背景技術：
工業(yè)培養(yǎng)的有用菌種，需要經(jīng)過菌種分離、初篩和復篩等步驟，最終挑選出具有某種能力的有用菌種，即純種。固氮生物肥料生產(chǎn)過程中，需要將來源于自然界的微生物分離并篩選出有用的固氮菌種，再加以改良、培養(yǎng)后經(jīng)過培養(yǎng)罐培養(yǎng)，獲得大量的固氮細菌，最后用于固氮生物肥料的生產(chǎn)。其中，在復篩步驟中，需要進行固氮細菌的搖瓶培養(yǎng)，測定固氮能力，挑選固氮能力強者作生產(chǎn)菌種的出發(fā)菌株。
當前在固氮細菌的培養(yǎng)過程中，都是采用搖瓶培養(yǎng)進行中試的。固氮細菌喜靜而不喜動。因此，搖瓶培養(yǎng)對固氮細菌的培養(yǎng)會帶來培養(yǎng)不充分、不穩(wěn)定因素，測定固氮能力時也存在明顯偏差，影響芽孢的生長和挑選，最終影響固氮生物肥料的生產(chǎn)。另外，傳統(tǒng)的固氮細菌培養(yǎng)配方采用酵母膏、甘露醇、瓊脂原料等構成液體培養(yǎng)基，脫離了其原本生長所依托的土壤環(huán)境，不利于固氮細菌呼吸氧氣，因此出發(fā)菌株的生長也不理想?；诖耍締挝辉谕寥琅囵B(yǎng)及靜止培養(yǎng)方面進行了相關的嘗試。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的就是要提供一種固氮細菌菌種土壤培養(yǎng)配方及培養(yǎng)工藝，提高固氮菌培養(yǎng)的準確性，以提高固氮生物肥料生產(chǎn)的質(zhì)量。
為了達到上述目的，本發(fā)明提供的固氮細菌菌種土壤培養(yǎng)配方為：蔗糖5～15克/千克，硫酸鎂0.1～1克/千克，磷酸二氫鉀0.1～0.5克/千克，鉬酸銨0.01～0.5克/千克，磷檬酸鈉0.1～1克/千克，凈土1000克，蒸餾水1000毫升，其中，凈土為普通土壤經(jīng)過滅菌和去脂處理后獲得。
基于上述固氮細菌菌種土壤培養(yǎng)配方的培養(yǎng)工藝，具體包括如下步驟：
①、按上述配方稱重后混合均勻，得到混合培養(yǎng)基；
②、用氫氧化鉀將混合培養(yǎng)基的PH值調(diào)節(jié)至7.0～7.2；
③、將混合培養(yǎng)基分裝于500毫升廣口三角瓶內(nèi)，裝瓶量為60克每瓶；
④、用蒸汽高壓鍋在121℃和0.11Pa壓力下滅菌30分鐘，后取出后自然冷卻至常溫；
⑤、在無菌環(huán)境下接種；
⑥、在30～34℃溫度條件下靜置培養(yǎng)48小時；
⑦、通過顯微鏡檢查和觀察，記錄固氮菌數(shù)量，完成培養(yǎng)工作。
本發(fā)明所提供的固氮細菌菌種土壤培養(yǎng)配方基于土壤條件，更加符合固氮菌原本的生長環(huán)境和生長所需的營養(yǎng)條件，利于固氮菌呼吸氧氣，培養(yǎng)工藝也能夠提供固氮菌原本生長所需的潔凈環(huán)境和靜止狀態(tài)，因此能夠促進固氮菌的生長和繁育，提高固氮菌培養(yǎng)的準確性和有效性，以提高固氮生物肥料生產(chǎn)的質(zhì)量。
具體實施方式 下面根據(jù)具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明，但不意味著限制本發(fā)明的保護范圍。
實施例1：固氮細菌菌種土壤培養(yǎng)配方為：蔗糖5克/千克，硫酸鎂0.1克/千克，磷酸二氫鉀0.1克/千克，鉬酸銨0.01克/千克，磷檬酸鈉0.1克/千克，凈土1000克，蒸餾水1000毫升，其中，凈土為普通土壤經(jīng)過滅菌和去脂處理后獲得。
基于上述固氮細菌菌種土壤培養(yǎng)配方的培養(yǎng)工藝，具體包括如下步驟：
①、按上述配方稱重后混合均勻，得到混合培養(yǎng)基；
②、用氫氧化鉀將混合培養(yǎng)基的PH值調(diào)節(jié)至7.0～7.2；
③、將混合培養(yǎng)基分裝于500毫升廣口三角瓶內(nèi)，裝瓶量為60克每瓶；
