本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及拉氧頭孢鈉的新用途，具體涉及拉氧頭孢鈉的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：拉氧頭孢鈉的抗菌譜與頭孢噻肟近似，對(duì)多種革蘭陰性菌有良好的抗菌作用。大腸桿菌、流感桿菌、克雷白桿菌、各型變形桿菌、腸桿菌屬、枸櫞酸桿菌、沙雷桿菌等常對(duì)該品高度敏感。對(duì)厭氧菌有良好的抗菌作用。此外，由于該品的耐β-內(nèi)酰胺酶的性能強(qiáng)，微生物對(duì)該品很少發(fā)生耐藥性。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種拉氧頭孢鈉的藥物組合物，該藥物組合物中含有拉氧頭孢鈉和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，拉氧頭孢鈉和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同治療阿霉素腎病綜合征。本發(fā)明的上述目的是通過(guò)下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(Ⅰ)，一種拉氧頭孢鈉的藥物組合物，包括拉氧頭孢鈉、如權(quán)利要求1所述的化合物(Ⅰ)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤(rùn)滑劑。進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。上述化合物(Ⅰ)的制備方法，包含以下操作步驟：(a)將半夏粉碎，用65～75％乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟(a)中正丁醇取物用大孔樹(shù)脂除雜，先用20％乙醇洗脫9個(gè)柱體積，再用65％乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集65％洗脫液，減壓濃縮得65％乙醇洗脫濃縮物；(c)步驟(b)中65％乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為65:1、35:1、15:1和7:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；(d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為12:1、7:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；(e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為58％的甲醇水溶液等度洗脫，收集11～15個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(Ⅰ)。進(jìn)一步地，化合物(Ⅰ)的制備方法中，步驟(a)用70％乙醇熱回流提取，合并提取液。進(jìn)一步地，化合物(Ⅰ)的制備方法中，所述大孔樹(shù)脂為D101型大孔吸附樹(shù)脂。進(jìn)一步地，化合物(Ⅰ)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到二氯甲烷萃取物。上述化合物(Ⅰ)在制備治療阿霉素腎病綜合征的藥物中的應(yīng)用。上述拉氧頭孢鈉的藥物組合物在制備治療阿霉素腎病綜合征的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明提供的拉氧頭孢鈉的藥物組合物中含有拉氧頭孢鈉和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，拉氧頭孢鈉、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)阿霉素腎病綜合征具有治療作用；拉氧頭孢鈉和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)阿霉素腎病綜合征的治療效果顯著提高，可以開(kāi)發(fā)成治療阿霉素腎病綜合征的藥物。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范圍。實(shí)施例1：化合物(Ⅰ)分離制備及結(jié)構(gòu)確證分離方法：(a)將半夏(2kg)粉碎，用70％乙醇熱回流提取(15L×3次)，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味(3L)，依次用石油醚(3L×3次)、乙酸乙酯(3L×3次)和水飽和的正丁醇(3L×3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟(a)中乙酸乙酯萃取物用D101型大孔樹(shù)脂除雜，先用20％乙醇洗脫9個(gè)柱體積，再用65％乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集65％洗脫液，減壓濃縮得65％乙醇洗脫濃縮物；(c)步驟(b)中65％乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為65:1(9個(gè)柱體積)、35:1(10個(gè)柱體積)、15:1(8個(gè)柱體積)和7:1(8個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；(d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為12:1(6個(gè)柱體積)、7:1(7個(gè)柱體積)和1:1(6個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；(e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為58％的甲醇水溶液等度洗脫，收集11～15個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(Ⅰ)(純度大于98％)。