專利名稱：菌絲球吸附光合細(xì)菌形成混合菌絲球的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種環(huán)境生物工程混合菌絲球的方法，特別是涉及一種菌絲球吸附光合細(xì)菌形成混合菌絲球的方法。
背景技術(shù)：
光合細(xì)菌(Photosynthetic bacteria,簡稱PSB)是一種在污水凈化領(lǐng)域具有廣闊應(yīng)用前景的原始光能合成體系微生物。該類微生物具有隨環(huán)境條件變化而靈活改變代謝類型的特性，可以在厭氧光照和好氧黑暗條件下對廢水中有機(jī)物進(jìn)行降解。此外，PSB還具有工藝設(shè)備簡單、有機(jī)負(fù)荷高、菌體可回收利用、不造成二次污染等優(yōu)良特性?；诖耍陙韲鴥?nèi)外學(xué)者對光合細(xì)菌進(jìn)行了廣泛應(yīng)用和深入研究，并對食品加工、印染、焦化、養(yǎng)殖、制藥等多種行業(yè)高濃度有機(jī)廢水作了成功處理。然而，光合細(xì)菌的細(xì)胞個(gè)體普遍十分微小，其中球狀細(xì)菌的直徑為0.3 0.6μ m,桿狀為0.5 1.0 μ mX 0.9 2.0 μ m。因此，直接利用游離態(tài)的光合細(xì)菌處理廢水存在諸多不足，包括菌體細(xì)胞易被水中原生動(dòng)物所吞噬，自然沉降困難，在有限的時(shí)間內(nèi)固液分離效果不理想，菌體不易回收重復(fù)利用等問題，從而一方面造成了光合細(xì)菌細(xì)胞的流失，使得廢水處理過程中需要不斷添加新鮮菌體；另一方面導(dǎo)致處理后的廢水?dāng)y帶有大量細(xì)胞，使出水具有一定色度，COD和BOD偏高，無法達(dá)到直接排放標(biāo)準(zhǔn)。光合細(xì)菌存在的這些問題，嚴(yán)重制約了其在有機(jī)廢水處理過程中的推廣應(yīng)用。要解決此類問題，可以考慮采用一定的物理或化學(xué)手段，如利用載體材料、包埋物質(zhì)等，使光合細(xì)菌細(xì)胞通過人為作用將其限制在有限的空間區(qū)域中，同時(shí)保持細(xì)菌的生物活性，達(dá)到反復(fù)利用的目的，這就是固定化微生物技術(shù)。常見的固定化載體和包埋材料為聚乙烯醇、海藻酸鈉、瓊脂、明膠等。然而，利用這些化學(xué)載體固定化光合細(xì)菌常會出現(xiàn)抑制細(xì)胞的生物活性，降低體系的傳質(zhì)速率等問題，從而在一定程度上影響了其對有機(jī)廢水的處理能力。因此，開發(fā)廉價(jià)、高效的新型載體成為固定化光合細(xì)菌發(fā)展的必然趨勢。菌絲球是由霉菌或放線菌在培養(yǎng)過程中自動(dòng)聚集形成的具有一定機(jī)械強(qiáng)度和大小的球狀顆粒物，它們是由菌絲纏繞而成，易于吸附其他顆粒物質(zhì)。菌絲球具有諸多優(yōu)點(diǎn):
(I)具有一定的親疏水平衡值，有利于細(xì)菌的附著；(2)沉降性能良好，易于固液分離；
(3)菌絲球表面有很多空隙，傳質(zhì)擴(kuò)散阻力??；(4)成球和生長條件寬泛，生產(chǎn)成本低廉；
(5)具有一定的機(jī)械強(qiáng)度，能夠抵抗較大的水流剪切力。菌絲球的這些優(yōu)點(diǎn)也是作為菌體細(xì)胞附著生長的載體所應(yīng)具備的特點(diǎn)，即具有一定的機(jī)械強(qiáng)度、優(yōu)越的物理形狀和傳質(zhì)性能，以及無毒性。因此，可以利用菌絲球的吸附作用，將具有特殊降解功能的光合細(xì)菌固定在霉菌菌絲形成的純生 物質(zhì)載體上，構(gòu)建“混合菌絲球”。這樣形成的“混合菌絲球”有望對有機(jī)廢水具有高效的處理能力，將是今后廢水處理領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。而與此有關(guān)的研究國內(nèi)外卻尚未見有報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種菌絲球吸附光合細(xì)菌形成混合菌絲球的方法，該方法提高了游離光合細(xì)菌處理有機(jī)廢水時(shí)出水的水質(zhì)，并利用化學(xué)載體固定時(shí)不抑制光合細(xì)菌的細(xì)胞生物活性，提高了體系的傳質(zhì)速率，在保證光合細(xì)菌生長活性的前提下，提高了對有機(jī)廢水的處理效果。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
