本發(fā)明涉及生物技術(shù)領域，尤其涉及一種從豬肺中提取肝素鈉和蛋白肽粉的聯(lián)產(chǎn)工藝。

背景技術(shù)：

肝素鈉是一種生物醫(yī)藥中間體，是從動物肝、肺、小腸粘膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的鈉鹽，屬粘多糖類物質(zhì)，具有抗凝血、防止血栓形成、降血脂、抗中膜平滑肌細胞（SMC）增生、促進纖維蛋白溶解等作用，被廣泛用于治療血管栓塞、敗血癥、腎炎、急性心肌梗塞、動脈硬化等疾病，其在血液透析治療中是唯一有效的特效藥物。

目前，肝素鈉粗品生產(chǎn)多以健康的豬小腸粘膜為原料，采用酶解法或者鹽解法提取，這種制備方法易受原材料單一、豬小腸腸源緊張、成本高等不利因素制約，難以滿足國內(nèi)外市場的巨大需求。我國每年出欄生豬約6億頭，按每頭豬的肺重量0.70公斤計算，全年豬肺產(chǎn)量達到40萬噸以上，豬肺中以干物計粗蛋白含量達到75%以上，油脂含量約15%，碳水化合物4%，同時肝素含量相對較高，是一類廉價的動物蛋白質(zhì)資源和肝素制取原料。然而由于各種原因，除有少量的豬肺得到加工利用（直接食用和動物飼料）外，大部分被棄之浪費，造成了巨大的生物資源浪費，同時又帶來嚴重的環(huán)境污染。豬肺中肝素雖然含量高，但是由于肺組織中大量雜蛋白和類肝素存在，而且與肝素結(jié)合異常牢固，不易分離純化，難以利用。近年來，國內(nèi)已有少數(shù)科研工作者在研究提取豬肺肝素，并取得了一些進步，其中有些已申請了發(fā)明專利。例如，CN201110161138.6 公開了一種利用豬肺提取肝素鈉粗品的制備工藝，該工藝采用酶解方法，經(jīng)破漿、酶解、過濾、離子交換吸附、洗滌與洗脫、沉淀、干燥等步驟制取肝素鈉粗品，該方法制備的肝素鈉粗品雜質(zhì)含量高，效價低，難以達到出售標準，同時提取肝素鈉后的廢液（含有大量的蛋白質(zhì)）沒有回收利用，造成優(yōu)質(zhì)的生物資源浪費，帶來嚴重的環(huán)境污染問題，經(jīng)濟效益和社會效益低下；CN201110356975.4公開了一種利用豬肺提取肝素鈉的方法，該方法采用酶解和鹽解結(jié)合方法，經(jīng)過絞碎磨漿、堿解、酶解、鹽解、沉淀（收集清液）、濃縮、乙醇沉淀與洗脫、干燥等工藝步驟制得肝素鈉粗品，該方法對豬肺肝素鈉提取工藝進行了改良，提高了產(chǎn)品品質(zhì)和收得率，但是該方法同樣只是生產(chǎn)肝素鈉一個產(chǎn)品，沒有解決提取肝素鈉后的廢液和廢渣的綜合利用問題，開發(fā)價值不大。因此，現(xiàn)有技術(shù)方案都是單產(chǎn)肝素鈉粗品的工藝方法，生產(chǎn)成本高昂，經(jīng)濟價值不高，難以產(chǎn)業(yè)化推廣應用。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的就是為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種原料廉價易得，操作簡便，成本低廉，無浪費，無污染，綜合效益顯著的從豬肺中提取肝素鈉和蛋白肽粉的聯(lián)產(chǎn)工藝。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的：一種從豬肺中提取肝素鈉和蛋白肽粉的聯(lián)產(chǎn)工藝，其工藝步驟如下：

（1）打漿：取新鮮（或經(jīng)冷凍保存后自然解凍）豬肺，清洗去污，剝離氣管，去除油脂，用斬拌機絞碎成肉糜狀，再經(jīng)細磨機研磨勻漿5-10min，得到豬肺漿料；

