡啶、氫氧化鈉、氫氧化鉀中的一種。所述溴代烴對應通式中R1取代基；

2.通式3a～c的制備方法：

在醋酸中，加入硝化試劑，然后分批加入系列化合物2，攪拌反應，反應結束后，倒入水中，抽濾，洗滌，干燥，得系列化合物3。本反應中，所述硝化試劑可是發(fā)煙硝酸，濃硝酸。優(yōu)選溫度15-60℃。

3.通式4a～c的制備方法：

溶劑中，加入氯化試劑，然后分批加入系列化合物3，滴加有機堿，回流反應，反應結束后，冷至室溫，水解，用有機溶劑萃取，水洗，中和，干燥有機相即得系列化合物4粗品(不經進一步優(yōu)化可以直接進行下一步，純品可以經用柱層析制得)。本反應中，所述氯化試劑可以是三氯氧磷，五氯化磷，溶劑可以是甲苯，二氧六環(huán)，THF，乙酸乙酯等，所述有機堿可以是三乙胺、N,N-二甲基苯胺、N，N-二乙基苯胺或吡啶等。優(yōu)選溫度40～120℃。

4.通式5a～c的制備方法：

將系列化合物4溶于乙醇和醋酸的混合溶劑中，然后分批加入還原鐵粉，升溫回流反應，抽濾，旋干溶劑，再用有機溶劑萃取，水洗，干燥有機相，得到系列化合物5的粗品，純品可經柱層析制得。

5.通式6a～l的制備方法：

將系列化合物5和胺類化合物溶于溶劑中，再加入有機堿，回流反應，反應結束后，蒸干溶劑，加入乙酸乙酯，水洗，干燥有機相，得到系列化合物6的粗品(不經進一步純化直接用于下一步反應)。本反應中，反應所用溶劑可以是甲醇，乙醇，異丙醇，DMF，二氧六環(huán)，THF，乙腈等，所述有機堿可以是三乙胺，吡啶或二異丙基乙胺等。優(yōu)選反應溫度是60～120℃。所述的胺類化合物對應通式中R₂取代基；

6.通式7a～l的制備方法：

將系列化合物6溶于醋酸和水的混合液中，冰浴下滴加亞硝酸鈉的水溶液反應，反應結束后，加入乙酸乙酯和水，分層，水洗，中和，干燥有機相，得系列化合物7粗品，不經進一步純化直接進行下一步反應。

7.通式中化合物8～23的制備方法：

將系列化合物7和胺類化合物溶于溶劑中，加入縛酸劑，回流反應，反應結束后，蒸干溶劑，溶于乙酸乙酯，用水洗，干燥，過柱，流動相為不同比例的石油醚和乙酸乙酯。本反應中，所述溶劑為甲醇，乙醇，異丙醇，THF，乙腈，DMF，二氧六環(huán)等，縛酸劑為三乙胺，吡啶，異丙基乙胺等。優(yōu)選反應溫度為20～100℃。

8.通式中化合物24～27的制備方法：

將系列化合物7和酚類化合物溶于溶劑中，加入碳酸鉀或碳酸鉀，回流反應，反應結束后，蒸干溶劑，溶于乙酸乙酯，用水洗，干燥，過柱(流動相為不同比例的石油醚和乙酸乙酯)。本反應中，所述溶劑為丙酮，乙腈，THF，DMF，DMSO等。優(yōu)選反應溫度為20～80℃。

9.通式中化合物28～37的制備方法：

將系列化合物7和巰基化合物溶于溶劑中，加入堿性物質反應，反應結束后，蒸干溶劑，溶于乙酸乙酯，用水洗，干燥，過柱或者重結晶(流動相為不同比例的石油醚和乙酸乙酯)。本反應中，所述反應溶劑為乙腈，乙醇，甲醇，THF，DMF，二氧六環(huán)等，所用堿性物質為三乙胺，二異丙基乙胺，吡啶，碳酸鈉，碳酸鉀等。優(yōu)選反應溫度為20～80℃。

步驟(7)、(8)、(9)所述的胺類化合物、酚類化合物或巰基化合物對應通式中R₃取代基。

本發(fā)明所述的嘧啶并三氮唑類衍生物，通過LSD1酶活性實驗發(fā)現對LSD1有很好的抑制作用。其中大多化合物的活性優(yōu)于陽性對照苯環(huán)丙胺(2-PCPA)。因此，本發(fā)明提供的嘧啶并三氮類衍生物為開發(fā)新型抗腫瘤藥物、藥物的聯合用藥以及新型LSD1抑制劑藥物開辟了另一有效途徑，此類化合物的合成設計合理，反應條件溫和，操作簡單，反應收率高，總收率達60％以上，如能開發(fā)成為新藥將有良好的市場應用前景。

