本發(fā)明屬于生物基因技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及RNF8在促進乳腺癌方面的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

雌激素受體α(estrogen receptor α，ERα)是類固醇激素受體家族成員之一，通過與其配體雌激素結(jié)合激活而在個體發(fā)生、生長發(fā)育和生殖功能的各方面都起著必不可缺的作用。通過直接與ERα靶基因的特定DNA結(jié)合位點結(jié)合介導(dǎo)靶基因轉(zhuǎn)錄，從而發(fā)揮其生物學(xué)功能。ERα通常定位在細(xì)胞質(zhì)中，E2與ERα結(jié)合使ERα與伴侶分子分離，ERα被磷酸化，從而使ERα誘導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄被激活。在此過程中，ERα的輔助調(diào)節(jié)因子被招募到ERα的靶基因啟動子/增強子區(qū)域，在ERα介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄中起重要的調(diào)控作用。ERα包含有三個功能結(jié)構(gòu)域：N端的活性功能域1(AF-1)，中間的高度保守的DNA結(jié)合域，和C端的配體(E2)結(jié)合域，即配體依賴的活性功能域2(AF-2)。隨后，ERα二聚體結(jié)合到靶基因的雌激素反應(yīng)元件區(qū)，激活靶基因的轉(zhuǎn)錄從而發(fā)揮生物學(xué)功能。

當(dāng)今社會癌癥是引起人類死亡的重要原因。其中乳腺癌是全世界女性高發(fā)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率在世界范圍內(nèi)呈較快增長趨勢，每年約以0.2％-0.3％的速度遞增，且發(fā)病年齡趨向年輕化。乳腺癌是發(fā)生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤，乳腺并不是維持人體生命活動的重要器官，原位乳腺癌并不致命；但由于乳腺癌細(xì)胞喪失了正常細(xì)胞的特性，細(xì)胞之間連接松散，容易脫落。癌細(xì)胞一旦脫落，游離的癌細(xì)胞可以隨血液或淋巴液播散全身，形成轉(zhuǎn)移，危及生命。研究證實在正常乳腺上皮細(xì)胞內(nèi)雌激素受體α(Estrogen Receptor α，ERα)很少高表達，而在大約60％-80％的乳腺癌中，ERα呈高表達。ERα不但在女性生殖系統(tǒng)的正常生長和功能中起關(guān)鍵作用，還影響惡性乳腺上皮細(xì)胞的生長、分化、增殖和DNA復(fù)制，從而刺激腫瘤細(xì)胞的快速生長，ERα基因突變及功能異常與激素抵抗性乳腺癌轉(zhuǎn)移密切關(guān)聯(lián)。

近年來，越來越多的研究表明轉(zhuǎn)錄輔調(diào)節(jié)因子對ERα下游基因表達的調(diào)控對乳腺癌的發(fā)生發(fā)展十分關(guān)鍵，如pS2，cyclinD1，E2F1，Sirt1，GREB1，c-Myc等等。他們對腫瘤細(xì)胞增殖和生長起重要作用。大量研究證實，ERα輔調(diào)節(jié)因子的功能異常不僅影響乳腺癌細(xì)胞的增殖生長、侵襲轉(zhuǎn)移，還與tamoxifen治療抵抗相關(guān)。有研究證實ERα輔調(diào)節(jié)因子的差異表達是乳腺癌患者tamoxifen治療抵抗的主要機制之一。所以，無論是雌激素受體自身的改變還是其相關(guān)轉(zhuǎn)錄輔因子的改變都能導(dǎo)致雌激素受體信號通路異常，影響乳腺癌的發(fā)生發(fā)展。因此，鑒定和解析ERα輔調(diào)節(jié)因子在ERα介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)錄中的表觀遺傳學(xué)機制越來越受到關(guān)注，對于進一步研究腫瘤治療中潛能藥物靶點也具有重要的科學(xué)意義。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供RNF8在促進乳腺癌方面的應(yīng)用，RNF8可以促進乳腺癌細(xì)胞的生長，并在臨床乳腺癌中表達增多，在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中起促進作用。

本發(fā)明的技術(shù)方案是：

RNF8在促進乳腺癌方面的新應(yīng)用。

優(yōu)選的，RNF8可促進乳腺癌細(xì)胞的生長。

優(yōu)選的，RNF8可上調(diào)ERα介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄。