菌絲球吸附光合細(xì)菌形成混合菌絲球的方法，所述方法包括孢子懸液的制備、菌絲球的制備、光合細(xì)菌細(xì)胞懸液的制備及吸附法混合菌絲球的制備，所述孢子懸液的制備是在生長的霉菌孢子使孢子脫落并懸浮于生理鹽水中，置空氣浴振蕩器中震蕩，使孢子呈均勻分散狀態(tài)，即得孢子懸液；菌絲球制備，首先配制菌絲球液體培養(yǎng)基，取葡萄糖，KH2P04，MgS04 -7H20加入無菌去離子水中，用NaOH和HCl調(diào)節(jié)pH，攪拌均勻，即為菌絲球液體培養(yǎng)基；培養(yǎng)菌絲球，取培養(yǎng)基滅菌，配制、培養(yǎng)基含霉菌孢子振蕩培養(yǎng)，成菌絲球后，保存在無菌生理鹽水中備用；制備光合細(xì)菌細(xì)胞懸液，配制光合細(xì)菌液體培養(yǎng)基取葡萄糖，酵母膏、尿素、2S04、蛋白胨，KH2P04, K2HP04, CaS04, MgS04.7H20 加入蒸餾水中，NaOH 和 HCl 調(diào)節(jié)PH，攪拌均勻，即為光合細(xì)菌液體培養(yǎng)基；光合細(xì)菌的富集培養(yǎng)，配制細(xì)菌液體培養(yǎng)基，將光合細(xì)菌打散、混勻，進(jìn)行黑暗好氧培養(yǎng)，培養(yǎng)后取出備用；光合細(xì)菌細(xì)胞懸液的制備，將培養(yǎng)液于培養(yǎng)棄去上清液，收集菌體，將菌體重新懸浮于無菌生理鹽水中，配得光合細(xì)菌細(xì)胞懸液；吸附法制備混合菌絲球，將備用的菌絲球沖洗干凈，裝光合細(xì)菌細(xì)胞懸液的錐形瓶中，用NaOH和HCl調(diào)節(jié)pH，黑暗好氧培養(yǎng)即獲得霉菌與光合細(xì)菌所形成的混合菌絲球。所述的菌絲球吸附光合細(xì)菌形成混合菌絲球的方法，所述孢子懸液的制備:在無菌操作臺上，用接種環(huán)輕刮斜面固體培養(yǎng)基上生長的霉菌孢子，使孢子脫落，用10毫升無菌生理鹽水反復(fù)沖洗固體斜面，直至孢子懸浮于生理鹽水中，用移液管將沖洗后的含有霉菌孢子的生理鹽水移至100毫升錐形瓶中，添加無菌去離子水，使每毫升去離子水中含有孢子約108個(gè)，然后置于空氣浴振蕩器中震蕩I小時(shí)，使孢子呈均勻分散狀態(tài)，即得孢子懸液。
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所述的菌絲球吸附光合細(xì)菌形成混合菌絲球的方法，所述菌絲球的制備:配制菌絲球液體培養(yǎng)基，稱取葡萄糖0.1 20克，蛋白胨0.1 20克，KH2P04 0.1 10克，MgS04.7Η20
0.ΟΓ Ο克加入到1000毫升無菌去離子水中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的NaOH和10%的HCl調(diào)節(jié)pH 5.(Tl0.0，攪拌均勻，即為菌絲球液體培養(yǎng)基。所述的菌絲球吸附光合細(xì)菌形成混合菌絲球的方法，所述菌絲球的制備:培養(yǎng)菌絲球，取100毫升菌絲球液體培養(yǎng)基，倒入250毫升錐形瓶中進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，滅菌溫度為115 1:或121 °C，滅菌時(shí)間為30分鐘，在無菌操作臺上，用無菌移液管移取孢子懸液于滅菌冷卻后的錐形瓶中，配制成每毫升液體培養(yǎng)基含霉菌孢子濃度約103 106個(gè)，將錐形瓶用無菌紗布封口后置于空氣浴振蕩器中進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，其中振蕩器轉(zhuǎn)速為10(Γ200轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)溫度為2(T35°C，培養(yǎng)2飛天待形成大小均勻且較為密實(shí)的菌絲球后，取出過濾，收集菌絲球，保存在無菌生理鹽水中備用。