具體實施方式

為了對本發(fā)明進行更好的說明，特舉實施例如下：

實施例1化合物2b，R₁＝Propyl的制備

將巴比妥酸(3g，1eq)和三乙胺(2.9ml，1eq)加到30ml的甲醇中，加熱回流下，緩慢滴加溴丙烷(1.8ml,1eq)，加完后繼續(xù)回流1小時，冷卻，抽濾，得到3.7g粉色固體化合物2b，產率97％。

實施例2化合物3b，R₁＝Propyl的制備

冰浴下，將3ml的發(fā)煙硝酸小心溶于6ml的醋酸中，然后分批加入2.9g化合物2b，加完后，繼續(xù)攪拌2小時，然后將反應液加到18ml的冰水中，抽濾，水洗，得到暗紅色的粉末化合物3b，產率77.5％。

實施例3化合物4b，R₁＝Propyl的制備

將化合物3b(12.4g，1eq)，溶于50ml的三氯氧磷中，緩慢滴加DMA(12ml，1.8eq)，然后升溫至回流，反應5小時。冷至室溫，水解，然后用EA萃取，水洗，再用飽和的碳酸鈉溶液洗滌，有機相干燥后，即得棕色化合物4b粗品13g，產率90.2％。

實施例4化合物5b，R₁＝Propyl的制備

將化合物4b(0.5g,1eq)溶于4ml的甲醇和2ml的醋酸中，然后分批加入還原鐵粉(0.3g,3eq),回流2小時，，冷至室溫，抽濾，濾液蒸干，溶于乙酸乙酯，用飽和的碳酸鈉溶液洗滌，水洗，干燥有機相，蒸干后得0.44g化合物5b粗品，產率95％。

實施例5化合物6b，R₁＝Propyl，的制備

將化合物5b(3.9g,1eq),乙醇胺(1.0g，1eq)和三乙胺(3ml,1.3eq)溶于乙醇中，回流48小時，蒸干溶劑，溶于乙酸乙酯，然后用稀鹽酸中和至中性，水洗三次，干燥，蒸干后得化合物6b粗品，不經進一步純化，直接進行下一步。

實施例6化合物7，R₁＝Propyl，的制備

將上步化合物6b的粗品溶于醋酸和水的混合液中，0℃冰浴下，滴加亞硝酸鈉(1.13g,1eq)的水溶液，保持溫度不超于10℃，然后繼續(xù)攪拌反應1小時，將反應液溶于乙酸乙酯中，用水洗三次，然后再用飽和的碳酸氫鈉溶液中和至中性，水洗，干燥有機相，蒸干后得到化合物7b粗品，不經純化直接進行下一步。

實施例7化合物8，R₁＝Propyl,R₃＝4-Cl-Ph-NH-的制備

將中間體化合物7b(100mg,1eq)、對氯苯胺(63mg,1eq)和三乙胺(37mg,1eq)溶于乙醇中，加熱至回流數小時，用TLC(PE/EA)監(jiān)測反應，結束后蒸干溶劑，溶于乙酸乙酯，水洗，干燥，過柱，得淺白色固體90mg，產率60％。White solid,Mp 156～157℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm):δ11.01(s,1H),7.92-7.94(d,J＝8.8Hz,2H),7.44-7.46(d,J＝8.8Hz,2H),4.97-5.00(t,J＝5.8Hz,1H),4.55-4.58(t,J＝5.4Hz,2H),3.91-3.95(q,2H),3.09-3.13(t,J＝7.2Hz,2H),1.68-1.74(m,2H),0.96-1.00(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆,ppm):δ169.70,151.41,150.48,137.84,128.92,128.25,123.70,123.39,59.27,49.72,32.94,22.96,13.76.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₅H₁₇ClN₆OS,[M+H]⁺m/z:365.0951,found:365.0953.。

實施例8化合物9，R₁＝Propyl,R₃＝3-Cl-Ph-NH-的制備

3-氯苯胺替代對氯苯胺，采取實施例7同樣的方法制備9，White solid,Mp154～155℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm):δ11.08(s,1H)，8.17(s,1H),7.82-7.84(d,J＝8.4Hz,1H),7.40-7.44(t,J＝8Hz,1H),7.19-7.21(d,J＝8Hz,1H),4.55-4.58(t,J＝5.6Hz,2H),3.91-3.94(t,J＝5.6Hz,2H),3.13-3.17(t,J＝7.2Hz,2H),1.68-1.77(m,2H),0.98-1.01(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆,ppm):δ169.70,151.41,150.53,140.40,133.32,130.68,124.07,123.41,121.50,120.36,59.27,49.74,32.99,22.86,13.72.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₅H₁₇ClN₆OS,[M+H]⁺m/z:365.0951,found:365.0950.。