④、用蒸汽高壓鍋在121℃和0.11Pa壓力下滅菌30分鐘，后取出后自然冷卻至常溫；
⑤、在無菌環(huán)境下接種；
⑥、在30～34℃溫度條件下靜置培養(yǎng)48小時；
⑦、通過顯微鏡檢查和觀察，記錄固氮菌數(shù)量，完成培養(yǎng)工作。
實施例2：固氮細菌菌種土壤培養(yǎng)配方為：蔗糖7克/千克，硫酸鎂0.3克/千克，磷酸二氫鉀0.2克/千克，鉬酸銨0.05克/千克，磷檬酸鈉0.3克/千克，凈土1000克，蒸餾水1000毫升，其中，凈土為普通土壤經(jīng)過滅菌和去脂處理后獲得。
基于上述固氮細菌菌種土壤培養(yǎng)配方的培養(yǎng)工藝，具體步驟與實施例1相同。
實施例3：固氮細菌菌種土壤培養(yǎng)配方為：蔗糖9克/千克，硫酸鎂0.5克/千克，磷酸二氫鉀0.3克/千克，鉬酸銨0.1克/千克，磷檬酸鈉0.5克/千克，凈土1000克，蒸餾水1000毫升，其中，凈土為普通土壤經(jīng)過滅菌和去脂處理后獲得。
基于上述固氮細菌菌種土壤培養(yǎng)配方的培養(yǎng)工藝，具體步驟與實施例1相同。
實施例4：固氮細菌菌種土壤培養(yǎng)配方為：蔗糖12克/千克，硫酸鎂0.7克/千克，磷酸二氫鉀0.4克/千克，鉬酸銨0.3克/千克，磷檬酸鈉0.7克/千克，凈土1000克，蒸餾水1000毫升，其中，凈土為普通土壤經(jīng)過滅菌和去脂處理后獲得。
基于上述固氮細菌菌種土壤培養(yǎng)配方的培養(yǎng)工藝，具體步驟與實施例1相同。
實施例5：固氮細菌菌種土壤培養(yǎng)配方為：蔗糖15克/千克，硫酸鎂1克/千克，磷酸二氫鉀0.5克/千克，鉬酸銨0.5克/千克，磷檬酸鈉1克/千克，凈土1000克，蒸餾水1000毫升，其中，凈土為普通土壤經(jīng)過滅菌和去脂處理后獲得。
基于上述固氮細菌菌種土壤培養(yǎng)配方的培養(yǎng)工藝，具體步驟與實施例1相同。
實施例6：本實施例為參照對比例，固氮細菌菌種培養(yǎng)配方為：磷酸二氫鉀0.2克/升，磷酸氫鉀0.8克/升，硫酸鎂0.2克/升，硫酸鈣0.1克/升，高錳酸鈉0.01克/升，酵母膏0.5克/升，甘露醇20克/升，氯化鐵0.01克/升，蒸餾水1000克，瓊脂15克/升。
基于上述固氮細菌菌種培養(yǎng)配方的培養(yǎng)工藝，具體包括如下步驟：
①、按上述配方稱重后混合均勻，得到混合培養(yǎng)液；
②、用氫氧化鉀將混合培養(yǎng)基的PH值調(diào)節(jié)至7.0～7.2；
③、將混合培養(yǎng)基分裝于500毫升廣口三角瓶內(nèi)，裝瓶量為60毫升每瓶；
④、用蒸汽高壓鍋在121℃和0.11Pa壓力下滅菌30分鐘，后取出后自然冷卻至常溫；
⑤、在無菌環(huán)境下接種；
⑥、在30～34℃溫度條件下?lián)u床培養(yǎng)48小時，搖床轉速為每分鐘180～220轉；
⑦、通過顯微鏡檢查和觀察，記錄固氮菌數(shù)量，完成培養(yǎng)工作。
根據(jù)上述實施例1-5的有土配方和靜止的培養(yǎng)工藝進行培養(yǎng)，對比實施例6的無土配方和搖床培養(yǎng)工藝進行培養(yǎng)，記錄每個培養(yǎng)瓶內(nèi)固氮菌數(shù)量，得到了每個實施例的平均數(shù)值。上述實施例1-6結果見表1：
表1：實施例1-6的解氮細菌鏡檢結果
從表1可見，實施例1-5的芽孢數(shù)量明細多于對比實施例6，實施例1-5的芽孢形成率較對比實施例6高，且實施例1-5的芽孢外形也比對比實施例6粗壯。實施例1-5之間的平均芽孢數(shù)量存在差異，主要是因為每個配方數(shù)量的多少導致的?？傊景l(fā)明在固氮細菌土壤培養(yǎng)和靜止培養(yǎng)方面區(qū)別于傳統(tǒng)的固氮細菌液體培養(yǎng)和搖床培養(yǎng)工藝，對固氮細菌的培養(yǎng)具有顯著的促進效果。
本發(fā)明保護范圍涉及上面所述的所有變化形式。