（2）鹽解：往豬肺漿料中加入其重量3-5倍的去離子水，攪拌均勻后得豬肺漿液，往豬肺漿液中加入其重量3-6%的氯化鈉，緩慢升溫至40℃，用NaOH調(diào)pH值至8.5-9.0，攪拌下繼續(xù)升溫至50-55℃，保溫反應3-6小時后，快速升溫至95℃，保溫10min，使蛋白質(zhì)高溫變性，冷卻至60℃，得到豬肺鹽解液；

（3）過濾：將豬肺鹽解液經(jīng)60目濾袋過濾，分別收集濾渣（Ⅰ）和濾液（Ⅰ）；

（4）酶解：調(diào)整濾液（Ⅰ）PH值至8.0-9.0，升溫至50-55℃，按每公斤豬肺添加4-6克蛋白酶的比例加入2709蛋白酶，保溫酶解3-5小時后，升溫至85℃，保溫30min滅酶，冷卻至60℃，用100目濾袋過濾，分別收集濾渣（Ⅱ）和濾液（Ⅱ）；

（5）吸附：將濾液（Ⅱ）經(jīng)去除表面油脂層后，升溫至45-60℃，按每公斤豬肺加入25-35g的D-254樹脂，攪拌狀態(tài)下保溫吸附處理8-10小時后，用100目濾袋過濾，分別收集濾液（Ⅲ）和吸附有肝素鈉的樹脂；

（6）洗脫：

（6-1）：將收集的樹脂先用水反復沖洗至水變清為止，濾干樹脂，再以完全浸沒樹脂為量，加入質(zhì)量分數(shù)為5-7%的氯化鈉溶液，溫度保持在45-55℃，攪拌30-60min，濾干得洗滌后的樹脂；

（6-2）：以完全浸沒洗滌后的樹脂為量，加入質(zhì)量分數(shù)為20-25%的氯化鈉溶液，溫度保持在45-55℃，攪拌3-4小時后，分離樹脂，收集洗脫液；

（6-3）：重復步驟（6-2）一次，將兩次收集的洗脫液合并，并用100目濾袋過濾，收集洗脫液待用；

（7）酸處理：往洗脫液中加入其總重量0.1-0.3%的保護劑攪拌均勻后，用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值至3.0-3.5，靜置10-15分鐘，用150目濾袋過濾，分別收集濾渣（Ⅲ）和濾液（Ⅳ）待用；

(8)堿處理：用NaOH調(diào)節(jié)濾液（Ⅳ）PH值至11.0，攪拌均勻后靜置15分鐘，用150目濾袋過濾，分別收集濾渣（Ⅳ）和濾液（Ⅴ）待用；

（9）沉淀：將濾液（Ⅴ）用稀鹽酸調(diào)節(jié)其PH值至7.0-8.0，加入其體積1.5-2.0倍的質(zhì)量分數(shù)為80-85%的預冷過的乙醇，攪拌均勻后密封沉淀18-24小時，虹吸法除去上層乙醇清液，收集沉淀物（Ⅰ）待用；

（10）復沉：往上述沉淀物（Ⅰ）中加入其重量3倍的質(zhì)量分數(shù)為3%的氯化鈉溶液，攪拌溶解后升溫至80℃，保溫處理10分鐘后，冷卻到60℃，用150目濾袋過濾，收集濾液（Ⅵ），往濾液（Ⅵ）中加入其體積1.0-1.5倍的質(zhì)量分數(shù)為85-95%的預冷過的乙醇，攪拌均勻靜置30分鐘，虹吸法除去上層乙醇清液，收集沉淀物（Ⅱ）待用；

（11）脫水干燥：往上述沉淀物（Ⅱ）中加入其重量2倍的質(zhì)量分數(shù)為95-100%的乙醇脫水2-3次，收集沉淀物，置于60-70℃下干燥8-16小時即得肝素鈉。

（12）濾渣酶解：將步驟（3）中的濾渣（Ⅰ）、步驟（4）中的濾渣（Ⅱ）、步驟（7）中的濾渣（Ⅲ）和步驟（8）中的濾渣（Ⅳ）合并，加入合并濾渣重量1-3倍的去離子水溶解并攪拌均勻，調(diào)節(jié)pH值至8.0～9.0，按每公斤濾渣加入堿性蛋白酶1.0-3.0克，加熱至40-50℃，保溫酶解3-5h，將酶解液升溫至85℃滅酶10分鐘，即得到豬肺蛋白酶解液；