實施例9化合物10，R₁＝Propyl,R₃＝4-Br-Ph-NH-的制備

對溴苯胺替代對氯苯胺，采取實施例7同樣的方法制備10，Yellow solid,Mp 149～151℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm):δ11.00(s,1H)，7.87-7.89(d,J＝8.8Hz,2H),7.57-7.60(m,2H),4.55-4.58(t,J＝5.6Hz,2H),3.91-3.94(t,J＝5.6Hz,2H),3.09-3.13(t,J＝7.1Hz,2H),1.68-1.74(m,2H),0.96-1.00(t,J＝7.4Hz,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆,δ,ppm):δ169.70,151.39,150.49,138.27,131.83,124.06,123.41,116.37,59.27,49.72,32.94,22.96,13.76.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₅H₁₇BrN₆OS,[M+H]⁺m/z:409.0446,found:409.0429.。

實施例10化合物11，R₁＝Propyl,R₃＝4-F-Ph-NH-的制備

對氟苯胺替代對氯苯胺，采取實施例7同樣的方法制備11，Light yellow solid,Mp 140～141℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm):δ10.92(s,1H)，7.87-7.90(m,2H),7.23-7.27(m,2H),4.98-5.00(t,J＝5.6Hz,2H),4.54-4.57(t,J＝5.6Hz,2H),3.91-3.95(q,2H),3.08-3.11(t,J＝7.0Hz,2H),1.65-1.74(m,2H),0.95-0.99(t,J＝7.4Hz,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆,ppm):δ169.68,151.53,150.44,135.10,124.25,123.30,115.78,115.57,59.27,49.68,32.91,23.01,13.75.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₅H₁₇FN₆OS,[M+H]⁺m/z:349.1247,found:349.1263.。

實施例11化合物12，R₁＝Propyl,R₃＝3-CF₃-Ph-NH-的制備

3-三氟甲基-苯胺替代對氯苯胺，采取實施例7同樣的方法制備12，Yellow solid,Mp 151～153℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm):δ11.21(s,1H)，8.47(s,1H),8.13-8.15(d,J＝8.4Hz,1H),7.62-7.66(t,J＝7.8Hz,1H),7.48-7.50(d,J＝7.6Hz,1H),4.98-5.01(t,J＝5.8Hz,1H),4.56-4.59(t,J＝5.4Hz,2H),3.91-3.96(q,2H),3.13-3.16(t,J＝7.2Hz,2H),1.67-1.72(q,2H),0.95-0.99(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆,ppm):δ169.73,151.48,150.55,139.74,130.26,129.95,129.63,125.49,123.42,120.67,118.20,59.28,49.75,32.90,22.64,13.62.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₆H₁₇F₃N₆OS,[M+H]⁺m/z:399.1215,found:399.1241.。

實施例12化合物13，R₁＝Propyl,R₃＝3,4,5-tri-OMe-Ph-NH-的制備

3，4,，5-三氧甲基-苯胺替代對氯苯胺，采取實施例7同樣的方法制備13，White solid,Mp 163～165℃.¹H NMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ8.34(s,1H)，7.13(s,2H),4.72-4.75(t,J＝4.8Hz,2H),4.38-4.42(t,J＝6.8Hz,1H),4.25-4.27(q,2H),3.90(s,6H),3.85(s,3H),3.08-3.12(t,J＝7.2Hz,2H),1.73-1.78(q,2H),1.03-1.06(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃,ppm):δ171.52,153.24,150.62,149.64,134.89,133.58,123.33,98.59,61.00,60.70,56.18,50.94,33.24,22.30,13.50.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₈H₂₄N₆O₄S,[M+H]⁺m/z:421.1658,found:421.1649.。

實施例13化合物14，R₁＝Propyl,R₃＝4-Ac-Ph-NH-的制備

4-乙?；?苯胺替代對氯苯胺，采取實施例7同樣的方法制備14，Light yellow solid,Mp 163～164℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm):δ11.20(s,1H)，8.08-8.11(d,J＝8.8Hz,2H),7.97-7.99(d,J＝8.8Hz,2H),4.99-5.02(t,J＝5.8Hz,1H),4.563-4.591(t,J＝5.6Hz,2H),3.92-3.96(q,2H),3.13-3.16(t,J＝7.2Hz,2H),2.56(s,3H),1.69-1.78(m,2H),0.99-1.02(t,J＝7.4Hz,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆,ppm):δ196.53,169.27,150.83,150.11,142.93,131.98,129.04,123.06,120.52,58.77,49.27,32.48,26.46,22.45,13.27.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₇H₂₀N₆O₂S,[M+Na]⁺m/z:395.1266,found:395.1265.。