所述的菌絲球吸附光合細(xì)菌形成混合菌絲球的方法，所述葡萄糖為蔗糖，可溶性淀粉；蛋白胨為牛肉膏、酵母膏，馬鈴薯，NaN03、尿素。所述的菌絲球吸附光合細(xì)菌形成混合菌絲球的方法，所述光合細(xì)菌細(xì)胞懸液的制備:配制光合細(xì)菌液體培養(yǎng)基，稱取葡萄糖0.Γ10克，酵母膏0.Γ20克，ΚΗ2Ρ04 0.Γ Ο克，Κ2ΗΡ04 0.Γ5克，CaS04 0.1 5克，MgS04.7H20 0.01 10克加入到1000毫升蒸餾水中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的NaOH和10%的HCl調(diào)節(jié)pH 5.(Tl0.0，攪拌均勻，即為光合細(xì)菌液
體培養(yǎng)基。所述的菌絲球吸附光合細(xì)菌形成混合菌絲球的方法，所述葡萄糖為丙酸鈉、乙酸鈉、可溶性淀粉，酵母膏為牛肉膏，NaN03、尿素、(NH4) 2S04、蛋白胨。所述的菌絲球吸附光合細(xì)菌形成混合菌絲球的方法，所述光合細(xì)菌細(xì)胞懸液的制備:光合細(xì)菌的富集培養(yǎng)，配制100毫升光合細(xì)菌液體培養(yǎng)基，倒入250毫升錐形瓶中進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，滅菌溫度為115 1:或121 °C，滅菌時(shí)間為30分鐘，取出錐形瓶冷卻至室溫。用接種環(huán)移取1飛環(huán)固體培養(yǎng)基中保存的光合細(xì)菌至錐形瓶內(nèi)，用無菌玻璃球?qū)⒐夂霞?xì)菌打散、混勻，取出玻璃球，用黑布將錐形瓶周圍包好，置于空氣浴振蕩器中進(jìn)行黑暗好氧培養(yǎng)，其中振蕩器轉(zhuǎn)速為6(Γ200轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)溫度為1(T60 °C;培養(yǎng)2飛天后取出備用，SP得光合細(xì)菌富集培養(yǎng)液。所述的菌絲球吸附光合細(xì)菌形成混合菌絲球的方法，所述光合細(xì)菌細(xì)胞懸液的制備:將光合細(xì)菌富集培養(yǎng)液于培養(yǎng)溫度為4°C，振蕩器轉(zhuǎn)速為6 000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下高速離心10分鐘，棄去上清液，收集菌體，將菌體細(xì)胞重新懸浮于無菌生理鹽水中，使每毫升生理鹽水含有光合細(xì)菌細(xì)胞約103 108個(gè)，即配得光合細(xì)菌細(xì)胞懸液。所述的菌絲球吸附光合細(xì)菌形成混合菌絲球的方法，所述吸附法制備混合菌絲球:用無菌生理鹽水將備用的菌絲球沖洗干凈，然后按照廣30%的體積比加入裝有100毫升光合細(xì)菌細(xì)胞懸液的錐形瓶中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的NaOH和10%的HCl調(diào)節(jié)pH 5.(Tl0.0，用黑布將錐形瓶周圍包好，置于空氣浴振蕩器中黑暗好氧培養(yǎng)18 48小時(shí)，培養(yǎng)溫度為1(T60°C，振蕩器轉(zhuǎn)速為6·(Γ200轉(zhuǎn)/分鐘，即獲得霉菌與光合細(xì)菌所形成的混合菌絲球。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)與效果是:
本發(fā)明以霉菌形成的菌絲球?yàn)樯镔|(zhì)載體，通過菌絲球的吸附作用將光合細(xì)菌固定在菌絲球表面及內(nèi)部孔隙中，形成“混合菌絲球”，從而達(dá)到固定化光合細(xì)菌的目的，克服了投加光合細(xì)菌游離細(xì)胞處理有機(jī)廢水所存在的一系列問題。本發(fā)明以光合細(xì)菌的吸附率作為考察指標(biāo)，表明霉菌所形成的菌絲球?qū)夂霞?xì)菌細(xì)胞顯示出良好的吸附效果，且形成的“混合菌絲球”具有較好的沉降性能和機(jī)械強(qiáng)度。本發(fā)明在保證光合細(xì)菌生長活性的前提下，減少了光合細(xì)菌的菌體流失。相比其他包埋材料而言，提高了對有機(jī)廢水的處理效果。此外，通過霉菌的吸附作用固定化光合細(xì)菌構(gòu)建“混合菌絲球”的方法還具有操作簡便、培養(yǎng)成本低、培養(yǎng)時(shí)間短、可重復(fù)使用等優(yōu)點(diǎn)，對大規(guī)模利用光合細(xì)菌處理有機(jī)廢水具有重要意義。


圖1為培養(yǎng)得到的“單一菌絲球”外觀顯微鏡 圖2為培養(yǎng)得到的“混合菌絲球”外觀顯微鏡圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。本發(fā)明所涉及的光合細(xì)菌是一株可降解鄰氯苯酚的沼澤紅假單胞菌PSB-1D(Rhodopseudomonas palustris PSB-1D),16SrDNA 序列為 GenBank Accession N0.HM068966。該菌是已知現(xiàn)有菌種,各大菌種保藏庫均有保存。本發(fā)明所涉及的霉菌為一株命名為DH-1的青霉菌(Penicillium sp.)。本發(fā)明采用HZQ-C型空氣浴震蕩器作為微生物培養(yǎng)設(shè)備。本發(fā)明的高壓蒸汽滅菌采用LD2X-40BI電熱壓力蒸汽滅菌器。本發(fā)明采用的無菌水為經(jīng)過高壓蒸汽滅菌鍋處理的去離子水，處理?xiàng)l件為溫度121 °C，壓力0.105Mpa的條件下維持30分鐘。實(shí)施例1:
一、孢子懸液的制備
在無菌操作臺上，用接種環(huán)輕刮斜面固體培養(yǎng)基上生長的青霉菌DH-1孢子，使孢子脫落。用10 mL無菌生理鹽水反復(fù)沖洗固體斜面，直至孢子懸浮于生理鹽水中。用移液管將沖洗后含有青霉菌DH-1孢子的生理鹽水移至100毫升錐形瓶中，添加無菌去離子水，使每毫升去離子水中含有孢子約108個(gè)。然后置于空氣浴振蕩器中震蕩I小時(shí)，使孢子呈均勻分散狀態(tài)，即得孢子懸液。二、菌絲球的制備
1.配制菌絲球液體培養(yǎng)基
稱取葡萄糖10克，蛋白胨5克，KH2P04 I克，MgS04.7H20 0.5克加入到1000毫升無菌去離子水中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的NaOH和10%的HCl調(diào)節(jié)pH 7.0，攪拌均勻。即為菌絲球液體培養(yǎng)基。2.培養(yǎng)菌絲球
取100毫升菌絲球液體培養(yǎng)基，倒入250毫升錐形瓶中進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，其中，滅菌溫度為115°C，滅菌實(shí)踐為30分鐘。在無菌操作臺上，用無菌移液管移取孢子懸液于滅菌冷卻后的錐形瓶中，配制成每毫升液體培養(yǎng)基含霉菌DH-1孢子濃度約106個(gè)。將錐形瓶用無菌紗布封口后置于空氣浴振蕩器中進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，振蕩器轉(zhuǎn)速為130轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)溫度為30°C。培養(yǎng)3天待形成大小均勻且較為密實(shí)的菌絲球后，取出過濾，收集菌絲球，保存在無菌生理鹽水中備用。三、光合細(xì)菌細(xì)胞懸液的制備 1.配制光合細(xì)菌液體培養(yǎng)基
稱取葡萄糖2克，酵母膏0.2克，KH2P04 0.6克，K2HP04 0.4克，CaS04 0.2克，MgS04.7Η20 0.3克加入到1000毫升蒸餾水中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的NaOH和10%的HCl調(diào)節(jié)pH 7.0，攪拌均勻，即為光合細(xì)菌液體培養(yǎng)基。2.光合細(xì)菌的富集培養(yǎng)