（13）納濾脫鹽：將步驟（5）中的濾液（Ⅲ）與步驟（12）所得的豬肺蛋白酶解液合并，攪拌均勻后通過截留分子量為100-150Da的納濾膜裝置系統(tǒng)進行納濾脫鹽、濃縮，收集濃縮液；

（14）噴霧干燥：將上述納濾濃縮液進行噴霧干燥，即得豬肺蛋白肽粉。

上述步驟（7）所述的保護劑是亞硫酸氫鈉；

上述步驟（12）所述的堿性蛋白酶為枯草桿菌堿性蛋白酶，酶活力為200000U/ml。

上述步驟（14）所述的噴霧干燥的進風口溫度為200-240℃，出風口溫度為80-100℃。

本發(fā)明的優(yōu)點和有益效果為：

（1）本發(fā)明采用豬肺為原料，應用鹽解、酶解、樹脂吸附與洗脫、酸堿處理、納濾、噴霧干燥等現(xiàn)代生化技術(shù)與生物集成技術(shù)，在同一生產(chǎn)工藝流程中，制定出聯(lián)合提取肝素鈉和蛋白肽粉的聯(lián)產(chǎn)工藝。該聯(lián)產(chǎn)工藝未見同類專利報導。

（2）本發(fā)明工藝采用鹽解與酶解相結(jié)合，酸處理與堿處理相結(jié)合，最大限度地去除與肝素結(jié)合緊密的蛋白質(zhì)、硫酸軟骨素和硫酸皮膚素等雜質(zhì)，所得肝素鈉產(chǎn)品純度高、效價高，平均效價達到100U/mg以上，達到市場收購的標準。

（3）本發(fā)明工藝能有效提高肝素鈉的收率，平均每公斤豬肺可提取肝素鈉2-3萬單位，即每4-5噸豬肺可提取1億效價肝素鈉，與目前一些專利報導的每7-8噸豬肺提取1億效價肝素鈉相比，收率提高30%以上，從而大大降低了生產(chǎn)成本，提高了經(jīng)濟效益。

（4）本發(fā)明工藝對提取肝素鈉后的廢渣，采取酶解、納濾脫鹽、噴霧干燥處理制成豬肺蛋白肽粉，其蛋白質(zhì)含量在70%以上，含有多肽、小肽、氨基酸類物質(zhì)，其中分子量小于5000Da的肽類物質(zhì)占總蛋白質(zhì)80%以上，分子量在180-1000Da的寡肽占40%以上，易于吸收利用，營養(yǎng)價值高，是一類優(yōu)質(zhì)的動物蛋白飼料原料，在飼料工業(yè)中具有廣泛的應用前景。

（5）本發(fā)明工藝操作較簡單，無浪費，無污染，原料來源廣泛，價格低廉，適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。

附圖說明

圖1為本發(fā)明的工藝流程圖；

圖2為本發(fā)明制取的豬肺肝素鈉核磁共振譜圖。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例，對本發(fā)明作進一步詳細的說明，但是本發(fā)明的實施方式并不局限于此實施例表示的范圍。

實施例1

（1）打漿：取新鮮豬肺100公斤，經(jīng)清洗去污、剝離氣管、去除油脂后，用斬拌機絞碎成肉糜狀，再經(jīng)細磨機研磨勻漿5min，得到豬肺漿料；

（2）鹽解：往豬肺漿料中加入300公斤的去離子水，攪拌均勻后，加入15公斤氯化鈉，緩慢升溫至40℃，用NaOH調(diào)pH值至8.5，攪拌下繼續(xù)升溫至50℃，保溫反應5小時后，快速升溫至95℃，保溫10min，降溫至60℃，得到豬肺鹽解液；

（3）過濾：將豬肺鹽解液經(jīng)60目尼龍濾袋過濾，分別收集濾渣（Ⅰ）和濾液（Ⅰ）；

（4）酶解：調(diào)整濾液（Ⅰ）PH值至9.0，升溫至50℃，添加400克2709蛋白酶，攪拌均勻，保持料液PH值8.5-9.0，50℃下酶解4小時后，升溫至85℃，保溫30min，冷卻至60℃，用100目濾袋過濾，分別收集濾渣（Ⅱ）和濾液（Ⅱ）；

