本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及賴諾普利的新用途，具體涉及賴諾普利的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：賴諾普利是一種可以單用或與其他藥物合用治療各種程度的高血壓病和腎性高血壓的藥物，也可單用或與利尿藥和洋地黃合用治療充血性心力衰竭。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種賴諾普利的藥物組合物，該藥物組合物中含有賴諾普利和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，賴諾普利和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同治療白內(nèi)障。本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(Ⅰ)，一種賴諾普利的藥物組合物，包括賴諾普利、如權(quán)利要求1所述的化合物(Ⅰ)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。上述化合物(Ⅰ)的制備方法，包含以下操作步驟：(a)將遠(yuǎn)志粉碎，用85～95％乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟(a)中正丁醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用8％乙醇洗脫10個(gè)柱體積，再用70％乙醇洗脫12個(gè)柱體積，收集70％洗脫液，減壓濃縮得70％乙醇洗脫濃縮物；(c)步驟(b)中70％乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；(d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；(e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75％的甲醇水溶液等度洗脫，收集8～14個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(Ⅰ)。進(jìn)一步地，化合物(Ⅰ)的制備方法中，步驟(a)用90％乙醇熱回流提取，合并提取液。進(jìn)一步地，化合物(Ⅰ)的制備方法中，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。進(jìn)一步地，化合物(Ⅰ)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到二氯甲烷萃取物。上述化合物(Ⅰ)在制備治療白內(nèi)障的藥物中的應(yīng)用。上述賴諾普利的藥物組合物在制備治療白內(nèi)障的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明提供的賴諾普利的藥物組合物中含有賴諾普利和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，賴諾普利、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，對白內(nèi)障具有治療作用；賴諾普利和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時(shí)，對白內(nèi)障病的治療效果進(jìn)一步提高，可開發(fā)成治療白內(nèi)障的藥物。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范圍。實(shí)施例1：化合物(Ⅰ)分離制備及結(jié)構(gòu)確證試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。分離方法：(a)將遠(yuǎn)志(2kg)粉碎，用90％乙醇熱回流提取(20L×3次)，合并提取液，濃縮至無醇味(4L)，依次用石油醚(4L×3次)、乙酸乙酯(4L×3次)和水飽和的正丁醇(4L×3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟(a)中正丁醇萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用8％乙醇洗脫10個(gè)柱體積，再用70％乙醇洗脫12個(gè)柱體積，收集70％洗脫液，減壓濃縮得70％乙醇洗脫濃縮物；(c)步驟(b)中70％乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1(8個(gè)柱體積)、20:1(8個(gè)柱體積)、10:1(8個(gè)柱體積)和5:1(10個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；(d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1(8個(gè)柱體積)、5:1(10個(gè)柱體積)和2:1(5個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；(e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75％的甲醇水溶液等度洗脫，收集8～14個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(Ⅰ)(純度大于98％)。結(jié)構(gòu)確證：HR-ESI-MS顯示[M+H]+為m/z419.1629，結(jié)合核磁特征可得分子式為C22H24O7，不飽和度為11。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δH(ppm，CD3OD，500MHz)：H-4α(2.78，d，J＝18.7Hz)，H-4β(3.24，d，J＝18.7Hz)，H-6(5.66，d，J＝5.2Hz)，H-7(2.06，m)，H-8(2.10，m)，H-9(4.48，s)，H-11(6.33，s)，H-17(0.73，d，J＝6.8Hz)，H-18(1.32，d，J＝7.2Hz)，H-19a(5.89，s)，H-19b(5.91，s)，H-20α(3.56，d，J＝9.5Hz)，H-20β(3.65，d，J＝9.5Hz)，2-OCH3(4.12，s)，3-OCH3(3.64，s)；核磁共振碳譜數(shù)據(jù)δC(ppm，CD3OD，125MHz)：196.2(C，1-C)，161.5(C，2-C)134.5(C，3-C)，44.2(CH2，4-C)，143.2(C，5-C)，114.5(CH，6-C)，27.9(CH，7-C)，42.2(CH，8-C)，78.4(CH，9-C)，126.7(C，10-C)，96.8(CH，11-C)，131.2(C，12-C)，151.4(C，13-C)，144.6(C，14-C)，125.1(C，15-C)，56.5(C，16-C)，19.4(CH3，17-C)，14.7(CH3，18-C)，104.2(CH2，19-C)，62.1(CH2，20-C)，58.8(CH3，2-OCH3)，61.8(CH3，3-OCH3)。