優(yōu)選的，RNF8作為泛素化酶通過單泛素化作用穩(wěn)定ERα蛋白，促進ERα靶基因pS2、E2F1、c-Myc等的轉(zhuǎn)錄，從而進一步促進乳腺癌細(xì)胞的生長。

一種RNF8在制備促進乳腺癌生長的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

一種RNF8作為靶點在制備抑制乳腺癌生長的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

一種RNF8在制備治療乳腺癌疾病的制劑或藥物中的應(yīng)用。

一種RNF8抑制劑和其他抗腫瘤藥物聯(lián)用在制備治療乳腺癌疾病的制劑或藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明具有的優(yōu)點和積極效果是：研究表明RNF8在一些癌癥(如卵巢癌、肺癌等)中具有作用，但RNF8對乳腺癌的作用及其機制仍未見報道。本發(fā)明為治療乳腺癌特別是他莫西芬抵抗乳腺癌提供了新思路、新靶點。

附圖說明

圖1是RNF8表達質(zhì)粒圖。

圖2是針對RNF8的shRNA沉默效果和RNF8對ERα蛋白的影響圖。

圖3是RNF8對ERα靶基因轉(zhuǎn)錄水平的影響圖。

圖4是RNF8沉默對細(xì)胞生長增殖能力的影響圖。

圖5是RNF8在乳腺癌和癌旁組織中的表達圖。

具體實施方式

S1、根據(jù)RNF8的氨基酸序列構(gòu)建FLAG標(biāo)簽的RNF8表達質(zhì)粒(如圖1)。

S2、利用針對RNF8的shRNA慢病毒載體感染ERα陽性表達的乳腺癌細(xì)胞系MCF7，建立穩(wěn)定沉默RNF8的乳腺癌細(xì)胞系及對照細(xì)胞系。

如圖2所示，shcontrol中RNF8正常表達，但shRNF8中RNF8表達明顯降低，干擾RNF8表達的目的達到。細(xì)胞系中內(nèi)參基因GAPDH表達量一致，ERα的表達也受影響。RNF8的沉默下調(diào)ERα蛋白的表達，單泛素化ERα蛋白。

S3、通過Realtime-PCR檢測RNF8對ERα的靶基因轉(zhuǎn)錄的影響，結(jié)果顯示RNF8調(diào)控ERα的一部分靶基因。結(jié)果如圖3所示，對pS2，hTERT，E2F1，CyclinD1，c-Myc均有影響。

S4、細(xì)胞計數(shù)實驗和克隆形成實驗的結(jié)果表明沉默RNF8抑制了細(xì)胞的生長增殖能力。

如圖4所示，RNF8沉默的實驗組細(xì)胞數(shù)低于對照組，說明RNF8沉默抑制細(xì)胞的生長繁殖。

S5、如圖5所示，通過檢測乳腺癌組織及癌旁組織樣本中RNF8和ERα的表達情況發(fā)現(xiàn)，RNF8在乳腺癌中表達高于癌旁組織，并與ERα存在一定的相關(guān)性。

本發(fā)明利用ER-PEV果蠅轉(zhuǎn)基因模型系統(tǒng)篩選得到雌激素受體ERα的新轉(zhuǎn)錄輔調(diào)節(jié)因子RNF8，證實在加入雌激素環(huán)境下RNF8上調(diào)ERα介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄。RNF8作為泛素化酶通過單泛素化作用穩(wěn)定ERα蛋白，促進ERα靶基因pS2、E2F1、c-Myc等的轉(zhuǎn)錄，從而進一步促進乳腺癌及他莫西芬抵抗乳腺癌細(xì)胞的生長。

由此本發(fā)明為治療乳腺癌特別是他莫西芬抵抗乳腺癌提供了新思路、新靶點。

以上對本發(fā)明的一個實施例進行了詳細(xì)說明，但所述內(nèi)容僅為本發(fā)明的較佳實施例，不能被認(rèn)為用于限定本發(fā)明的實施范圍。凡依本發(fā)明申請范圍所作的均等變化與改進等，均應(yīng)仍歸屬于本發(fā)明的權(quán)利涵蓋范圍之內(nèi)。