（5）吸附：將濾液（Ⅱ）經(jīng)去除表面油脂層后，升溫至55℃，攪拌狀態(tài)下加入2500克D-254樹脂，保溫吸附處理10小時后，用100目濾袋過濾，分別收集濾液（Ⅲ）和吸附有肝素鈉的樹脂待用；

（6）洗脫：

（6-1）：將收集的樹脂先用水反復沖洗至水變清為止，濾干樹脂，再以完全浸沒樹脂為量，加入質(zhì)量分數(shù)為6%的氯化鈉溶液，溫度保持在50℃，攪拌45min，濾干得洗滌后的樹脂；

（6-2）：以完全浸沒洗滌后的樹脂為量，加入質(zhì)量分數(shù)為22%的氯化鈉溶液，溫度保持在50℃，攪拌3.5小時后，分離樹脂，收集洗脫液；

（6-3）：重復步驟（6-2）一次，將兩次收集的洗脫液合并，并用100目濾袋過濾，收集洗脫液待用；

（7）酸處理：往洗脫液中加入20克亞硫酸氫鈉，攪拌均勻后用稀鹽酸溶液調(diào)節(jié)PH值至3.5，靜置15分鐘，用150目濾袋過濾，分別收集濾渣（Ⅲ）和濾液（Ⅳ）待用；

(8)堿處理：用NaOH調(diào)節(jié)濾液（Ⅳ）PH值至11.0，攪拌均勻后靜置15分鐘，用150目濾袋過濾，分別收集濾渣（Ⅳ）和濾液（Ⅴ）待用；

（9）沉淀：將濾液（Ⅴ）用稀鹽酸溶液調(diào)節(jié)其PH值至7.5，加入其體積1.5倍的質(zhì)量分數(shù)為85%的預冷過的乙醇，攪拌均勻后密封沉淀24小時，虹吸法除去上層乙醇清液，收集沉淀物（Ⅰ）待用；

（10）復沉：往上述沉淀物（Ⅰ）中加入其重量3倍的質(zhì)量分數(shù)為3%的氯化鈉溶液，攪拌溶解后,升溫至80℃，保溫處理10分鐘后，冷卻到60℃，用150目濾袋過濾，收集濾液（Ⅵ），往濾液（Ⅵ）中加入其體積1.2倍的質(zhì)量分數(shù)為95%的預冷過的乙醇，攪拌均勻后靜置30分鐘，虹吸法除去上層乙醇清液，收集沉淀物（Ⅱ）待用；

（11）脫水干燥：往上述沉淀物（Ⅱ）中加入其重量2倍的質(zhì)量分數(shù)為95%的乙醇脫水2次，收集沉淀物，置于65℃下干燥10小時，得肝素鈉粗品19.8克，經(jīng)檢測其效價為116U/mg，肝素鈉收得率為22968U/Kg豬肺；

（12）濾渣酶解：將步驟（3）中的濾渣（Ⅰ）、步驟（4）中的濾渣（Ⅱ）和步驟（7）中的濾渣（Ⅲ）、步驟（8）中的濾渣（Ⅳ）合并得濾渣56公斤，往濾渣中加去離子水100公斤，攪拌均勻后調(diào)節(jié)pH值至8.3，然后加入堿性蛋白酶100克，升溫至50℃，保持PH值8.0-8.3，保溫酶解4h，將酶解液升溫至85℃滅酶10分鐘，得到豬肺蛋白酶解液待用；

（13）納濾脫鹽：將步驟（5）中的濾液（Ⅲ）與步驟（12）所得的豬肺蛋白酶解液合并，攪拌均勻后通過截留分子量為100-150Da的納濾膜裝置系統(tǒng)進行納濾脫鹽、濃縮，收集濃縮液；

（14）噴霧干燥：將上述納濾濃縮液進行噴霧干燥，得到豬肺蛋白肽粉12.13Kg，蛋白肽粉收得率為12.13%；噴霧干燥的進風口溫度為210℃，出風口溫度為85℃。