結(jié)構(gòu)確證：HR-ESI-MS顯示[M+Na]+為m/z301.1244，結(jié)合核磁特征可得分子式為C15H18O5，不飽和度為7。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δH(ppm，CD3OD，500MHz)：H-1α(1.52，m)，H-1β(1.18，m)，H-2(1.68，m，2H)，H-3α(1.82，m)，H-3β(1.28，m)，H-5(2.18，s)，H-9α(1.51，d，J＝13.8Hz)，H-9β(2.22，d，J＝13.8Hz)，H-13(1.93，s)，H-14(1.11，s)，H-15a(3.12，d，J＝11.8Hz)，H-15b(2.81，d，J＝11.8Hz)；核磁共振碳譜數(shù)據(jù)δC(ppm，CD3OD，125MHz)：41.1(CH2，1-C)，20.3(CH2，2-C)，35.4(CH2，3-C)，61.9(C，4-C)，54.8(CH，5-C)，218.3(C，6-C)，148.7(C，7-C)，113.2(C，8-C)，51.2(CH2，9-C)，37.6(C，10-C)，121.5(C，11-C)，171.7(C，12-C)，8.5(CH3，13-C)，18.2(CH3，14-C)，51.8(CH2，15-C)。氫譜和碳譜顯示該化合物含有一個(gè)α,β-不飽和γ-內(nèi)酯結(jié)構(gòu)[δC148.7(C-7)，113.2(C-8)，121.5(C-11)和171.7(C-12)]，一個(gè)半縮醛碳[δC113.2(C-8)]，一個(gè)乙烯基甲基[δH1.93(3H，s，H-13)；δC8.5(C-13)]，一個(gè)甲基質(zhì)子信號(hào)[δH1.11(3H，s，H-14)；δC18.2(C-14)]以及一個(gè)1,1-取代環(huán)氧乙烷結(jié)構(gòu)[δH3.12(1H，d，J＝11.8Hz，H-15a)和2.81(1H，d，J＝11.8Hz，H-15b)；δC51.8(C-15)和61.9(C-4)]。HMBC譜中H2-15與C-3，C-4和C-5的相關(guān)性表明環(huán)氧乙烷位于C-4和C-15之間。結(jié)合核磁數(shù)據(jù)信息以及高分辨質(zhì)譜信息可以看出這個(gè)化合物是典型的桉烷型倍半萜內(nèi)酯類化合物。查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，該化合物和已知化合物multistalactoneA具有相似的結(jié)構(gòu)，通過(guò)和該化合物進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，新化合物中多了酮羰基碳信號(hào)。對(duì)該化合物的HMBC譜的解析中發(fā)現(xiàn)，H-5與C-6的相關(guān)性說(shuō)明在新化合物中多出來(lái)的羰基碳信號(hào)基是位于C-6位的。ROESY譜中，Me-14與H-9α，Me-14與H2-15，以及H-9β與H-5的相關(guān)性表明H2-15和Me-14為α構(gòu)型，H-5為β構(gòu)型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和ROESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過(guò)ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致。該化合物化學(xué)式及碳原子編號(hào)如下：實(shí)施例2：藥理作用本實(shí)施例使用阿霉素(14.5mg·kg-1)按滲透泵灌注要求填充，手術(shù)植入大鼠腹腔，通過(guò)滲透壓恒釋阿霉素誘發(fā)腎病綜合征模型制備阿霉素腎病綜合征(NS)大鼠模型，觀察藥物減少NS大鼠尿蛋白，降低大鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)等方面的抗阿霉素腎病綜合征作用。1、材料與方法1.1動(dòng)物SPF級(jí)SD大鼠，雄性，體重180～200g，購(gòu)自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。所有大鼠均行動(dòng)活躍、毛發(fā)光澤，兩次尿蛋白定性試驗(yàn)陰性(試紙條法)。1.2試劑與樣品拉氧頭孢鈉購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所?；衔?Ⅰ)自制，制備方法見(jiàn)實(shí)施例1。鹽酸阿霉素(深圳萬(wàn)樂(lè)藥業(yè)有限公司)，氯化鈉(廣東總?cè)A化藥廠有限公司)，水合氯醛(天津津南區(qū)咸水沽工業(yè)園區(qū))，多項(xiàng)尿液檢測(cè)試紙條(干式化學(xué)法)(艾康生物科技有限公司)，考馬斯亮藍(lán)試劑盒(南京建成科技有限公司)，F(xiàn)ITC熒光素標(biāo)記兔抗大鼠IgG(北京博奧森生物科技有限公司)。1.3儀器ALZET2004型滲透緩釋泵(美國(guó)DURECT公司)，代謝籠(蘇州市艾可林實(shí)驗(yàn)動(dòng)物器材廠)，T6新世紀(jì)紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)，T1000型電子天平(常熟市雙杰測(cè)試儀器廠)，EL204型電子分析天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)，65-12manul動(dòng)物無(wú)創(chuàng)血壓測(cè)試儀(美國(guó)IITC公司)，全自動(dòng)生化分析儀(日立-7180)；冰凍切片機(jī)(LeicaCM1800)；熒光倒置顯微鏡(NIKONTE2000-S)。1.4大鼠分組及模型制備1.4.1阿霉素滲透泵的準(zhǔn)備Alzet2004D滲透泵(0.25±5)μL·h-1，28d)。填充前稱取各滲透泵質(zhì)量并記錄，按滲透泵填充要求灌充阿霉素生理鹽水溶液(14.5mg·kg-1)，稱量灌注后各滲透泵質(zhì)量并記錄，以灌注前后滲透泵質(zhì)量的差值計(jì)算灌注體積，灌注體積小于要求填充體積90％，抽空重新填充；填充合格的透泵浸入37℃無(wú)菌生理鹽水中，備用。