本發(fā)明涉及病毒防治領(lǐng)域，特別是指一種煙草抗黃瓜花葉病毒病的抗病性強(qiáng)弱的鑒定方法。
背景技術(shù)：
黃瓜花葉病毒(CMV)是一種非常嚴(yán)重的病毒病害，病毒可以到達(dá)除生長(zhǎng)點(diǎn)以外的任何部位。黃瓜花葉病毒是寄主范圍最多、分布最廣、最具經(jīng)濟(jì)重要性的植物病毒之一。全世界所有煙草種植區(qū)均有該病毒的分布和危害，因此，如何有效的挑選出抗黃瓜花葉病毒病的抗病性強(qiáng)的煙草，是降低該病毒危害的重要方法，而在煙草抗黃瓜花葉病毒病的抗病性強(qiáng)弱的鑒定方法上，還沒(méi)有非常統(tǒng)一有效的方法。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明提出一種煙草抗黃瓜花葉病毒病的抗病性強(qiáng)弱的鑒定方法，實(shí)現(xiàn)對(duì)煙草抗TMV抗病性強(qiáng)弱的鑒定，簡(jiǎn)單準(zhǔn)確，便于推廣使用。
本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：煙草抗黃瓜花葉病毒病的抗病性強(qiáng)弱的鑒定方法，包括以下步驟：
步驟1：制備接種體；
步驟2：接種病毒；
步驟3：調(diào)查與鑒定；
其中，步驟1中，接種體選用當(dāng)?shù)刂晗?，接種到三生-NN上繁殖保存，為防止保存期病毒的致病性退化，在使用前15d轉(zhuǎn)接到三生-NN煙上復(fù)壯一次，備用。
進(jìn)一步，步驟2中，接種病毒的方法，采用在煙苗4-5片真葉時(shí)進(jìn)行汁液摩擦接種，在第一片真葉上撒400-500目的金剛砂，然后用棉花蘸取病毒汁液，在葉片上摩擦；或采用噴槍接種，接種前在病毒汁液中加入1％金剛砂，高壓噴射，噴口距接種物20cm，每株噴接0.5s；接種7d后，如未見(jiàn)發(fā)表則再回接1次，其中的金剛砂便于進(jìn)行感染。
進(jìn)一步，為保證鑒定的準(zhǔn)確性，設(shè)3次重復(fù)，隨機(jī)排列，每次重復(fù)不少于15株煙苗，煙株保持在25-28℃下生產(chǎn)，設(shè)置Ti245和鐵把子為抗病對(duì)照、G28和亮黃煙為感病對(duì)照。
進(jìn)一步，步驟3中，調(diào)查安排在接種后第7d、14d、21d全部煙株發(fā)病情況。
進(jìn)一步，病害嚴(yán)重程度分級(jí)按照以下分級(jí)方式進(jìn)行：
以株為單位分級(jí)：
0級(jí)：全株無(wú)病；
1級(jí)：心葉脈明或輕微花葉，病株無(wú)明顯矮化；
3級(jí)：三分之一葉片花葉但不變形，或病株矮化為正常株高的四分之三以上；
5級(jí)：三分之一至二分之一葉片花葉，或少數(shù)葉片變形，或主脈變黑，或病株矮化為正常株高的三分之二或四分之三；
7級(jí)：二分之一至三分之二葉片花葉，或變形或主側(cè)脈壞死，或病株矮化為正常株高的二分之一至三分之二；
9級(jí)：全株葉片花葉，嚴(yán)重變形或壞死，或病株矮化為正常株高的二分之一以上。
進(jìn)一步，步驟三中，各次調(diào)查數(shù)據(jù)中以感病對(duì)照品種發(fā)病最先達(dá)到感病的調(diào)查數(shù)據(jù)為依據(jù)進(jìn)行抗病性評(píng)價(jià)，感病對(duì)照的病情指數(shù)不低于60時(shí)，方可認(rèn)為實(shí)驗(yàn)及評(píng)價(jià)有效。
進(jìn)一步，品種抗病性標(biāo)準(zhǔn)如下：
高抗或免疫：病情指數(shù)為0；
抗?。翰∏橹笖?shù)為0.1-20；
中抗：病情指數(shù)為20.1-40；
中感：病情指數(shù)為40.1-60；
感病：病情指數(shù)為60.1-80；
高感：病情指數(shù)為80.1-100。
本發(fā)明的所述煙草抗黃瓜花葉病毒病的抗病性強(qiáng)弱的鑒定方法，結(jié)合當(dāng)?shù)氐臍夂?、植株等情況，進(jìn)行植株抗TMV抗病性的鑒定，簡(jiǎn)單方便，適于推廣。
具體實(shí)施方式
下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
實(shí)施例1
實(shí)施地區(qū)為廣東
步驟1：制備接種體；
接種體選用當(dāng)?shù)貎?yōu)勢(shì)株系(或者根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行選取)，接種到“三生-NN”煙(Nicotiana tabacum var samsun NN))上繁殖保存，為防止保存期病毒的致病性退化，并在使用前15d轉(zhuǎn)接到“三生-NN”煙上復(fù)壯一次，備用。
步驟2：接種病毒；
采用在煙苗4-5片真葉時(shí)進(jìn)行汁液摩擦接種，在第一片真葉上撒400-500目的金剛砂，然后用棉花蘸取病毒汁液，在葉片上摩擦；煙苗數(shù)量較大的，則可以采用噴槍接種，接種前在病毒汁液中加入1％金剛砂，高壓噴射(壓力為68947.6-206842.8Pa)，噴口距接種物20cm，每株噴接0.5s；接種7d后，如未見(jiàn)發(fā)表則再回接1次，其中的金剛砂便于進(jìn)行感染。
步驟3：調(diào)查與鑒定；
調(diào)查安排在接種后第7d、14d、21d全部煙株發(fā)病情況。
結(jié)果鑒定與抗病性評(píng)價(jià)。
實(shí)施例2
方法同實(shí)施例1，區(qū)別在于實(shí)施地區(qū)為黑龍江。
實(shí)施例3
方法同實(shí)施例1，區(qū)別在于實(shí)施地區(qū)為山東。
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。