實施例2

（1）打漿：取冷凍豬肺500公斤，經(jīng)自然解凍后清洗去污，剝離氣管，去除油脂，然后用斬拌機絞碎成肉糜狀，再經(jīng)細磨機研磨勻漿8min，得到豬肺漿料；

（2）鹽解：往豬肺漿料中加入2500公斤的去離子水，攪拌均勻后，加入150公斤氯化鈉，緩慢升溫至40℃，用NaOH調(diào)pH值至9.0，繼續(xù)升溫至50℃，保溫反應4小時后，快速升溫至95℃，保溫10min，降溫至60℃，得到豬肺鹽解液；

（3）過濾：將豬肺鹽解液經(jīng)60目尼龍濾袋過濾，分別收集濾渣（Ⅰ）和濾液（Ⅰ）；

（4）酶解：調(diào)整濾液（Ⅰ）PH值至8.5，升溫至55℃，添加2500克2709蛋白酶，攪拌均勻，保持料液PH值8.0-8.5，55℃下酶解3小時后，升溫至85℃，保溫30min，冷卻至60℃，用100目濾袋過濾，分別收集濾渣（Ⅱ）和濾液（Ⅱ）；

（5）吸附：將濾液（Ⅱ）經(jīng)去除表面油脂層后，升溫至50℃，攪拌狀態(tài)下加入15000克D-254樹脂，保溫吸附處理9小時后，用100目濾袋過濾，分布收集濾液（Ⅲ）和吸附有肝素鈉的樹脂；

（6）洗脫：

（6-1）：將收集的樹脂先用水反復沖洗至水變清為止，濾干樹脂，再以完全浸沒樹脂為量，加入質(zhì)量分數(shù)為7%的氯化鈉溶液，溫度保持在50℃，攪拌30min，濾干得洗滌后的樹脂；

（6-2）：以完全浸沒洗滌后的樹脂為量，加入質(zhì)量分數(shù)為20%的氯化鈉溶液，溫度保持在50℃，攪拌4小時后，分離樹脂，收集洗脫液；

（6-3）：重復步驟（6-2）一次，將兩次收集的洗脫液合并，并用100目濾袋過濾，收集洗脫液待用；

（7）酸處理：往洗脫液中加入150克亞硫酸氫鈉，攪拌均勻后用稀鹽酸溶液調(diào)節(jié)PH值至3.0，靜置10分鐘，用150目濾袋過濾，分別收集濾渣（Ⅲ）和濾液（Ⅳ）待用；

(8)堿處理：用NaOH調(diào)節(jié)濾液（Ⅳ）PH值至11.0，攪拌均勻后靜置15分鐘，用150目濾袋過濾，分別收集濾渣（Ⅳ）和濾液（Ⅴ）待用；

（9）沉淀：將濾液（Ⅴ）用稀鹽酸溶液調(diào)節(jié)其PH值至8.0，加入其體積2倍的質(zhì)量分數(shù)為85%的預冷過的乙醇，攪拌均勻后密封沉淀18小時，虹吸法除去上層乙醇清液，收集沉淀物（Ⅰ）待用；

（10）復沉：往上述沉淀物（Ⅰ）中加入其重量3倍的質(zhì)量分數(shù)為3%的氯化鈉溶液，攪拌溶解后,升溫至80℃，保溫處理10分鐘后，冷卻到60℃，用150目濾袋過濾，收集濾液（Ⅵ），往濾液（Ⅵ）中加入其體積1.5倍的質(zhì)量分數(shù)為95%的預冷過的乙醇，攪拌均勻后靜置30分鐘，虹吸法除去上層乙醇清液，收集沉淀物（Ⅱ）待用；

（11）脫水干燥：往上述沉淀物（Ⅱ）中加入其重量2倍的質(zhì)量分數(shù)為95%的乙醇脫水2次，收集沉淀物，置于70℃下干燥12小時，得肝素鈉粗品112克，經(jīng)檢測其效價為128U/mg，肝素鈉收得率為2872U/Kg豬肺；