配制100毫升光合細(xì)菌液體培養(yǎng)基，倒入250毫升錐形瓶中進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，其中，滅菌溫度為115°C，滅菌時(shí)間為30分鐘。取出錐形瓶冷卻至室溫。用接種環(huán)移取3環(huán)固體培養(yǎng)基中保存的光合細(xì)菌PSB-1D至錐形瓶內(nèi)，用無菌玻璃球?qū)⒐夂霞?xì)菌打散、混勻。取出玻璃球，用黑布將錐形瓶周圍包好，置于空氣浴振蕩器中進(jìn)行黑暗好氧培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為30°C，搖床轉(zhuǎn)速為150轉(zhuǎn)/分鐘。培養(yǎng)4天后取出備用，即得光合細(xì)菌PSB-1D富集培養(yǎng)液。3.光合細(xì)菌細(xì)胞懸液的制備
將光合細(xì)菌PSB-1D富集培養(yǎng) 液于培養(yǎng)溫度4°C，轉(zhuǎn)速6 000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下高速離心10分鐘，棄去上清液，收集菌體。將菌體細(xì)胞重新懸浮于無菌生理鹽水中，使每毫升生理鹽水含有PSB-1D細(xì)胞約106個(gè)，即配得光合細(xì)菌細(xì)胞懸液。四、吸附法制備“混合菌絲球”
用無菌生理鹽水將備用的菌絲球沖洗干凈，然后按照10%的體積比加入裝有100毫升光合細(xì)菌細(xì)胞懸液的錐形瓶中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的NaOH和10%的HCl調(diào)節(jié)pH 7.0。用黑布將錐形瓶周圍包好，置于空氣浴振蕩器中黑暗好氧培養(yǎng)24 h，培養(yǎng)溫度為30°C，振蕩器轉(zhuǎn)速為130轉(zhuǎn)/分鐘，即獲得霉菌與光合細(xì)菌所形成的“混合菌絲球”。對“混合菌絲球”采用“顏色浸潤法”測其傳質(zhì)性能，與海藻酸鈉固定化細(xì)胞PSB-1D制得的顆粒進(jìn)行比較。結(jié)果表明，本實(shí)施方式制得的“混合菌絲球”其傳質(zhì)性能好于海藻酸鈉固定化顆粒的傳質(zhì)性能。通過測量吸附反應(yīng)前后光合細(xì)菌細(xì)胞懸液吸光度0D490，計(jì)算菌絲球?qū)夂霞?xì)菌PSB-1D的吸附率E:
權(quán)利要求
1.菌絲球吸附光合細(xì)菌形成混合菌絲球的方法，所述方法包括孢子懸液的制備、菌絲球的制備、光合細(xì)菌細(xì)胞懸液的制備及吸附法混合菌絲球的制備，其特征在于，所述孢子懸液的制備是在生長的霉菌孢子使孢子脫落并懸浮于生理鹽水中，置空氣浴振蕩器中震蕩，使孢子呈均勻分散狀態(tài)，即得孢子懸液；菌絲球制備，首先配制菌絲球液體培養(yǎng)基，取葡萄糖，KH2P04, MgS04 · 7H20加入無菌去離子水中，用NaOH和HCl調(diào)節(jié)pH，攪拌均勻，即為菌絲球液體培養(yǎng)基；培養(yǎng)菌絲球，取培養(yǎng)基滅菌，配制、培養(yǎng)基含霉菌孢子振蕩培養(yǎng)，成菌絲球后，保存在無菌生理鹽水中備用；制備光合細(xì)菌細(xì)胞懸液，配制光合細(xì)菌液體培養(yǎng)基取葡萄糖，酵母膏、尿素、2S04、蛋白胨，KH2P04, K2HP04, CaS04, MgS04 · 7H20加入蒸餾水中，NaOH和HCl調(diào)節(jié)pH，攪拌均勻，即為光合細(xì)菌液體培養(yǎng)基；光合細(xì)菌的富集培養(yǎng)，配制細(xì)菌液體培養(yǎng)基，將光合細(xì)菌打散、混勻，進(jìn)行黑暗好氧培養(yǎng)，培養(yǎng)后取出備用；光合細(xì)菌細(xì)胞懸液的制備，將培養(yǎng)液于培養(yǎng)棄去上清液，收集菌體，將菌體重新懸浮于無菌生理鹽水中，配得光合細(xì)菌細(xì)胞懸液；吸附法制備混合菌絲球，將備用的菌絲球沖洗干凈，裝光合細(xì)菌細(xì)胞懸液的錐形瓶中，用NaOH和HCl調(diào)節(jié)pH，黑暗好氧培養(yǎng)即獲得霉菌與光合細(xì)菌所形成的混合菌絲球。