本發(fā)明涉及N-(2-乙基-5-(6-(2-(三氟甲基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-b]噠嗪-2-基)苯基)-1-甲基環(huán)丙烷甲酰胺的新晶型及其制備方法。

背景技術：

惡性腫瘤已經(jīng)成為常見且嚴重威脅人們生命和生活質(zhì)量的主要疾病之一。隨著對腫瘤基因學和分子生物學研究的不斷深入，多個細胞內(nèi)腫瘤相關的關鍵信號通路被發(fā)現(xiàn)。1980年，Hedgehog(Hh)基因首先在果蠅中被發(fā)現(xiàn)。在研究果蠅的突變時發(fā)現(xiàn)了hedgehog信號通路，Hedgehog信號通路又名刺猬信號通路，Hedgehog基因是一種分節(jié)極性基因，因突變的果蠅胚胎呈多毛團狀，酷似受驚刺猬而得名；人類存在三種hedgehog同源基因，包括sonic hedgehog(SHH)，indian hedgehog(IHH)和desert hedgehog(DHH)。它們在胚胎發(fā)育中起著重要的作用，控制著許多組織和器官的形成。

Hedgehog信號通路是一個重要的細胞生理過程調(diào)節(jié)通路，在正常情況下被嚴格調(diào)控并在細胞增殖、細胞分化以及胚胎的形成過程中發(fā)揮重要作用。近幾年人們逐漸發(fā)現(xiàn)許多疾病都與這個信號通路有關，當Hedgehog信號通路異常激活時，會引起多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，包括小細胞肺癌、食道癌、胃癌、胰腺癌、結腸癌、前列腺癌等，約占人類腫瘤的25％。目前研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一些Hedgehog信號通路的調(diào)控因子和抑制物，比如Hh相互作用蛋白l(Hip1)，生長阻滯特異基因1(GAS-1)，小泡轉運蛋白RAB23，骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)以及甾醇類化合物等等，它們可以抑制細胞對Hedgehog信號通路應答引起的增殖、分化并誘導細胞凋亡，這些研究結果為腫瘤的治療提供了重要線索。Cyelopamine是一種植物性甾體類生物堿，作為Hedgehog信號通路的拮抗劑，也是一種有前景的癌癥治療藥物。Vismodegib被批準上市用于治療基底細胞癌，證明了hedgehog信號通路靶向藥物策略的成功。因此，開發(fā)小分子的hedgehog信號通路抑制劑，對于臨床工作中癌癥的治療，具有很大的發(fā)展前景。

WO2012088411公開了一種新的hedgehog信號通路抑制劑，其具有如下的式(I)所示結構：

式(I)所示化合物作為一個全新的小分子hedgehog信號通路抑制劑，在體外對靶點的抑制作用和小鼠體內(nèi)藥效均比Vismodegib強兩倍以上；并且動物藥代結果顯示，相對于Vismodegib，式(I)所示化合物體內(nèi)蓄積情況得到了很大的改善。

然而WO2012088411未深入研究該化合物的結晶形式。本領域技術人員公知，藥用的活性成分的晶型結構往往影響到該藥物的化學穩(wěn)定性，結晶條件及儲存條件的不同有可能導致化合物的晶型結構的變化，有時還會伴隨著產(chǎn)生其他形態(tài)的晶型。因此，對藥物晶型的研究，特別是藥物穩(wěn)定晶型的研究，對藥物的后續(xù)開發(fā)具有十分重要的意義。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種式(I)所示化合物的新晶型以及制備方法。

式(I)所示化合物在不同結晶條件下得到了一系列結晶產(chǎn)物，對所得結晶產(chǎn)物進行了X-衍射及DSC檢測，發(fā)現(xiàn)式(I)所示化合物在本發(fā)明特定的結晶條件下，可以得到一種穩(wěn)定的結晶形式，命名為I型結晶。

本發(fā)明一方面提供了式(I)所示化合物的I型結晶，其特征在于，使用Cu-Ka輻射，得到以2θ角度和晶面間距表示的X-射線粉末衍射圖譜，所述結晶具有如圖1所示的X-射線粉末衍射圖譜，其中大約在4.73(18.66)，6.25(14.14)，9.69(9.12)，12.46(7.10)，14.55(6.09)，14.86(5.96)，15.59(5.68)，15.90(5.57)，17.31(5.12)，18.73(4.73)，19.32(4.59)，20.11(4.41)，20.84(4.26)，23.19(3.83)，24.24(3.67)，24.63(3.61)，25.04(3.55)，25.48(3.49)，26.96(3.30)，28.49(3.13)，31.45(2.84)附近有特征峰，并且DSC圖譜顯示在192℃附近有熔融吸熱峰。