紫外波譜(218，271nm)和紅外吸收(1666，1627cm-1)表明該化合物含有芐基和羰基。氫譜顯示該化合物中有兩個(gè)雙峰甲基[δH0.73(3H，d，J＝6.8Hz)和1.32(3H，d，J＝7.2Hz)]，兩個(gè)甲氧基信號[δH4.12(3H，s)和3.64(3H，s)]，一組亞甲二氧基質(zhì)子信號[δH5.89(1H，s)和5.91(1H，s)]，一組含氧亞甲基質(zhì)子信號[δH3.56(1H，d，J＝9.5Hz)和3.65(1H，d，J＝9.5Hz)]，兩個(gè)烯質(zhì)子或者苯環(huán)質(zhì)子信號[δH6.33(1H，s)和5.66(1H，d，J＝5.2Hz)]，以及一個(gè)含氧次甲基質(zhì)子信號[δH4.48(1H，s)]。該化合物的碳譜結(jié)合HSQC譜，可以解析出22個(gè)碳信號，其中一個(gè)羰基碳信號，五組雙鍵碳信號以及一個(gè)亞甲二氧基碳信號。通過查閱文獻(xiàn)，以及1H-1HCOSY譜中給出的C-6-C-7-C-8-C-9的自旋體系可以推論出該化合物可能為一個(gè)二苯環(huán)辛烷木質(zhì)素類化合物。對化合物的HMBC譜進(jìn)行解析，H-20/C-16，H-20/C-15，H-20/C-9以及H-9/C-20之間的相關(guān)性說明在C-20和C-9之間存在一個(gè)氧橋。進(jìn)一步的解析發(fā)現(xiàn)，H-19/C-12以及H-19/C-13的相關(guān)性說明在C-12和C-13位之間存在一個(gè)亞甲二氧基結(jié)構(gòu)。H-4/C-2，H-4/C-3，2-OCH3/C-2，3-OCH3/C-3以及H-20/C-16的相關(guān)信號說明該化合物含有一個(gè)環(huán)己酮結(jié)構(gòu)單元。此外，H-6/C-5，H-6/C-16，H-4/C-6以及H-4/C-5的相關(guān)性說明C-5和C-6位存在雙鍵。ROESY譜中，H-9/CH3-18，CH3-17/CH3-18的相關(guān)說明17/18-CH3是位于α位的，而C-20位亞甲基是位于β位的。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和ROESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致。該化合物化學(xué)式及碳原子編號如下：實(shí)施例2：藥理作用本實(shí)施例使用半乳糖制備白內(nèi)障大鼠模型，觀察藥物提高眼晶體SOD的含量，降低眼晶體MDA的含量，即減輕眼晶體脂質(zhì)過氧化損傷等方面的抗白內(nèi)障作用。1、材料與方法1.1動(dòng)物SPF級Wistar大鼠，雌雄各半，30d齡，體重165～235g，外觀健康，分籠喂養(yǎng)，自由攝食攝水。實(shí)驗(yàn)室條件為動(dòng)物飼養(yǎng)室溫度20±2℃，相對濕度45％±10％，通風(fēng)良好。1.2試劑與樣品賴諾普利購自中國藥品生物制品檢定所?；衔?Ⅰ)自制，制備方法見實(shí)施例1。D-半乳糖(AR)用蒸餾水配成50％的溶液，高壓滅菌后供腹腔注射。SOD(超氧化物歧化酶)試劑盒、MDA(丙二醛)試劑盒、考馬斯亮藍(lán)試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。賴諾普利、化合物(Ⅰ)及其組合物先用少量DMSO超聲溶解，再用純化水溶解稀釋灌胃。1.3儀器裂隙燈顯微鏡(北京北方科儀公司)。1.4大鼠分組及模型制備大鼠隨機(jī)分為5組，每組12只，分別為正常對照組、模型對照組、賴諾普利組(80mg·kg-1)、化合物(Ⅰ)組(80mg·kg-1)、賴諾普利與化合物(Ⅰ)組合物組【40mg·kg-1賴諾普利+40mg·kg-1化合物(Ⅰ)】。除正常對照組外，其他組50％半乳糖腹腔注射，劑量為10g/kg，每日一次連續(xù)15d，另在飲水中加入5％半乳糖連續(xù)7d，誘發(fā)大鼠白內(nèi)障。實(shí)驗(yàn)第8d開始，按照上述劑量連續(xù)灌胃給藥7d，正常對照組與模型對照組大鼠灌胃給予等量的生理鹽水。1.5Wistar大鼠晶體勻漿的制備實(shí)驗(yàn)各組所有大鼠于實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)全部脫臼處死，立即取出雙側(cè)眼球，用生理鹽水沖洗3次，剝離晶體，并用濾紙吸干，放在電子天平上稱重。然后將雙側(cè)晶體放入玻璃勻漿器內(nèi)，按重量體積比加入生理鹽水緩沖溶液，充分研磨，制成1％晶體勻漿待測。1.6SOD活力和MDA含量的測定實(shí)驗(yàn)分別取各組大鼠晶體勻漿4℃離心10min(3000r/min)后，取出上清液測定SOD和MDA水平，測定采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行。1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，應(yīng)用SPSS18.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析和t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1對白內(nèi)障模型大鼠眼晶體SOD活力的影響與正常對照組比較，模型對照組大鼠SOD活力明顯降低(P＜0.01)；與模型對照組比較，賴諾普利與化合物(Ⅰ)組合物組大鼠SOD活力明顯升高(P＜0.01)；與模型對照組比較，賴諾普利組、化合物(Ⅰ)組大鼠SOD活力升高(P＜0.05)。結(jié)果見表1。2.2對白內(nèi)障模型大鼠眼晶體MDA含量的影響與正常對照組比，模型對照組大鼠眼晶體MDA含量明顯升高(P＜0.01)。與模型對照組比，賴諾普利與化合物(Ⅰ)組合物組大鼠眼晶體MDA含量明顯降低(P＜0.01)；與模型對照組比較，賴諾普利組、化合物(Ⅰ)組大鼠眼晶體MDA含量降低(P＜0.05)。試驗(yàn)結(jié)果見表1。表1對半乳糖性白內(nèi)障眼晶體SOD活力和MDA含量的影響組別SOD(NU/mg蛋白)MDA(nmol/m蛋白)正常對照組45.28±3.230.0427±0.0121模型對照組26.32±2.660.3421±0.0321賴諾普利組33.46±3.450.2092±0.0325化合物(Ⅰ)組34.99±3.210.2330±0.0262賴諾普利與化合物(Ⅰ)組合物組46.32±3.570.0696±0.0112結(jié)果表明，賴諾普利、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，對白內(nèi)障具有治療作用；賴諾普利和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時(shí)，對白內(nèi)障病的治療效果進(jìn)一步提高，可開發(fā)成治療白內(nèi)障的藥物。上述實(shí)施例的作用在于說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3