實施例14化合物15，R₁＝Propyl-,R₃＝Bn-NH-的制備

芐基胺替代對氯苯胺，采取實施例7同樣的方法制備15，White solid,Mp139～140℃.¹H NMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ7.31-7.41(m,5H),7.14-7.15(m,1H),4.88-4.90(d,J＝6Hz,2H),4.68-4.70(t,J＝4.6Hz,2H),4.45(m,1H),4.16(m,2H),3.10-3.13(t,J＝7.4Hz,2H),1.73-1.82(m,2H),1.03-1.07(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃,ppm):δ171.42,153.23,149.55,137.44,128.79,127.89,127.79,123.30,60.85,51.17,44.68,33.36,22.71,13.51.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₆H₂₀N₆OS,[M+H]⁺m/z:345.1498,found:345.1484.。

實施例15化合物16，R₁＝Propyl-,R₃＝4-Me-Bn-NH-的制備

4-甲基-芐基胺替代對氯苯胺，采取實施例7同樣的方法制備16，White solid,Mp 154～155℃.¹H NMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ7.28-7.30(d,J＝8.0Hz,2H),7.16-7.18(d,J＝7.9Hz,2H),4.83-4.85(d,J＝5.6Hz,2H),4.68-4.70(t,J＝4.6Hz,2H),4.47-4.50(t,J＝6.4Hz,1H),4.14-4.17(m,2H),3.121-3.14(t,J＝7.2Hz,2H),2.36(s,3H),1.7-1.82(m,2H),1.06(t,J＝7.4Hz,3H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃,ppm):δ171.39,153.18,149.51,137.55,134.37,129.44,127.94,123.31,60.85,51.21,44.46,33.36,22.72,21.14,13.52.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₇H₂₂N₆OS,[M+Na]⁺m/z:381.1473,found:381.1475.。

實施例16化合物17，R₁＝Propyl-,R₃＝4-OH-Bn-NH-的制備

4-羥基-芐基胺替代對氯苯胺，采取實施例7同樣的方法制備17，White solid,Mp 198～199℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm):δ9.40-9.43(t,J＝6Hz,1H),9.31(s,1H),7.15-7.17(d,J＝8.4Hz,2H),6.70-6.72(d,J＝8.4Hz,2H),4.94-4.97(t,J＝5.8Hz,1H),4.60-4.62(d,J＝6Hz,2H),4.48-4.50(d,J＝5.4Hz,2H),3.86-3.91(m,2H),3.05-3.08(t,J＝7.2Hz,2H),1.62-1.70(m,2H),0.93-0.97(t,J＝7.4Hz,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆,ppm):δ169.58,156.81,153.40,150.04,129.57,129.08,123.21,115.50,59.29,49.51,43.20,32.90,23.09,13.78.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₆H₂₀N₆O₂S,[M+H]⁺m/z:361.1447,found:361.1448.。

實施例17化合物18，R₁＝Propyl-,R₃＝4-OMe-Bn-NH-的制備

4-甲氧基-芐基胺替代對氯苯胺，采取實施例7同樣的方法制備18，White solid,Mp 148～149℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm):δ9.45-9.48(t,J＝6Hz,1H),7.27-7.29(d,J＝8.8Hz,2H),6.88-6.90(d,J＝8.8Hz,2H),4.94-4.97(t,J＝5.8Hz,1H),4.64-4.66(d,J＝6Hz,2H),4.48-4.50(t,J＝5.4Hz,2H),3.86-3.91(q,2H),3.72(s,3H),3.04-3.07(t,J＝7.2Hz,2H),1.61-1.72(m,2H),0.92-0.96(t,J＝7.4Hz,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆,ppm):δ169.59,158.74,153.42,150.05,131.35,129.04,123.22,114.28,114.18,59.28,55.51,49.52,43.11,32.90,23.08,13.78.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₇H₂₂N₆O₂S,[M+H]⁺m/z:375.1603,found:375.1608.。

實施例18化合物19，R₁＝Propyl-,的制備

環(huán)己胺替代對氯苯胺，采取實施例7同樣的方法制備19，White solid,Mp81～83℃.¹HNMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ4.69-4.71(t,J＝4.6Hz,2H),4.62(m,1H),4.56(m,2H),4.13(m,2H),4.02(m,2H),3.08-3.11(t,J＝7.2Hz,2H),1.71-1.84(m,8H),1.05-1.09(t,J＝7.2Hz,3H).¹³CNMR(100MHz,CDCl₃,ppm):δ169.91,152.16,150.85,123.87,61.13,51.28,48.56,44.99,33.21,26.43,25.83,24.52,22.77,13.51.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₄H₂₂N₆OS,[M+H]⁺m/z:323.1654,found:323.1653.。