本發(fā)明另一方面提供了一種制備式(I)所示化合物的I型結晶的方法，具體的，包括以下步驟：

(1)將任意晶型或無定型的式(I)所示化合物固體加熱溶解于適量的溶劑中，冷卻、析晶；

(2)過濾結晶并洗滌，干燥。

在本發(fā)明優(yōu)選的實施方案中，步驟(1)中，溶劑選自異丙醇、異丙醇/水、乙酸乙酯、乙腈。

進一步地，最優(yōu)選的單一溶劑為乙酸乙酯。

在本發(fā)明的一個實施方案中，優(yōu)選的混合溶劑為異丙醇/水的混合溶劑，二者比例沒有特別限制，在本發(fā)明優(yōu)選的實施方案中，二者體積比為9：1。

重結晶的方法沒有特別限定，可以用通常的重結晶操作方法進行。例如，可以將式(I)所示化合物在有機溶劑加熱溶解后冷卻析晶，結晶完成后，經(jīng)過濾干燥，即可得到所需要的結晶。需特別說明的是，所濾取的結晶體通常在減壓下，在30～100℃左右，優(yōu)選40～60℃的條件下進行真空干燥，就能達到去除重結晶溶劑的效果。

通過差示掃描熱分析(DSC)、X-衍射圖譜測定，對得到的式(I)所示化合物結晶體進行了晶型研究，同時對所得結晶的溶劑殘留進行了檢測。

按照本發(fā)明的方法制備的式(I)所示化合物結晶不含有或僅含有較低含量的殘留溶劑，符合國家藥典規(guī)定的有關醫(yī)藥產(chǎn)品殘留溶劑的限量要求，因而本發(fā)明的結晶可以較好地作為醫(yī)藥活性成分使用。

經(jīng)研究表明，本發(fā)明制備的式(I)所示化合物的I型結晶在光照、高溫、高濕的條件下穩(wěn)定性良好，且在研磨、壓力和受熱等條件下，晶型穩(wěn)定，能夠滿足生產(chǎn)運輸儲存的藥用要求，生產(chǎn)工藝穩(wěn)定可重復可控，能夠適應于工業(yè)化生產(chǎn)。

本發(fā)明的I型結晶可以方便地用于制備藥物組合物，所述藥用組合物包含式(I)所示化合物結晶和至少一種藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。

附圖說明

圖1是式(I)所示化合物I型結晶的X-射線粉末衍射圖譜。

圖2是式(I)所示化合物I型結晶的DSC譜圖。

圖3是式(I)所示化合物III型結晶的X-射線粉末衍射圖譜。

圖4是式(I)所示化合物III型結晶的DSC譜圖。

具體實施方式

以下將結合實施例更詳細地解釋本發(fā)明，本發(fā)明的實施例僅用于說明本發(fā)明的技術方案，并非限定本發(fā)明的實質(zhì)和范圍。

實驗所用的測試儀器

1、DSC譜

儀器型號：Mettler Toledo DSC 1Staree System

吹掃氣：氮氣

升溫速率：10.0℃/min

溫度范圍：40-250℃

2、X-射線衍射譜

儀器型號：Bruker D8Focus X-射線粉末衍射儀

射線：單色Cu-Kα射線

掃描方式：θ/2θ，掃描范圍：2-40°

電壓：40KV電流：40mA

實施例1

取(1.0g，2.15mmol)式(I)所示化合物(按WO2012088411公開方法制備)加入到25ml單口瓶中，加入5ml乙酸乙酯，加熱回流溶清，攪拌冷卻析晶至室溫，減壓濃縮掉約2ml乙酸乙酯，抽濾，干燥得固體783mg，收率為78.3％。該結晶樣品的X-射線衍射譜圖見圖1。該結晶在約4.73(18.66)，6.25(14.14)，9.69(9.12)，12.46(7.10)，14.55(6.09)，14.86(5.96)，15.59(5.68)，15.90(5.57)，17.31(5.12)，18.73(4.73)，19.32(4.59)，20.11(4.41)，20.84(4.26)，23.19(3.83)，24.24(3.67)，24.63(3.61)，25.04(3.55)，25.48(3.49)，26.96(3.30)，28.49(3.13)和31.45(2.84)處有特征峰。DSC譜圖見圖2，有尖銳熔融吸熱峰192℃，將此晶型定義為I晶型。