（12）濾渣酶解：將步驟（3）中的濾渣（Ⅰ）、步驟（4）中的濾渣（Ⅱ）和步驟（7）中的濾渣（Ⅲ）、步驟（8）中的濾渣（Ⅳ）合并得濾渣295公斤，往濾渣中加去離子水500公斤，攪拌均勻后調(diào)節(jié)pH值至8.6，然后加入堿性蛋白酶800克，升溫至45℃，保持PH值8.3-8.6，保溫酶解3.5h，將酶解液升溫至85℃滅酶10分鐘，得到豬肺蛋白酶解液；

（13）納濾脫鹽：將步驟（5）中的濾液（Ⅲ）與步驟（12）所得的豬肺蛋白酶解液合并，攪拌均勻后通過截留分子量為100-150Da的納濾膜裝置系統(tǒng)進行納濾脫鹽、濃縮，收集濃縮液；

（14）噴霧干燥：將上述納濾濃縮液進行噴霧干燥，得到豬肺蛋白肽粉57.6Kg，蛋白肽粉收得率為11.52%；噴霧干燥的進風口溫度為220℃，出風口溫度為90℃。

實施例3

（1）打漿：取新鮮豬肺1000公斤，經(jīng)清洗去污、剝離氣管、去除油脂后，用斬拌機絞碎成肉糜狀，再經(jīng)細磨機研磨勻漿10min，得到豬肺漿料；

（2）鹽解：往豬肺漿料中加入4000公斤的去離子水，攪拌均勻后，加入300公斤氯化鈉，緩慢升溫至40℃，用NaOH調(diào)pH值至9.0，繼續(xù)升溫至55℃，保溫反應3小時后，快速升溫至95℃，保溫10min，降溫至60℃，得到豬肺鹽解液；

（3）過濾：將豬肺鹽解液經(jīng)60目尼龍濾袋過濾，分別收集濾渣（Ⅰ）和濾液（Ⅰ）；

（4）酶解：調(diào)整濾液（Ⅰ）PH值至8.5，升溫至55℃，添加4500克2709蛋白酶，攪拌均勻，保持料液PH值8.0-8.5，55℃下酶解4小時后，升溫至85℃，保溫30min，冷卻至60℃，用100目濾袋過濾，分別收集濾渣（Ⅱ）和濾液（Ⅱ）；

（5）吸附：將濾液（Ⅱ）經(jīng)去除表面油脂層后，升溫至55℃，攪拌狀態(tài)下加入35000克D-254樹脂，保溫吸附處理8小時后，用100目濾袋過濾，分布收集濾液（Ⅲ）和吸附有肝素鈉的樹脂；

（6）洗脫：

（6-1）：將收集的樹脂先用水反復沖洗至水變清為止，濾干樹脂，再以完全浸沒樹脂為量，加入質(zhì)量分數(shù)為5%的氯化鈉溶液，溫度保持在50℃，攪拌60min，濾干得洗滌后的樹脂；

（6-2）：以完全浸沒洗滌后的樹脂為量，加入質(zhì)量分數(shù)為25%的氯化鈉溶液，溫度保持在50℃，攪拌3小時后，分離樹脂，收集洗脫液；

（6-3）：重復步驟（6-2）一次，將兩次收集的洗脫液合并，并用100目濾袋過濾，收集洗脫液待用；

（7）酸處理：往洗脫液中加入280克亞硫酸氫鈉，攪拌均勻后用稀鹽酸溶液調(diào)節(jié)PH值至3.2，靜置15分鐘，用150目濾袋過濾，分別收集濾渣（Ⅲ）和濾液（Ⅳ）待用；

(8)堿處理：用NaOH調(diào)節(jié)濾液（Ⅳ）PH值至11.0，攪拌均勻后靜置15分鐘，用150目濾袋過濾，分別收集濾渣（Ⅳ）和濾液（Ⅴ）待用；

（9）沉淀：將濾液（Ⅴ）用稀鹽酸溶液調(diào)節(jié)其PH值至8.0，加入其體積1.8倍的質(zhì)量分數(shù)為85%的預冷過的乙醇，攪拌均勻后密封沉淀20小時，虹吸法除去上層乙醇清液，收集沉淀物（Ⅰ）待用；