實施例19化合物20，R₁＝Propyl-,的制備

1-芐基-哌嗪胺替代對氯苯胺，采取實施例7同樣的方法制備20，Yellow solid,Mp 115～116℃.¹H NMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ7.36-7.37(m,4H),7.31-7.33(m,1H),4.70-4.72(t,J＝4.6Hz,2H),4.66(m,2H),4.51(br,1H),4.09-4.15(m,4H),3.60(s,2H),3.07-3.11(t,J＝7.2Hz,2H),2.58-2.67(m,4H),1.76-1.81(m,2H),1.05-1.08(t,J＝7.4Hz,3H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃,ppm):δ170.07,152.29,150.86,137.48,129.20,128.39,127.37,123.85,62.93,61.10,53.23,52.67,51.28,47.35,43.69,33.21,22.69,13.51.HR-MS(ESI):Calcd.C₂₀H₂₇N₇OS,[M+H]⁺m/z:414.2076,found:414.2078.。

實施例20化合物21，R₁＝Propargyl,R₂＝Bn，的制備

用3-溴代烯丙炔代替溴丙烷，芐基胺替代乙醇胺，1-芐基-哌嗪胺替代對氯苯胺，采取實施例7同樣的方法制備21，Yellow solid,Mp 103～104℃.¹H NMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ7.43-7.45(m,2H),7.32-7.34(m,4H),7.28-7.30(m,4H),5.65(s,2H),4.64(s,2H),4.06(s,2H),3.89-3.90(d,J＝2.4Hz,2H),3.56(s,2H),2.55-2.62(m,4H),2.16(t,J＝2.6Hz,1H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃,ppm):δ167.84,152.49,150.76,137.48,135.06,129.18,128.75,128.54,128.35,128.31,127.32,123.82,80.22,70.15,62.91,53.19,52.70,50.16,47.27,43.70,19.73.HR-MS(ESI):Calcd.C₂₅H₂₅N₇S,[M+H]⁺m/z:456.1970,found:456.1971.。

實施例21化合物22，R₁＝Propargyl,R₂＝Bn，的制備

用3-溴代丙炔代替溴丙烷，芐基胺替代乙醇胺，1-叔丁氧羰基-哌嗪胺替代對氯苯胺，采取實施例7同樣的方法制備22，Yellow solid,Mp 128～129℃.¹HNMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ7.44-7.46(m,2H),7.29-7.34(m,3H),5.67(s,1H),4.61(s,2H),4.04(s,2H),3.90-3.91(d,J＝2.8Hz,2H),3.56-3.60(m,4H),2.17-2.18(t,J＝2.8Hz,1H),1.49(s,9H).¹³CNMR(100MHz,CDCl₃,ppm):δ168.00,154.58,152.69,150.81,134.95,128.78,128.58,128.38,123.79,80.41,80.15,70.21,50.26,47.13,43.52,28.40,19.78.HR-MS(ESI):Calcd.C₂₃H₂₇N₇O₂S,[M+H]⁺m/z:466.2025,found:466.2026.。

實施例22化合物23，R₁＝Propargyl,R₂＝Bn，的制備

用3-溴代烯丙炔代替溴丙烷，芐基胺替代乙醇胺，2-(2-呋喃_)-乙胺替代對氯苯胺，采取實施例7同樣的方法制備23，White solid,Mp 192～194℃.¹HNMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ7.44-7.45(m,2H),7.38(s,1H),7.31-7.34(m,3H),6.54(t,J＝6.0Hz,1H),6.33(s,2H),5.67(s,2H),4.85-4.86(d,J＝5.6Hz,2H),3.95-3.96(d,J＝2.4Hz,2H),2.18-2.20(t,J＝2.6Hz,1H).¹³CNMR(100MHz,DMSO-d₆,ppm):δ167.87,152.99,151.44,149.09,142.18,135.63,128.73,128.34,128.06,122.76,110.51,107.45,80.53,73.00,49.43,36.72,19.11.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₉H₁₆N₆OS,[M+Na]⁺m/z:399.1004,found:399.1006.。