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的菌絲球吸附光合細(xì)菌形成混合菌絲球的方法，其特征在于，所述孢子懸液的制備在無菌操作臺上，用接種環(huán)輕刮斜面固體培養(yǎng)基上生長的霉菌孢子，使孢子脫落，用10毫升無菌生理鹽水反復(fù)沖洗固體斜面，直至孢子懸浮于生理鹽水中，用移液管將沖洗后的含有霉菌孢子的生理鹽水移至100毫升錐形瓶中，添加無菌去離子水，使每毫升去離子水中含有孢子約108個(gè)，然后置于空氣浴振蕩器中震蕩I小時(shí)，使孢子呈均勻分散狀態(tài)，即得孢子懸液。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的菌絲球吸附光合細(xì)菌形成混合菌絲球的方法，其特征在于，所述菌絲球的制備配制菌絲球液體培養(yǎng)基，稱取葡萄糖O. f 20克，蛋白胨O.廣20克，KH2P04 O. Γ10克，MgS04 ·7Η20 O. ΟΓ Ο克加入到1000毫升無菌去離子水中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的NaOH和10%的HCl調(diào)節(jié)pH 5. (TlO. 0，攪拌均勻，即為菌絲球液體培養(yǎng)基。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的菌絲球吸附光合細(xì)菌形成混合菌絲球的方法，其特征在于，所述菌絲球的制備培養(yǎng)菌絲球，取100毫升菌絲球液體培養(yǎng)基，倒入250毫升錐形瓶中進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，滅菌溫度為115 1或121 °C，滅菌時(shí)間為30分鐘，在無菌操作臺上，用無菌移液管移取孢子懸液于滅菌冷卻后的錐形瓶中，配制成每毫升液體培養(yǎng)基含霉菌孢子濃度約103 106個(gè)，將錐形瓶用無菌紗布封口后置于空氣浴振蕩器中進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，其中振蕩器轉(zhuǎn)速為100 200轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)溫度為2(T35°C，培養(yǎng)2飛天待形成大小均勻且較為密實(shí)的菌絲球后，取出過濾，收集菌絲球，保存在無菌生理鹽水中備用。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的菌絲球吸附光合細(xì)菌形成混合菌絲球的方法，其特征在于，所述葡萄糖為蔗糖，可溶性淀粉；蛋白胨為牛肉膏、酵母膏，馬鈴薯，NaN03、尿素。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的菌絲球吸附光合細(xì)菌形成混合菌絲球的方法，其特征在于，所述光合細(xì)菌細(xì)胞懸液的制備配制光合細(xì)菌液體培養(yǎng)基，稱取葡萄糖O. f 10克，酵母膏O.Γ20 克，KH2P04 O. Γ10 克，Κ2ΗΡ04 O. I 5 克，CaS04 O. I 5 克，MgS04 · 7H20 O. 01 10 克加入到1000毫升蒸餾水中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的NaOH和10%的HCl調(diào)節(jié)pH 5. (TlO. 0，攪拌均勻，即為光合細(xì)菌液體培養(yǎng)基。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的菌絲球吸附光合細(xì)菌形成混合菌絲球的方法，其特征在于，所述葡萄糖為丙酸鈉、乙酸鈉、可溶性淀粉，酵母膏為牛肉膏，NaN03、尿素、(NH4)2S04、蛋白胨。