實施例2

取(1.0g，2.15mmol)式(I)所示化合物(按WO2012088411公開方法制備)加入到25ml單口瓶中，加入8ml異丙醇，加熱回流溶清，攪拌冷卻析晶至室溫，抽濾，干燥得固體749mg，收率為74.9％。該結晶樣品的X-射線衍射和DSC譜圖經(jīng)研究比對，確定產(chǎn)物為I晶型。

實施例3

取(1.0g，2.15mmol)式(I)所示化合物(按WO2012088411公開方法制備)加入8ml 90％異丙醇，加熱溶清，繼續(xù)回流10分鐘，冷卻，攪拌轉晶，抽濾，干燥得固體775mg，收率為77.5％。該結晶樣品的X-射線衍射和DSC譜圖經(jīng)研究比對，確定產(chǎn)物為I晶型。

實施例4

取(1.0g，2.15mmol)式(I)所示化合物(按WO2012088411公開方法制備)加入10ml乙腈，加熱溶清，繼續(xù)回流10分鐘，冷卻，攪拌轉晶，抽濾，干燥得固體703mg，收率為70.3％。該結晶樣品的X-射線衍射和DSC譜圖經(jīng)研究比對，確定產(chǎn)物為I晶型。

實施例5

重復WO2012088411實施例633的全部操作，將2-乙基-5-(6-(2-(三氟甲基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-b]噠嗪-2-基)苯胺(500mg，1.30mol)，乙腈(5ml)和吡啶(0.315ml)加入燒瓶中。攪拌該混合液并加入1-甲基環(huán)丙基羧酸氯(169mg，1.43mmol)，并且室溫攪拌該混合液4小時。反應完成時，以硅膠濃縮該混合液，并且經(jīng)硅膠層析純化(0-80％乙酸乙酯的二氯甲烷溶液)，得到化合物I的結晶(400mg，66％)。該結晶樣品的經(jīng)X-射線衍射和DSC譜圖經(jīng)研究比對，證實并非I晶型，此處將其定義為III晶型，但III晶型可能是一種混合晶型，DSC圖譜顯示其在相近位置出現(xiàn)兩個熔融吸熱峰，這種晶型不穩(wěn)定，可能發(fā)生晶型的轉化，有導致藥物的吸收發(fā)生改變的風險，因此無法臨床使用。

實施例6

將實施例1所得的I型結晶產(chǎn)物敞口平攤放置，考察在光照(4500Lux)，加熱(40℃，60℃)，高濕(RH75％，RH90％)條件下樣品的穩(wěn)定性?？疾烊訒r間為5天和10天，HPLC檢測純度見表1。

表1、式(I)所示化合物的I型結晶樣品的穩(wěn)定性

穩(wěn)定性考察結果表明，式(I)所示化合物I型結晶樣品在敞口放置的條件下，光照、高溫和高濕條件對其穩(wěn)定性影響不大。

實施例7

將按實施例1方法制得的式(I)所示化合物I型結晶進行研磨、加熱及壓片處理，研究結果表明晶型穩(wěn)定，詳細的實驗數(shù)據(jù)參見下表2。

表2、式(I)所示化合物的I晶型特殊穩(wěn)定性研究

實施例8

將按實施例1方法制得的式(I)所示化合物I型結晶產(chǎn)物敞口平攤放置，考察樣品在室溫(25℃，RH60％)長期留樣的穩(wěn)定性，詳細的實驗數(shù)據(jù)參見下表3。

表3、式(I)所示化合物的I晶型樣品室溫留樣條件下穩(wěn)定性考察

本品經(jīng)25℃、RH60％條件長期放置，定期取樣測定，結果表明樣品晶型穩(wěn)定，有關物質(zhì)未見明顯變化，晶型穩(wěn)定，表明本品在該條件下放置36個月是穩(wěn)定的。