實施例23化合物24，R₁＝Propyl,R₃＝3-Cl-PhO-的制備

將中間體化合物7b(100mg,1eq)，3-氯苯酚(47mg,1eq)和碳酸鉀(51mg,1eq)溶于丙酮中，回流6小時，TLC(PE/EA)檢測反應完畢，蒸干溶劑，溶于乙酸乙酯，用水洗三次，干燥，過柱(PE/EA)，得白色固體70mg，產率52.6％。White solid,Mp 143～144℃.¹HNMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ7.38-7.42(t,J＝8.0Hz,1H),7.31-7.33(m,2H),7.18-7.21(m,1H),4.77-4.80(t,J＝4.8Hz,2H),4.19-4.23(m,2H),3.20-3.23(t,J＝6.6Hz,1H),2.89-2.93(t,J＝7.4Hz,1H),1.58-1.63(m,2H),0.88-0.92(t,J＝7.4Hz,3H).¹³CNMR(100MHz,CDCl₃,ppm):δ171.57,159.37,152.75,152.03,134.84,130.35,126.65,123.62,122.57,120.22,60.78,50.69,33.62,22.67,13.30.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₅H₁₆ClN₅O₂S,[M+Na]⁺m/z:388.0611,found:388.0612.。

實施例24化合物25，R₁＝Propyl,R₃＝4-Cl-PhO-的制備

用4氯苯酚替代3-氯苯酚，采取實施例23同樣的方法制備25，White solid,Mp 153～155℃.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm):δ7.59-7.61(d,J＝8.8Hz,2H),7.45-7.48(d,J＝8.8Hz,2H),4.97-4.50(t,J＝5.8Hz,1H),4.64-4.66(t,J＝5.4Hz,2H),3.92-3.96(m,2H),2.89-2.93(t,J＝7.2Hz,1H),1.51-1.57(m,2H),0.80-0.84(t,J＝7.2Hz,3H).¹³CNMR(100MHz,DMSO-d₆,ppm):δ169.26,159.20,152.64,150.17,130.56,129.69,123.90,123.07,58.79,49.67,32.67,22.38,13.08.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₅H₁₆ClN₅O₂S,[M+Na]⁺m/z:388.0611,found:388.0612.

實施例25化合物26，R₁＝Propyl,R₃＝1-naphthalene-O-的制備

用1-萘酚替代3-氯苯酚，采取實施例23同樣的方法制備26，White solid,Mp 124～125℃.¹HNMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ7.83-7.93(m,3H),7.51-7.56(m,2H),7.44-7.48(m,1H),7.39-7.41(d,J＝7.2Hz,1H),4.79-4.81(t,J＝5.0Hz,2H),4.20-4.24(m,2H),3.31-3.34(t,J＝6.4Hz,1H),2.55-2.59(t,J＝7.4Hz,2H),1.19-1.28(m,2H),0.56-0.60(t,J＝7.4Hz,3H).¹³CNMR(100MHz,CDCl₃,ppm):δ171.66,160.28,152.85,147.89,134.79,128.05,126.89,126.68,126.64,126.58,125.38,123.71,121.51,118.22,60.84,50.73,33.47,22.60,13.09.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₉H₁₉N₅O₂S,[M+Na]⁺m/z:404.1157,found:404.1155..

實施例26化合物27，R₁＝Propyl,R₃＝2-naphthalene-O-的制備

用2-萘酚替代3-氯苯酚，采取實施例23同樣的方法制備27，White solid,Mp127～128℃.¹HNMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ7.89-7.94(m,2H),7.84-7.86(m,1H),7.73-7.74(d,J＝2.0Hz,1H),7.52-7.54(m,2H),7.39-7.42(m,1H),4.79-4.81(t,J＝4.8Hz,2H),4.20-4.24(m,2H),3.33-3.36(t,J＝6.5Hz,1H),2.79-2.83(t,J＝7.4Hz,2H),1.47-1.53(m,2H),0.66-0.70(t,J＝7.4Hz,3H).¹³CNMR(100MHz,CDCl₃,ppm):δ171.62,159.97,152.67,149.35,133.81,131.70,129.51,127.86,127.75,126.76,126.04,123.87,121.22,118.80,60.83,50.76,33.54,22.67,13.11.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₉H₁₉N₅O₂S,[M+Na]⁺m/z:404.1157,found:404.1155。

實施例27化合物28，R₁＝Propyl,R₃＝4-Me-Ph-S-的制備

用4-甲基-苯基-硫酚替代3-氯苯酚，采取實施例23同樣的方法制備28，Orange solid,Mp 107～108℃.¹HNMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ7.50-7.52(d,J＝8.4Hz,2H),7.27-7.29(d,J＝8.0Hz,2H),4.72-4.74(t,J＝4.8Hz,2H),4.14-4.18(m,2H),3.34-3.37(t,J＝6.6Hz,1H),2.75-2.79(t,J＝7.2Hz,2H),2.43(s,3H),1.43-1.49(m,2H),0.82-0.86(t,J＝7.4Hz,3H).¹³CNMR(100MHz,CDCl₃,ppm):δ170.34,165.08,148.66,140.43,135.96,131.63,130.15,122.00,60.81,50.58,33.44,22.53,21.43,13.28.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₆H₁₉N₅OS₂,[M+Na]⁺m/z:384.0929,found:384.0931.。