1.4.2滲透泵的植入SD大鼠60只，雄性，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，隨機(jī)挑選50只大鼠以10％水合氯醛麻醉，大鼠背部朝上固定，于右腎下方2cm位置開(kāi)口并將阿霉素滲透泵植入腎臟上方，縫合肌肉層及皮層，術(shù)后每只老鼠肌注青霉素0.2mL/只；另外10只，同樣操作，僅置入滲透泵同樣大小塑膠，假手術(shù)處置作為空白對(duì)照組。造模期間以尿蛋白試紙監(jiān)測(cè)造模情況，造模兩周后，收集24h尿液，考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定尿蛋白含量，造模組和正常組比較無(wú)差異的予以剔除，造模成功大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組(地塞米松組，50mg·kg-1)和拉氧頭孢鈉組(80mg·kg-1)、化合物(Ⅰ)組(80mg·kg-1)、拉氧頭孢鈉與化合物(Ⅰ)組合物組【40mg·kg-1拉氧頭孢鈉+40mg·kg-1化合物(Ⅰ)】。適應(yīng)環(huán)境1周后，連續(xù)灌胃給藥7d，空白對(duì)照組和模型對(duì)照組大鼠ig等量的生理鹽水。1.524h尿蛋白測(cè)定實(shí)驗(yàn)給藥4周后將各組大鼠裝入代謝籠收集24h尿液，考馬斯亮藍(lán)法定量測(cè)定24h尿蛋白量，觀察各組大鼠尿蛋白變化。1.6血清指標(biāo)測(cè)定實(shí)驗(yàn)?zāi)┐谓o藥后1h，麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈取血，分離血清，全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血液生化指標(biāo)：尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)。1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，應(yīng)用SPSS18.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析和t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1對(duì)NS模型大鼠對(duì)NS尿蛋白的影響與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠24h尿蛋白顯著升高(P＜0.01)；與模型對(duì)照組比較，拉氧頭孢鈉與化合物(Ⅰ)組合物組和陽(yáng)性對(duì)照組尿蛋白顯著降低(P＜0.01)；與模型對(duì)照組比較，拉氧頭孢鈉組、化合物(Ⅰ)組尿蛋白降低(P＜0.05)。結(jié)果見(jiàn)表1。2.2對(duì)NS模型大鼠腎功能指標(biāo)的影響與空白對(duì)照組比，模型對(duì)照組大鼠BUN，Cr水平明顯上升(P＜0.01)。與模型對(duì)照組比，拉氧頭孢鈉與化合物(Ⅰ)組合物組和陽(yáng)性對(duì)照組大鼠BUN，Cr水平明顯下降(P＜0.01)；與模型對(duì)照組比，拉氧頭孢鈉組、化合物(Ⅰ)組大鼠BUN，Cr水平下降(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。表1對(duì)NS模型大鼠尿蛋白和腎功能指標(biāo)的影響組別尿蛋白mgBUN/mmol·L-1SCr/μmol·L-1空白對(duì)照組7.44±1.667.35±0.7623.26±2.37模型對(duì)照組109.86±9.6516.2±1.1546.2±2.27陽(yáng)性對(duì)照組19.77±5.147.91±0.7420.29±2.53拉氧頭孢鈉組51.45±4.468.86±0.5922.74±2.76化合物(Ⅰ)組49.51±7.418.73±0.8223.37±1.84拉氧頭孢鈉與化合物(Ⅰ)組合物組29.18±3.917.92±0.5620.93±0.32腎病綜合征常見(jiàn)的病理組織學(xué)改變是局灶節(jié)段性腎炎、膜性腎病和微小病變，近年來(lái)成人腎病綜合征中微小病變腎病綜合征及膜增殖性腎炎呈減少趨勢(shì)，而系膜性IgA腎病呈增加趨勢(shì)。阿霉素誘發(fā)大鼠腎病綜合征是一個(gè)經(jīng)典模型，阿霉素在體內(nèi)相關(guān)酶的作用下，使細(xì)胞膜和細(xì)胞器生物膜脂質(zhì)過(guò)氧化，對(duì)腎小球和腎小管上皮產(chǎn)生直接毒性作用而產(chǎn)生大量蛋白尿。滲透壓緩釋泵技術(shù)是一種新型的恒速緩釋給藥方式，由藥物、滲透壓劑和半透膜組成，通過(guò)滲透壓提供藥物釋放的驅(qū)動(dòng)力，將所需試劑溶液按要求持續(xù)的、定量定點(diǎn)緩釋到需要給藥的部位。滲透泵植入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)針對(duì)特定部位給藥(如脊髓、顱腔、肝臟、脾臟等)，已成功運(yùn)送上百種藥劑，包括蛋白質(zhì)、多肽、生長(zhǎng)因子、抗生素、化療藥、激素、類固醇、siRNA。在動(dòng)物給藥、動(dòng)物模型構(gòu)建、藥物篩選等眾多領(lǐng)域發(fā)揮著不可替代的作用。本實(shí)驗(yàn)采用微滲泵技術(shù)恒釋阿霉素誘發(fā)腎病綜合征模型，將阿霉素裝入微滲泵里植入到大鼠腹腔，對(duì)阿霉素進(jìn)行長(zhǎng)期恒速微量釋放，延長(zhǎng)阿霉素在動(dòng)物體內(nèi)的作用時(shí)間，避免因注射引起的濃度波動(dòng)。上述結(jié)果表明，拉氧頭孢鈉、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)阿霉素腎病綜合征具有治療作用；拉氧頭孢鈉和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)阿霉素腎病綜合征的治療效果顯著提高，可以開(kāi)發(fā)成治療阿霉素腎病綜合征的藥物。上述實(shí)施例的作用在于說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3