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的菌絲球吸附光合細(xì)菌形成混合菌絲球的方法，其特征在于，所述光合細(xì)菌細(xì)胞懸液的制備光合細(xì)菌的富集培養(yǎng)，配制100毫升光合細(xì)菌液體培養(yǎng)基，倒入250毫升錐形瓶中進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，滅菌溫度為115 1或121 °C，滅菌時(shí)間為30分鐘，取出錐形瓶冷卻至室溫；用接種環(huán)移取I飛環(huán)固體培養(yǎng)基中保存的光合細(xì)菌至錐形瓶內(nèi)，用無菌玻璃球?qū)⒐夂霞?xì)菌打散、混勻，取出玻璃球，用黑布將錐形瓶周圍包好，置于空氣浴振蕩器中進(jìn)行黑暗好氧培養(yǎng)，其中振蕩器轉(zhuǎn)速為6(Γ200轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)溫度為1(Γ60V ;培養(yǎng)2飛天后取出備用，即得光合細(xì)菌富集培養(yǎng)液。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的菌絲球吸附光合細(xì)菌形成混合菌絲球的方法，其特征在于，所述光合細(xì)菌細(xì)胞懸液的制備將光合細(xì)菌富集培養(yǎng)液于培養(yǎng)溫度為4°C,振蕩器轉(zhuǎn)速為6000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下高速離心10分鐘，棄去上清液，收集菌體，將菌體細(xì)胞重新懸浮于無菌生理鹽水中，使每毫升生理鹽水含有光合細(xì)菌細(xì)胞約103 108個(gè)，即配得光合細(xì)菌細(xì)胞懸液。
10.根據(jù)權(quán)利要求I所述的菌絲球吸附光合細(xì)菌形成混合菌絲球的方法，其特征在于，所述吸附法制備混合菌絲球用無菌生理鹽水將備用的菌絲球沖洗干凈，然后按照廣30%的體積比加入裝有100毫升光合細(xì)菌細(xì)胞懸液的錐形瓶中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的NaOH和10%的HCl調(diào)節(jié)pH 5. (TlO. 0，用黑布將錐形瓶周圍包好，置于空氣浴振蕩器中黑暗好氧培養(yǎng)18 48小時(shí)，培養(yǎng)溫度為1(T60°C，振蕩器轉(zhuǎn)速為6(Γ200轉(zhuǎn)/分鐘，即獲得霉菌與光合細(xì)菌所形成的混合菌絲球。
全文摘要
菌絲球吸附光合細(xì)菌形成混合菌絲球的方法，涉及一種環(huán)境生物工程混合菌絲球的方法，包括孢子懸液的制備、菌絲球的制備、光合細(xì)菌細(xì)胞懸液的制備及吸附法混合菌絲球的制備，得孢子懸液后進(jìn)行菌絲球制備菌絲球液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)菌絲球，成菌絲球后，制備光合細(xì)菌細(xì)胞懸液，光合細(xì)菌的富集培養(yǎng)，配制細(xì)菌液體培養(yǎng)基，將光合細(xì)菌打散、混勻，進(jìn)行黑暗好氧培養(yǎng)；光合細(xì)菌細(xì)胞懸液的制備，將培養(yǎng)液于培養(yǎng)棄去上清液，配得光合細(xì)菌細(xì)胞懸液；將備用的菌絲球沖洗干凈，用NaOH和HCl調(diào)節(jié)pH，黑暗好氧培養(yǎng)即得混合菌絲球。本發(fā)明提高了對有機(jī)廢水的處理效果，對大規(guī)模利用光合細(xì)菌處理有機(jī)廢水具有重要意義。
文檔編號C02F3/34GK103255123SQ20131015170
公開日2013年8月21日 申請日期2013年4月27日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月27日
發(fā)明者董怡華, 馮治宇, 張玉革, 林靜雯 申請人:沈陽大學(xué)