實施例28化合物29，R₁＝Propyl,R₃＝4-Cl-Ph-S-的制備

用4-氯-苯基-硫酚替代3-氯苯酚，采取實施例23同樣的方法制備29，White solid,Mp 114～115℃.¹HNMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ7.56-7.58(d,J＝8.4Hz,2H),7.45-7.47(d,J＝8.8Hz,2H),4.73-4.75(t,J＝5.0Hz,2H),4.15-4.19(m,2H),3.18-3.22(t,J＝6.4Hz,1H),2.78-2.82(t,J＝7.4Hz,2H),1.47-1.53(m,2H),0.88-0.91(t,J＝7.2Hz,3H).¹³CNMR(100MHz,CDCl₃,ppm):δ170.55,164.02,148.77,137.32,136.73,131.54,129.63,124.05,60.79,50.57,33.50,22.41,13.31.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₅H₁₆ClN₅OS₂,[M+Na]⁺m/z:404.0382,found:404.0381.。

實施例29化合物30，R₁＝Propyl,R₃＝2-Pyridine-S-的制備

用2-吡啶--硫酚替代3-氯苯酚，采取實施例23同樣的方法制備30，Yellow sticky oil.¹H NMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ8.68-8.69(m,1H),7.80-7.82(m,2H),7.38-7.42(m,1H),4.71-4.74(t,J＝5.0Hz,2H),4.16-4.18(t,J＝5.0Hz,2H),2.84-2.87(t,J＝7.2Hz,2H),1.52-1.61(m,2H),0.90-0.93(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃,ppm):δ170.48,163.72,150.80,150.02,148.92,137.34,131.72,131.38,124.17,60.68,50.43,33.42,22.28,13.34.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₄H₁₆N₆OS₂,[M+H]⁺m/z:349.0905,found:349.0902.。

實施例30化合物31，R₁＝Propyl,R₃＝2-Pyridine-S-的制備

用異丁胺替代乙醇胺，采取實施例29同樣的方法制備31，Yellow oil.¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.69-8.71(m,1H),7.79-7.85(m,2H),7.38-7.42(m,1H),4.36-4.38(d,J＝7.2Hz,2H),2.85-2.89(t,J＝7.2Hz,2H),2.38-2.45(m,1H),1.54-1.60(m,2H),0.95–0.96(d,J＝6.8Hz,6H),0.90-0.94(t,J＝7.4Hz,3H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃,ppm):δ170.03,163.18,150.77,150.18,148.99,137.27,131.50,131.35,124.07,53.94,33.37,29.00,22.41,19.96,13.41.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₆H₂₀N₆S₂,[M+H]⁺m/z:361.1269,found:361.1268.。

實施例31化合物32，R₁＝Propyl,R₃＝2-Pyridine-S-的制備

用環(huán)己胺替代乙醇胺，采取實施例29同樣的方法制備32，Yellow sticky oil.¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.68–8.70(m,1H),7.78–7.84(m,2H),7.37-7.41(m,1H),5.21-5.28(m,1H),2.87-2.91(t,J＝7.2Hz,2H),2.23-2.28(m,4H),2.00–2.04(m,2H),1.75-1.80(m,2H),1.56-1.62(m,2H),0.91-0.95(t,J＝7.4Hz,3H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃,ppm):δ169.51,163.12,150.72,150.35,148.43,137.24,132.00,131.23,124.02,59.25,33.37,32.46,24.55,22.43,13.41.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₇H₂₀N₆S₂,[M+H]⁺m/z:373.1269,found:373.1271.。

實施例32化合物33，R₁＝Propyl,R₃＝2-Pyridine-S-的制備

用2-(2-噻吩)乙胺替代乙醇胺，采取實施例29同樣的方法制備33，Yellow sticky oil.¹H NMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ8.69-8.70(m,1H),7.78-7.84(m,2H),7.38-7.41(m,1H),7.12-7.14(dd,1H),6.86-6.89(m,1H),6.76-6.77(d,J＝3.4Hz,1H),4.79-4.83(t,J＝7.3Hz,2H),3.53-3.57(t,J＝7.3Hz,2H),2.84-2.88(t,J＝7.2Hz,2H),1.54-1.59(m,2H),0.91-0.95(t,J＝7.3Hz,3H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃,ppm):δ170.23,163.23,150.75,150.06,148.78,138.64,137.29,131.52,131.34,127.06,125.94,124.48,124.10,48.05,33.36,29.59,22.37,13.44.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₈H₁₈N₆S₃,[M+H]⁺m/z:415.0833,found:415.0832.。