（10）復沉：往上述沉淀物（Ⅰ）中加入其重量3倍的質(zhì)量分數(shù)為3%的氯化鈉溶液，攪拌溶解后,升溫至80℃，保溫處理10分鐘后，冷卻到60℃，用150目濾袋過濾，收集濾液（Ⅵ），往濾液（Ⅵ）中加入其體積1.5倍的質(zhì)量分數(shù)為95%的預冷過的乙醇，攪拌均勻后靜置30分鐘，虹吸法除去上層乙醇清液，收集沉淀物（Ⅱ）待用；

（11）脫水干燥：往上述沉淀物（Ⅱ）中加入其重量2倍的質(zhì)量分數(shù)為95%的乙醇脫水2次，收集沉淀物，置于60℃下干燥16小時，得肝素鈉粗品206克，經(jīng)檢測其效價為122U/mg，肝素鈉收得率為25132U/Kg豬肺；

（12）濾渣酶解：將步驟（3）中的濾渣（Ⅰ）、步驟（4）中的濾渣（Ⅱ）和步驟（7）中的濾渣（Ⅲ）、步驟（8）中的濾渣（Ⅳ）合并得濾渣538公斤，往濾渣中加去離子水1500公斤，攪拌均勻后調(diào)節(jié)pH值至9.0，然后加入堿性蛋白酶1500克，升溫至45℃，保持PH值8.7-9.0，保溫酶解3h，將酶解液升溫至85℃滅酶10分鐘，得到豬肺蛋白酶解液；

（13）納濾脫鹽：將步驟（5）中的濾液（Ⅲ）與步驟（12）所得的豬肺蛋白酶解液合并，攪拌均勻后通過截留分子量為100-150Da的納濾膜裝置系統(tǒng)進行納濾脫鹽、濃縮，收集濃縮液；

（14）噴霧干燥：將上述納濾濃縮液進行噴霧干燥，得到豬肺蛋白肽粉108.5Kg，蛋白肽粉收得率為10.85%；噴霧干燥的進風口溫度為230℃，出風口溫度為100℃。

豬肺肝素鈉的純度檢測：

取實施例3得到的肝素鈉樣品送青島科技大學分析測試中心，采用BRUKER NMR儀器（型號：AV500），依據(jù)美國藥典USP34-NF29方法進行核磁共振圖譜分析，檢測樣品中硫酸皮膚素、肝素鈉和硫酸軟骨素三種物質(zhì)的含量比。這三種物質(zhì)出峰范圍為2.02-2.07ppm，其中硫酸皮膚素的出峰位置為2.07ppm，肝素鈉為2.04ppm，硫酸軟骨素為2.02ppm，目前市場上對合格肝素鈉粗品的核磁共振圖譜要求為在2.07ppm處的峰高不高于2.04ppm 處的二分之一，在2.02ppm處的峰高不高于2.04ppm處的四分之一。檢測結(jié)果如圖2所示，從圖2可見，在2.04ppm處的波峰高而窄，表示肝素鈉含量高，在2.02ppm處沒有出現(xiàn)峰，表示樣品中未檢出硫酸軟骨素，在2.07ppm處有一小小的波峰，其峰高只有2.04ppm處波峰（即肝素鈉波峰）高度的1/3，表示樣品含有少量硫酸皮膚素，由此說明本發(fā)明聯(lián)產(chǎn)工藝制取的豬肺肝素鈉產(chǎn)品純度較高，完全達到市場收購的標準。

豬肺蛋白肽粉蛋白含量及其蛋白肽分子量分布檢測：

分別取上述實施例1、實施例2和實施例3得到的豬肺蛋白肽粉樣品送江南大學分析測試中心，按照常規(guī)方法測定其蛋白含量，并采用高效液相色譜儀，以已知分子量蛋白質(zhì)做參照進行蛋白肽分子量分布檢測。

結(jié)果見表1：

從表1中可以看出，本發(fā)明聯(lián)產(chǎn)工藝制取的豬肺蛋白肽粉，蛋白質(zhì)含量達到70%以上，其中分子量小于5000Da的肽類物質(zhì)占總蛋白質(zhì)的比例在80%以上，分子量在180-1000Da的寡肽占40%以上，分子量小于180Da的游離氨基酸占10%以上，說明本發(fā)明得到的豬肺蛋白肽粉含有多肽、小肽、氨基酸類物質(zhì)，易于吸收利用，營養(yǎng)價值高。