實施例33化合物34，R₁＝Propyl,R₃＝2-Pyridine-S-的制備

用2—呋喃甲胺替代乙醇胺，采取實施例29同樣的方法制備34，Yellow semi-solid.¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.68-8.69(m,1H),7.77–7.82(m,2H),7.37-7.40(m,1H),7.35(m,1H),6.45-6.46(d,J＝3.3Hz,1H),6.33-6.34(m,1H),5.71(s,2H),2.88-2.91(t,J＝7.2Hz,2H),1.56-1.62(m,2H),0.92-0.95(t,J＝7.4Hz,3H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃,ppm):δ170.54,163.39,150.78,150.15,148.62,147.30,143.26,137.29,131.56,131.28,124.10,110.70,110.07,43.13,33.41,22.37,13.44.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₇H₁₆N₆OS₂,[M+H]⁺m/z:385.0905,found:385.0901.。

實施例34化合物35，R₁＝Propyl,R₂＝Bn，R₃＝2-Pyridine-S-的制備

用芐胺替代乙醇胺，采取實施例29同樣的方法制備35，Yellow oil.¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.67-8.68(m,1H),7.76-7.82(m,2H),7.36–7.41(m,3H),7.30-7.34(m,3H),5.71(s,2H),2.87-2.91(t,J＝7.2Hz,2H),1.55-1.61(m,2H),0.91-0.95(t,J＝7.3Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ170.37,163.33,150.74,150.18,148.63,137.26,134.48,131.66,131.21,128.84,128.53,128.41,124.05,50.52,33.37,22.37,13.45.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₉H₁₈N₆S₂,[M+H]⁺m/z:395.1113,found:395.1111.。

實施例35化合物36，R₁＝Propargyl,R₂＝Bn，R₃＝2-Pyridine-S-的制備

用3-溴代丙炔替代溴代丙烷，采取實施例34同樣的方法制備36，Yellow semi-solid.¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.67-8.69(m,1H),7.78-7.84(m,2H),7.38-7.44(m,3H),7.29-7.35(m,3H),5.73(s,2H),3.67(d,J＝2.6Hz,2H),2.13-2.14(t,J＝2.7Hz,1H).¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ168.06,163.90,150.80,149.83,148.52,137.37,134.32,131.80,131.37,128.88,128.60,128.53,124.20,79.25,70.76,50.67,19.84.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₉H₁₄N₆S₂,[M+Na]⁺m/z:413.0619,found:413.0619.。

實施例36化合物37，R₁＝Bn,R₂＝Bn，R₃＝2-Pyridine-S-的制備

用芐基溴替代溴代丙烷，采取實施例34同樣的方法制備37，White solid.¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.62-8.64(m,1H),7.78-7.80(m,1H),7.68-7.73(m,1H),7.36-7.38(m,2H),7.30-7.33(m,4H),7.25-7.26(m,5H),5.72(s,2H),4.20(s,2H).¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ169.66,163.64,150.72,150.04,148.59,137.24,136.99,134.44,131.75,131.18,128.90,128.78,128.55,128.50,128.34,127.29,124.10,50.53,35.66.HR-MS(ESI):Calcd.C₂₃H₁₈N₆S₂,[M+H]⁺m/z:443.1113,found:443.1115.。

實施例37上述化合物的LSD1抑制活性測定：

1.實驗方法：

樣品為實施例所合成的上述化合物、純化而得；樣品儲備液：稱取3-5mg樣品置于1.5mL EP管中，然后用DMSO配制成濃度是20mM的溶液，4℃保存放置，實驗時根據所需濃度用DMSO稀釋。將待測樣品與LSD1蛋白于室溫孵育后，加入LSD1反應底物H3K4me2并孵育反應，最后加入熒光染料Amplex和辣根過氧化酶HRP室溫孵育，在酶標儀上激發(fā)光530nm，發(fā)射光590nm檢測熒光數值:

試驗結果采用SPSS軟件計算IC₅₀值。

實驗結果如下所示。

Table 1.本發(fā)明化合物8～23對LSD1抑制率:胺基取代

Table 2.本發(fā)明化合物24～30對LSD1抑制率:酚基取代

Table 3.本發(fā)明化合物30～37對LSD1抑制率:巰基雜環(huán)取代.